Способ дифференциальной диагностики затяжной и циклической форм вирусного гепатита @ Советский патент 1986 года по МПК A61K39/00 G01N33/49 

го

4

а

(Х

о Изобретение относится к медицине, в частности к генатологии, и касается диагностики ВГВ, а именно затяжной формы в острой стадии вирусного гепатита В (ВГВ). Целью изобретения является ранняя диагностика. Способ осуществляют следуюш,им образом. Из 5 мл гепаринизированной венозной крови больного ВГВ на 5-15 день болезни в градиенте фиколлвериграфин выделяют мононуклеары. Готовят раствор свежих эритроцитов барана и смешивают равные объемы мононуклеаров и эритроцитов барана, инкубируют при 36-38°С в течение 25- 35 мин, затем подсчитывают число образовавшихся розеток, т. е. число стабильных розеткообразующих мононуклеаров и нри их отсутствии или наличии 1-92 кл/мл ставят диагноз затяжной формы ВГВ, а при их количестве 153-464 кл/мл ставят циклическую форму ВГВ. Пример }. Больной Г1, на основании общепринятых клинико-энидемиологических и серологических (обнаружен HBsAg в сыворотке крови) данных был установлен диагноз острого вирусного гепатита В на 6-ой день болезни, в этот день были сделаны исследования сыворотки крови на выявление сенсибилизации лимфоцитов к ЛПЧ, она равнялась 10,5%, активность АлАТ была 3,9 ед. Ни но сенсибилизации лимфоцитов к ЛПЧ, ни но активности АлАТ отдифференцировать затяжную или циклическую форму не представлялось возможным, только по ювому способу на 6-й день болезни в результате того, что Е-РОК стабильные отсутствовали в сыворотке крови, можно предположить, что будет затяжная форма. Это подтверждено спустя 8 недель, когда активность .А.лАТ не нормализовалась (4,8 ед.) и дальнейшее наблюдение за этим больным (спустя 1 год), где в биоптате печени, а именно и;р;1|:ортальная инфильтрация, псевдодсл.ьки указывают па наличие у этого больiioso ХАГ с переходо.м в цирроз. Пример 2. Больной В. на основании общепринятых клини ко-эпидемиологических и серологических (HBsAg в сыворотке кроВи) данных установлен диагноз острого ВГВ на 5-й день болезни. В этот же день сделаны исследования сыворотки крови на выявление сенсибилизации к ЛПЧ лимфоцитов, она равнялась , активность Ал. 11,0 ед. По известным способам на 5-й день болезни отдифференцировать затяжную от циклической формы ВГВ не представлялось возможным. По предлагаемому способу на 5-й день болезни в результате того, что количество Е-РОК стабильных 92 кл/мл предположили о наличии затяжной формы ВГ1. Это подтверждено спустя 8 недель по активности АлАТ, равной 6,45 ед. (нри норме 0,8-0,77), выздоровление у этого больного наступило с 1устя 10 недель от начала заболевания. С целью отработки оптимального времени инкубации и температурного режима поставили несколько опытов но определению количества Е-РОК стабильных. При 36°С со времени инкубации 35 мин Е-РОК стабильных 6% на 100 лимфоцитов больного, количество лимфоцитов у больного 1525 в I мл крови. Е-РОК стаб. в абсолютных числах 92 кл/мл. При 38°С и времени инкубации 25 мин Е-РОК стабильных также 6%, т. е. их число не изменялось, в результате их было 92 кл/мл. При 40°С и времени инкубации 40 мин Е-.РОК стабильных не обнаружено, т. е. произошел распад розеток, таким образом при этом режиме этот метод не работает. При 30°С и времени инкубации 20 мин Е-РОК стабильных 8%, а в абсолютных числах это 122 кл/мл. Таким образом, это уже не затяжная форма и анализы надо повторять до 15 дня болезни. Понижение температуры и укорочение времени ведет к неспецифическому увеличению субнопуляции лимфоцитов за счет обш,ей популяции Т-клеток, которая сохраняет способность образовывать розетки при более низкой температуре. Пример 3. Больная К. на основании общепринятых клинико-биохимических и серологических (HBsAg в сыворотке крови) данных установлен диагноз острого ВГВ на 8-й день болезни. В этот же день сделаны исследования сыворотки крови на выявление сенсибилизации к ЛПЧ ли.мфоцитов. опи равнялась 13%, активность АлАТ - 7,4 ед. По известным способам на 5-й день болезни отдифференцировать затяжную от циклической .