Способ выявления антигенов Советский патент 1986 года по МПК A61K39/00 

Изобретение относится к медицине а именно к лабораторному выявлению антигенов в оргакн мсо Цель изобретения - ускорение и упрощение технической постановки способа выявления антигенов при сохранении его специфичности и чувствительности, Способ осуществляют следующим образом. Забирают одну-две капли крови (0,05-0,1 мл) из пальца обследуемого человека в центрифужную пробирку с 0,1-0,2 мл 5%-ного свежеприготовленного раствора цитрата натриядля предупреждения свертьшания крови. После тщательного встряхивания пробирки в нее добавляют для лизирования эритроцитов 0,8-0,9 мл дистиллированной воды. Суспензию клеток центрифугируют 5-6 мин при 1500 об./мин, после чего недостаточную жидкость отсасывают пипеткой, а осадок лейкоцитов ресуспендируют в 0,1-0,2 мл изотонического раствора хлорида натрия, К полученной взвеси лейкоцитов добавляют 0,10,2 мл 0,5%-ной взвеси эритроцитар . ного антигенного диагностикума и инкубируют смесь при 37-37,5°С в течение мин, после чего ее цент фугируют при 1500 об,/минв течение 10-15 мин,надосадочнуюжидкос,ть удаляют с помощью пипетки, а осадок ресус пендируют в капле любой интактной сыво ротки (бычьей,лошадиной,человеческой Из под1ученной суспензии клеток дела ют мазок который высушивают, фикси руют в метиловом (3-4 мин) или эти. ловом (20-25 мин) спирте и окрашива ют по Романовскому-Гимза, Просматри вают в мазке под микроскопом при 900-кратнбм увеличении 100 лимфоцитов, отмечая среди них число (в %) лейкоцитов, фиксировавших на себе три и более эритроцита (розеткообразую1цие клетки РОК). Пример 1, Через 10 мин пос ле подкожного введения крысам про- зарина (50 мкг/кг) из хвоста получе но 0,1 мл крови для осуществления .предлагаемого способа, после декапи тации собрано 5 мл крови для осуществления известного метода розет кообразования, Установлено, что в крови интактных крыс число розеток, специфичных прозерину, составляло соответственно 6,2±1,12 и 6,0+0,80% а в опыте через 10 мин после введения прозерина оно достигало соответственно 30,2±2,74 и 29,0±1,93%. Сравнительный анализ двух способов выявления антигена показал, что предлагаемый способ не уступает по чувствительности и специфичности известному, о чем свидетельствует практически равное число иммунных лимфоцитов, образующих розетки с эритроцитами, сенсибилизированными прозерином, которые выявлены как предлагаемым, так и известным способами. Пример 2.В крови крыс, которым вводят под кожу 0,3 мл коммерческого раствора риккетсиозного антигена Провачека, с помощью предлагаемого способа выявлено 21,3+ +1,29% РОК, с помощью известного 23,4±1,4%, иммунных к антигену Провачека, Обследование крови детей больных дизентерией и высевающих палочку Флекснера показало, что число РОК, специфичных антигену последней колебалось в пределах от 30 до 40%, тогда как число РОК, специфичных антигенам палочки дизентерии Зонне или Григорьева-Шига - в пределах 10%. Напротив, если возбудителем болезни являлась палочка дизентерии Зонне, то число РОК, специфичных ее антигену, составляло около 40%, а специфичных антигенам других возбудителей кишечной группы не превьшало 10%. При доказательстве того, предлагаемый способ не утрачивает специфичности по сравнению с известным, установлено, что в крови животных, которым вводился сыпно-тифозньй антиген Провачека, обоими способами не выявляются лимфоциты, иммунные к .близкому по антигенной структуре сьтно-тифозному возбудителю Музера. I Результаты осуществления предлагаемого способа с использованием 0,05 мл исследуемой крови, 0,1 мл диагностикума, инкубацией длительност1 ю 5 и 6 мин и температурой 37,0 37,5°С, приведены в табл.. Результаты осуществления предлагаемого способа с использованием 0,1 мл исследуемой крови,.0,2 мл диагностикума, инкубацией длительностью 5 и 6 мин и температурой з7,0 и 37,5С приведены в табл. 2.

Преимущества способа заключаются в технической простоте его исполнения, быстроте осу1цествления (60 90 мин), практически немедленном выявлении с его помощью антигенов, попавших в организм, необходимости для анализа микрообъема крови, забираемой из пальца обследуемого, специфичиости, высокой чувствительности, возможности использования в случае выявления микробных антигенов промьшшенных эритроцитарных диагностикумов, необходимости минимального количества доступных реактивов и оборудования, отсутствии необходимости привлечения для осуществления способа высококвалифицированного пер.сонала. Простота исполнения и экспрессность способа позволяет реализовать его в любых, в том числе и полевых услсэвиях, дают возможность очень раннего и быстрого выявления антигенов в организме.

Формула изобретения

Способ выявления антигенов путем добавления к клеткам.периферической.

крови эритроцитарного антигенного диагностикума с последующей инкуба1щей и подсчетом розегкообразующих клеток, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа,

из 0,05-0,1 мл периферической крови выделяют лейкоциты, добавляют к ним 0,1-0,2 мл диагностикума, инкубируют при 37-37, в течение 56 мин и центрифугируют.

I

Таблица 1

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторному выявлению антигенов в организме. Цель изобретения - упрощение технической постановки способа выявления антигенов . В пробирку с цитратной кровью добавляют дистиллированную, воду. Суспензию клеток центрифугиpywTjf надоеадочную жидкость отсасывают . Осадок лейкоцитов ресуспендируют. К взвеси лейкоцитов добавляют 0,1-0,2 мл взвеси эритроцитариого антигенного диагностикума. Смесь инкубируют при температуре 37-37, в течение 5-6 мин и центрифугируют. Надосадочную жидкость удаляют, осадок ресуспендируют в интактиой сыворотке. Из полученной суспензии клеток делают мазок. Высушивают мазок, фиксируют его и окрашивают по Романовскому-Гимза. Под микроскопом в мазке подсчитывают число розетко(Л образукнцих клеток. 2 табл.

26,0±1,3 26,5±0,9 25,5+1,4 26,6+1,4

Отличия достоверны при Р 0,05.

526,6tl,8 27,8+1,3

626,0+1,3 26,5+1,3

Отличия достоверны при Р 0,05,

Р 0,1

Р 0,1

Таблица 2

Р 0,1 Р 0,1