Способ диагностики миастении Советский патент 1987 года по МПК G01N33/50 

, Изобретение относится к медицине а именно к лабораторной диагностике заболеваний, и может быть использовано для распознавания миастении.

Целью изобретения является повышение точности диагностики за счет оценки состояния иммунной системы больного с измененным балансом аце- тилхолина по реакции сенсибилизиро- ванных к нему лимфоцитов крови, усиленно взаимодействующих с эритроцитами барана, нагруженными ацетилхо- лином, что проявляется их повышенным содержанием (Лх-РОК) в крови (20% и более) и снижением их числа до нормальных цифр (10% и менее) через 30 мин после однократного подкожного введения больному 1 мл 0,05%-ного растворагпрозерина (торможение Ах-РОК)о ;

Способ осуществляется следующим образом.

Забирают одну-две капли крови ;(0,05-0,1 мл) из пальца больного в дентрифужную пробирку с 0,1-0,2 мл ,5%-ного свежеприготовленного раствора цитрата для предупреждения свертывания крови. Вводят больному подкожно 1 мл 0,05%-ного раствора про- зерина. Через 30 мин повторно забирают кровь из пальца, как описано ранее. После тщательного встряхивани Пробирки в нее добавляют для лизиро- вания эритроцитов 0,8-0,9 мл дистил- ;лированной воды о Суспензию клеток центрифугируют 5-6 мин при 1500 об/мин после чего надосадочную жидкость отсасьшают пипеткой, а осадок лимфоцитов ресуспендируют в О,1-0,2 мл изото нического раствор а хлорида натрия, К полученной взвеси лейкоцитов добавляют 0,1-0,2 мл 0,5%-ной взвеси эритроцитов, сенсибилизиров анных ацетилхолином, и инкубируют смесь при 37 - 37,5 С в течение 5-6 мин, после чего центрифугируют при I 1500 об/мин в течение 10-15 мин. Надосадочную жидкость удаляют с помощью пипетки, а осадок ресуспендируют в капле любой интактной сьшо- ро-тки (бычьей, лошадиной, человеческой),, Из полученной суспензии клеток делают мазок, которьш высушивают, фиксируют в метиловом (3-4 мин)или этиловом (20-25 мин) спирте и окрашивают по Романовскому-Гимза. Просматривают в мазке под микроскопом при 900-кратном увеличении 100 лимфоци

5 0

5 о 0

5

0

тов, отмечая среди них число (%) лимфоцитов, фиксировавших на себе три и более эритроцита. Зная содержание лимфоцитов (%) в крови больного и общий лейкоцитоз, высчитывают абсолютное содержание лимфоцитов, фиксировавших на себе ацетилхолиновые эритроциты, в 1 мкл крови. Обработку эритроцитов барана глютаровым альдегидом производят, соединяя 0,5 мл 5%-ной взвеси тщательно отмытых свежих эритроцитов с 0,25%-ным свежеприготовленным раствором глютарового альдегида в соотношении 1:1. Смесь вьщерживают при в течение 15 мин, после чего эритроциты тщательно отмьшают от альдегида забуфе- ренным изотоническим раствором хлорида натрия (рН 7,2) и доводят этим же раствором до первоначального объема (5%-ная взвесь). Для сенсибилизации эритроцитов готовят раствор ацетилхолина с концентрацией 200 нг/мл на забуференном физиологическом растворе (рН 6,4), 1 мл 5%-ной взвеси глютаризированных эритроцитов центрифугируют, надосадочную жидкость удаляют, а к осадку эритроцитов приливают 1 мл раствора ацетилхолина. Смесь тщательйо встряхивают и выдерживают при 20-22 С 25-30 мин, после чего эритроциты дважды отмьюают центрифугированием при 1500 об/мин в течение 5 мин изотоническим раствором хлорида натрия (рН 7,2) и им же доводят взвесь до |первоначального объема (5%).