формы ВГВ НС представля;1ось возможным. По предлагаемому сг.особу па 8-й день болезни в .чьтате того, что ко.тичество Е-РОК стабильных 155 кл/мл и предполагают наличие циклической формы ВГВ. Это под,тверждено спустя 8 недель но активности Ал.-лТ равной 0,8 ед.(нри нор.мс 0.8--0,47), выздоровление у этой больной наступило на 8-й педеле заболевания. С целью отработки оптимального врегу.ени инкубации и температурного режима поставили несколько опытов но онределению Е-РОК стабильнык. При 36°С инкубации -35 мин. Е-РОК стабильных 4% на 100 лимфоцитов, количество лимфоцитов в i мл крови 3840. Е-РОК стабильных в абсолют П 1х числах 155 кл/мл. При 38°С и времени инкубации 25 мин Е-РОК стабильных 4%, т. е. их число не изменялось, 155 кл/мл. При и времени инкубации 40 мин Е-РОК стабильных не обнаружено, т. е. произошел распад розеток, таким образом, при этом режиме этот метод не работает. При 30°С и времени инкубации 20 мин Е-РОК стабильных 8%, что составило в абсолютных числах 307,2 кл/мл. Таким образом изменение режима температуры и инкубации ведет к песпецифичоскому распаду пли увеличению, т. е. точность и специфичность метода резко снижается. В процессе разработки способа диагностики затяжной формы ВГА на .5-15 день болезки выявлены специфические особенности. При разработке температуры инкубации оказалось, что 36-38°С является оптимальной температурой, при которой наиболее четко различаются показатели стабильных Е-РОК при затяжной и циклической формах ВГВ. При более низкой температуре их количество увеличивается за счет общей субнопуляции Т-клеток и выявить интервал - различие между формами ВГВ не удается, а при более высокой температуре идет неспецифическое разрушение Е-РОК. При разработке времени инкубации оказалось, что 25 - 35 мин является ог;Т1 мальным сроком, при котором наиболее четко различаются показатели стабильных Е-РОК при затяжной и циклических формах ВГВ. При уменьшении времени инкуба 1ии или увеличении эти различия нивелируются. Только при соблюдении времени инкубации 25-35 мин и температуры инкубации 36--38°С могут быть получены те интсрва.1Ы количества термостабильных Е-РОК, т. е. их отсутствие или количество 1-92 кл/м.ч крови, которые позволяют выявить затяжную форму ВГВ уже на 5-15 день болезни, при количестве стабильных Е-РОК 153- 464 кл/мл можно констатировать циклическую форму ВГВ. Если количество стабильных Е-РОК не входит ни в один интервал, необходимо в течение 5- -15 дней болезни повторять это исследование и, если их количество будет 153-464 кл/м,т, то это циклическая форма, если она отсутствует или 1-92 кл/м,п затяжная форма острого вирусного гепатита В. Формуя а изобретения Способ дифференциальной диагностики затяжной и циклической форм вирусного гепатита путем определения розеткообразующих лимфоцитов бо,1ьного при инкубации их с эритроцитами барана, огличаюи(ийся тем, что, с и.елью ранней диагностики, на 1 -15 день болезни инкубируют лимфоциты с эритроцитами барана ири 36--38°С в течение 25---35 мин, определяют число термостабильных розеткообразующих к,:1еток и при их отсутствии и,-1и при на,чичии 1 - 92 кл/мл крови диагностируют затяжную форму вирусного генатнта В, а при количестве 153-464 кл/мл - циклическую форму вирусного |-еиатита В.

Изобретение относится к медицине. 1Дель изобретения - ранняя диагностика. И 5 мл венозной крови больного вирусным гепатитом В на 5-15 день болезни в градиенте фиколлвериграфин выделяют мононуклеары. Готовят раствор свежи.х эритроцитов барана. Смешивают равные объемы мононуклеаров и эритроцитов барана, инкубируют в течение 25-35 мин. Затем нодсчитывают число стабильных розеткообразующи.х мононуклеаров и нри их отсутствии или нри наличии 1-92 кл/мл диагностируют затяжную форму вирусного гепатита В, а при их содержании 153-464 кл/мл - циклическую форму. Если количество стабильных розеткообразующих мононуклеаров не входит ни в один интервал, необходимо повторить это исследование.