Способ определения @ -экзотоксина в инсектицидных биопрепаратах Советский патент 1987 года по МПК G01N33/50 

где

1359744

Изобретение относится-к способам анализа инсектицидных биопрепаратов и молсет быть использовано для контроля содержания -экзотоксина и , g нуклеотидных примесей в процессе ферментации, а также в получаемых биопрепаратах, выборе новых перспективных продуцентов /3 -экзотоксина и совершенствовании биотехнологи- 10 ческих приемов производства средств защиты растений для оценки качества инсектицидных препаратов в результате длительного хранения, а также для санитарно-гигиенического контро- 16 я состояния окружающей среды о

Целью изобретения является ynpopu-- ние и повьшшние чувствительности способа,,

Поставленная цель достигается 20 путем отбора проб, выделения препара- та . ft -экзотоксина методом осаждения соля1-ш металлов, отделения и -экзотоксина от нуклеотидных примесей хроматографией на пластинах в системе растворителей пропанол - вода --аммиак в соотношении 15:5:2 с последую- ш;им фотометрированиём, после хрома- тографирования пятна с хроматограм- мы растворяют в воде при рН 3,0 - 30 6,6,затем вещества идентифицируют по нтенсивностям на принадлежность / - экзотоксину или другим нуклеотидам в точках, соответствующих максимумам производных спектра поглощения, 35 отраже шя или флуоресценции, а количество определяют по максимальным амплитудам соответствующих полос анаогичных спектров -экзотоксина ли нуклеотидов при чувствительное- 40 ти спектральных методов не менее 7,5- мкг/мл.

П р и м е РО Навеску 250 мг биопрепарата для определения содержания - экзотоксина и нуклеотидных.примесей растворяют в 2,5 мл-0,1 н, уксусной кислоте,, осадок отфильтровывают, к аствору добавляют соль ацетата баия или кальция (0,2 н,-0,1 мл) реципитат отделяют от раствора центифугированием и осадок растворяют в 0,1 Но НС1 и и хроматографирутот. в течение 15-20 мин. После хромато- графирования пятна с хроматограммы астворяют в воде при рН 3,0-6,6, затем идентифицируют растворы на принадлежность в В-экзотоксину или со- утствующ;им нуклеотидам путем сопос- 7,5 тавления спектров пятен хроматограм- 7,5

мы и опре дам ных отид надл опре элюа ноше ра п 264, очищ ющие 300 0,9

жани ных нию

волн необ конц леот 35 м фуги вани 2-3

ния на о же 0

для

45 0,2

тида . элюц экзо прои

50 на в ная сост ству ти о

55 воль Щ 14

сост

мы и эталонных растворов, количество определяют по максимальным амплиту- дам соответствующих полос аналогичных спектров -экзотоксина или нуклеотидов. Идентификацию пятна на принадлежность уЗ-экзотоксину, например, определяют спектрофотометрированием элюата с него с сопоставлением соотношений интенсивностей в точках спектра поглощения с длинами волн 300, 264, 254, 232 нм и эталонного (высоко- очищенного) образца, имеющего следующие соотношения интенсивностей: 300 НМ/254НМ 0,18; 267 нм/254 нм 0,91; 232 нм/254 нм 0,48.

Количественное определение содержания -экзотоксина или нуклеотидных примесей осуществляют по уравнению Ламберта-Бера:

D

,- (мг/мл),

где

искомая концентрация; D - измеряемая оптическая плотность;Е - удельный коэффициент экстинции о

Е для f) -экзотоксина при длине волны 254 нм равен 80 л/г.см. Время. необходимое для очистки и определения концентрации /3 -экзотоксина или нуклеотидных примесей составляет 30- 35 мин и включает общее время центрифугирования 10 мин, хроматографиро- вания 15-20 мин и спектрофотометрии 2-3 мино

Спектральная аппаратура для измерения элюата с пятен хроматограмм должна обладать чувствительностью не ниже 0,0010,

7,5 7,5

В стандартной минимальной пробе для разгонки хроматограмм- берут

5 0,2 мкл /3-экзотоксина или нуклеотида) с концентрацией 1 мг/мл. При . элюции с хроматограммы 0,2 мкл ft - экзотоксина с концентрацией 1 мг/мл происходит разбавление jb -экзотокси-.

0 на в 1 мл НС1, Таким образом, конечная . концентрация /3 -экзотоксина составляет 0,2 мкг/мл, что соответствует О , 03 едо оптической плотности о На приборе СФ-26 с цифровым

5 вольтметром постоянного тока типа . Щ 1413 эта величина при, ошибке 2,5%

составляет 40 едо, что соответствует

-4

10 ед ,ъ

D или чувствительности10 мкг/млс

31359744

Чувствительность предлагаемого(Цов, растворение осадка с послеручуспособа определения j -экзотоксинаЩим хроматографическим разделением

позволяет определить его при содер-и спектрофотометрическим измерением,

жашга 0,02 мкг/мл и более (по срав- отличающийся тем, что, нению с известным .способом - 0,1 мкг) с целью упрощения и повьщгения чувст- с ошибкой 3%,витальности, хроматографию осуществляют на пластинах в системе раство- Формула изобретениярителей пропанол - вода - аммиак в

Способ определения |3-экзотокси- ю соотношении 13:5:2, элюцию проводят на в инсектицидных биопрепаратах,водой рН 3,0-6,6, а измерения осувключакяций осаждение смеси нуклеоти-ществляют при 254 или 267 нмо

Изобретение относится к способам анализа инсектицидных препаратов. Цель изобретения - упрощение и повышение чувствительности способа Отделяют / -экз отоксин от нуклеотидных примесей в системе растворителей про- панол - вода - аммиак. Пятна с.хрома- тограммы растворяют в воде и вещества идентифицируюто Их количество определяют по максимальным амплитудам соответствующих полос аналогичных спектров /3 -экзотоксина или нук- леотидоВо Способ можно использовать для санитарно-гигиенического контроля состояния окружающей среды и оцен-. ки качества инсектицидн гх препаратов при длительном хранении. 00 ел ;о Nj