Пример 1, Больнай И., 25 лет, поступила в клинику нервных болезней с жалобами на общую бость, быструю утомляемость рук и ног, затруднение при глотании, попа- Гдание пищи в нос, осиплость голоса при длительном разговоре. Из анамнеза известно, что заболела после физического переутомления, когда стала отмечать быструю, вначале непостоянную, а потом все более длительную утомляемость в ногах. Через 2 мес, во.зник приступ слабости в руках, а спустя еще месяц появились затруднения при жевании, поперхивания при еде. Диагностирована генерализованная форма миастении средней тяжести. Проведено специфическое лечение (ан- тихолинэстеразные препараты), и с улучшением больная выписана. Затем вновь поступила в клинику с ухудшением течения болезни. У больной отмечалось утомление при длительном жевании, слабость мьпшд нижнемимической мускулатуры, осиплость голоса, дисфагия, слабость мышц рук и ног. Больная обследована. Анализ крови и мочи без патологии. На обзорной краниограмме патологии нет. Глазное дно не изменено. При исследовании электровозбудимости мышц обнаружено нарушение нервно-мышечной передачи по миастеническому типу. Иммунологическим исследованием крови больной на содержание лимфоцитов, специфичных ацетилхолину, до и после введения прозерина установлено наличие характерного для миастении ответа. При проведении пробы с использование 0,05 мл крови, взятой из пальца больной до и через 30 мин после введения прозерина, добавления к ней 0,1 мл 5%-ной суспензии эритроцитов барана, нагруженных ацетилхолином, и инкубации смеси при установлено исходное содержание розеткооб- разующих лимфоцитов, равное 43% (1138 в 1 мкл крови), и резкое падение их числа до 13% (165 в 1 мкл крови) после введения прозерина. Пример 2. Больная С., 24 лет, заболела после острого респираторного заболевания и эмоционального перенапряжения. Появилась диплопия в горизонтальной плоскости, однако она была непостоянной. После пребьшания на юге двоение усилилось, опустилось левое веко. Диагностирован базаль- ный лептоменингит. Специфическое лечение эффекта не дало. Заподозрена опухоль мозга, по поводу чего произведена каротидная ангиография слева. Диагноз опухолевого процесса не подтвердился. Затем заподозрена миастения гравис, произведена прозериновая проба, которая дала отрицательный результат. В течение года диагноз поставлен не был. Состояние ухудшилось и больная поступила в клинику. Классическая прозериновая проба от- рицательна. При лабораторных и параклинических методах обследования патологии не выявлено. При проведении иммунологической пробы 0,1. мл крови больной, взятой до и через 30 мин после введения прозерина, соединили с 0,2 мл 5%-ной суспензии эритроцитов барана, нагр5женных ацетилхолином, и инкубировали при

37,. Исходное содержание розетко- образующих лимфоцитов, специфичных ацетилхолину, в крови больной было повышенным и составляло 30% (304 в 1 мкл крови). После введения прозерина оно резко снизилось до 9% (143 в 1 мкл крови), что характеризует ответ, типичный для миастении.

0 Осмотр больной установил наличие

диплонии при взгляде вниз,экзофтальм, левосторонний птоз, ограничение при движении глазных яблок кнаружи и кнутри, нарушение конвергенции. По5 ставлен диагноз: глазная форма миастении. При дальнейшем наблюдении у больной появились слабость в руках и началась генерализация миастенического процесса.

0 Пример 3. Больной Г;, 33 лет, поступил в клинику нервных болезней с жалобами на постоянную резкую боль в поясничной области с иррадиацией в ногу по наружной поверх5 ности бедер и голеней, онемение по наружному краю стоп. Боли усиливаются при движении, ходьбе, кашле. Болен в течение 5 лет, заболел после интенсивной физической нагрузки и

0 переохлаждения. Последнее обострение возникло за 1,5 мес до поступления в клинику также после поднятия тяжести. Лечился амбулаторно, но улучшения не было.

с При обследовании отмечены резкая сглаженность поясничного лордоза, сколиоз с наклоном туловища влево, напряжение мътц от поясничной области, больше слева, ограничение объема

0 движений в поясничном отделе позвоночника, положительный симптом Ласега с двух сторон, больше слева, гиперсте- зия по наружной поверхности голеней. Коленные рефлексы живые, равные, прат

5 вый ахиллов - снижен, левый - не вызьшается.

При рентгенографии позвоночника отмечено сужение межпозвонковой щели между 4-м и 5-м поясничными позвонка0 ми, выраженный поясничный сколиоз, аномалия первого крестцового позвонка.

Диагноз: остеохондроз пояснично- крестцового отдела позвоночника, ко5 решковый болевой синдром вследствие компрессии грыжей диска пятого поясничного корешка слева и частично справа. У больного имеются поражения периферической нервной системы. Ре

.513

зультаты иммунологической пробы: до введения прозерина 6%, после введения 31%. Результаты пробы получены при инкубации при t 0,05 мл крови, взятой из пальца больного до и через 30 мин после введения прозерина добавления к ней 0,1 мл 5%-ной суспензии эритроцитов барана, нагруженных ацетилхолином.

У больного тип иммунного ответа на прозерин не характерен для миас- тенического нарушения нервно-мышечной передачи.

П р и м е р 4. П-ва, 30 лет, практически здорова. Проба проведена с использованием 0,1 мл крови, взятой из пальца до и чере 30 мин после введения прозерина, добавления к ней 0,2 мл 5%-ной суспензии эритроцитов барана, нагруженных ацетилхолином, и инкубации смеси при 37,. Число лимфоцитов, прореагировавших с ацетилхолиповыми эритроцитами до введения прозерина, 10%, через 30 мин после введения - 39%, т„е. наблюдался иммунный ответ, типичный для практически здоровых людей.

Способ испытан на 20 больных с различными формами миастении, из них у 15 - генерализованная форма, у 5 - локальная (глазная) У всех обследуе мьгх диагноз бьш поставлен верно.

Данные иммунологической пробы у больных миастенией приведены в табл.

Данные иммунологической пробы у больных рассеянным склерозом и заболеванием периферической нервйой системы приведены в табл.3.

10

5 6 6

6

Таким образом, результаты проведенных исследований показали, что иммунная .картина крови до и после введения прозерина различна у больных миастенией, рассеянным склерозом, заболеваниями периферической нервной системы и у практически здоровых лиц.

Ввиду высокой чувствительности предлагаемый способ дает возможность диагностировать доклинические и субклинические формы нарушений нервно- мьппечной передачи миастенического типа, ранней и объективной иммуно-и диагностики миастении, так как он основан на регистрации ранних минимальных нарушений регуляции иммунной системой баланса ацетилхолина, изменений его минимальных концен

траций.

Формула изобретения

Способ диагностики миастении путем введения больному раствора прозерина с последующим исследованием эффекта его воздействия, отличающийся тем, что, с целью повьш1ения точности способа, пробу крови исследуют до и спустя полчаса после введения раствора прозерина, затем добавляют в пробу 0,1-0,2 мл 5%-ной суспензии эритроцитов барана, нагруженных ацетилхолином, инкубируют смесь при 37-37,5°С с последующим подсчетом в мазке розеткообразую- щих лимфоцитов и при снижении их исходного числа с 24% и вьше до 13% и ниже диагностируют миастению.

Таблица 1

Генерализованная форма миастении

То же

Глазная форма миастении

1 1 13 9

8

Примечание: + положительная проба;

- достоверность отличия с фоном Р 0,001.

+ +

Генерализованная форма миастении

То же

Глазная форма миастении

Генерализованная форма миастении

91363074

Таблица 2

. Рассеянный склероз

21 23 20 21 27 22,4+1,34

Заболевания периферической нервной системы

10 5 9 8

10

Продолжение табл.2

Таблица 3

31

35

32 .

31

39

33,611,

39 30 24 31

11

имечание: проба положительная, т.к,

свидетельствует об изменении баланса ацетилхолина,но не характерна для миастени- ческого типа нарушений в нервно-мьшечном аппарате; - проба отрицательнаяь - достоверность отличий с фоном Р 0,001.

Редактор И.Рыбченко

Составитель Л.Шилина Техред Л.Сердюкова

Заказ 6398/34Тираж 776Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная, 4

136307412

Продолжение табл.3

Корректор В.Гирняк

Изобретение предназначено для неврологии. Цель изобретения - повышение точности диагностики. Дои после введения раствора прозерина берут пробы крови и добавляют суспензию эритроцитов барана, сенсибилизированных ацетилхолином. Смесь инкубируют. Затем определяют исходное содержание розеткообразукяцих лимфоцитов и сравнивают с изменением их уровня после введения прозерина« Способ позволяет диагностировать доклинические и субклинические формы нарушений нервно-мышечной передачи миастенического типа. 3 табл. со О5 со