Способ прогнозирования лизиса аутодермотрансплантата Советский патент 1989 года по МПК G01N33/49 G01N33/53 

1

Изобретение относится к медицине, а именно к способам прогноза пересадки собственной кожи при ожогах, отморожениях, трофических язвах, длительно незаживающих ранах и обширных повреждениях кожи.

Цель изобретения - повышение точности прогноза.

Способ осуществляют следующим образом.

Для вьщеления мононуклеаров (МНК) 5 мл венозной крови стабилизируют гепарином (250 ед/мл) и наслаивают на 3 мл раствора верографин-фиколл (с 1,082 г/смЗ). После центрифуги- рования при 400 g в течение 40 мин МНК собирают пастеркой с поверхности раствора и 3 раза отмывают: 1-й раз при 400 g 10 мин, 2-й при 200 g

to

to

5 мин в забуферном растворе, 3-й - при 200 g 5 мин в среде 199. Клетки суспендируют в 1 мл среды 199, подсчитывают в камере Горяева и разводят средой 199 до концентрации 2,5x10 клеток/мл.

Венозную кровь барана хранят не более 2-х недель после забора с консервантом (15% от общего объема). Используют трижды отмытые средой 199 ( и 2-я отмывки при 200 g 5 мин, 3-я при 400 g 5 мин) эритроциты барана ОБ) в виде 1,5%-ной суспензии. Для определения ранних розеток (р РОК) 0,2 мл МНК смешивают с 0,2 мл взвеси ЭБ, центрифугируют 5 мин при 200 g, инкубируют при 15- 25 С 5 мин. Перед подсчетом розеткообразующих клеток (РОК) удаляют

4;

СП СП

00

о:

0,2 мл надосадочной жидкости, осадок суспендируют осторожным покачиванием пробирок (10-15 движений). Каплю полученной суспензии помещают на предметное стекло и накрьшают покровным. При 300-400-кратном увеличении под воздушной иммерсией подсчитьшают количество лимфоцитов с 3 и более прикрепившимися ЭБ (розетки) на 100 лимфоцитов .

Восстановление розетки: (в-РОК). 0,2 мл МНК смешивают с 0,2 мл взвеси ЭБ, центрифугируют 5 мин при 200 g, инкубируют 1,5ч при 37° С и 16-18 ч при , Далее повторяют описанные действия. После подсчета числа РОК в крови обследуемых определяют отношение чисел ранних и восста- .,

ровалось приживление аутодермотран- сплантата.

П р и м е р 3. У больного Г.

р-РОК 20%, в-РОК 30%,

2 30

в-РОК 0,66. Прогнозировался лизис

10

аутодермотрансплантата.

Пример 4.У больного Д.

р-РОК 8%, в-РОК 39%, -|д

0,20. Прогнозировался лизис аутодермотрансплантата .

Пример 5.У больного Е. об- ширный дефект кожи, показана аутодер- мопластика. За сутки до операции б-РОК 4%. Прогнозировалось приживление аутодермотранспланата.

Пример 6. У больного Ж. обновленных розеток и при величине это- г, - j. „ « nnv t т п U ширньш дефект кожи. б-РОК 1j/4.1ipoго отношения- 0,7 прогнозируют возможность приживления аутодермотрансплантата.

Способ безосадочного розеткооб- разования (бтРОК): 0,2 мл МНК смешивают с 0,2 мл взвеси ЭБ. Инкубируют при 15-20 С 1 ч, непрерьшно перемешивая. Перед подсчетом РОК удаляют 0,2 мл надосадочной жидкости, осадок суспендируют осторожным покачиванием пробирок (10-15 движений). Каплю полученной суспензии помещают на предметное стекло и накрьшают покровным. При 300-400-кратном увеличении под воздушной иммерсией подсчитывают количество лимфоцитов с 3 и более прикрепившимися ЭБ (розетки) на 100 лимфоцитов.

Определив число РОК, оценивают их уровень. При б-РОК « 4% прогнозируют возможность приживления дермотранс- плантата.

Пример 1. Больной А. показана аутодермопластика. За сутки до операции определено количество РОК,

р-РОК 20%, в-РОК 24%, .р

20 B-ir-UA

0,83. Прогнозировалось приживление .

Пример 2. У больного Б. за сутки до операции р-РОК 25%, в-РОК

- 17%,.| If 1,47. Прогнози25

J гнозировался лизис аутодермотранс.

плантата.

Прогнозирование по отношению р-РОК и в-РОК обеспечивает точность не ниже 96%.

Прогноз по б-РОК обеспечивает точность не ниже, чем на

30

шению

и б-РОК позволяет еще

Комплексирование прогноза по отнор-РОК

в-РОК

больше увеличить точность определения приживляемости аутодермотрансплантата

35

Формула изобретения

Способ прогнозирования лизиса аутодермотрансплантата, включающий

40 вьщеление у больных мононуклеарных клеток, инкубацию их с зритроцитами барана и определение числа розетко- образующих клеток, отличающийся тем, что, с целью повыше45 ния точности прогноза, у больных определяют количество ранних, восстановленных и безосадочных розеткооб- разующих клеток, вычисляют отношение ранних и восстановленных розеток

50 и при его значении большем 0,7 и/или при количестве безосадочных розеток меньшем 4%, прогнозируют приживление аутодермотрансплантата.

ровалось приживление аутодермотран- сплантата.

П р и м е р 3. У больного Г.

р-РОК 20%, в-РОК 30%,

2 30

в-РОК 0,66. Прогнозировался лизис

10

аутодермотрансплантата.

Пример 4.У больного Д.

р-РОК 8%, в-РОК 39%, -|д

0,20. Прогнозировался лизис аутодермотрансплантата .

Пример 5.У больного Е. об- ширный дефект кожи, показана аутодер- мопластика. За сутки до операции б-РОК 4%. Прогнозировалось приживление аутодермотранспланата.

Пример 6. У больного Ж. об- j. „ « nnv t т п ирньш дефект кожи. б-РОК 1j/4.1ipo

J гнозировался лизис аутодермотранс.

плантата.

Прогнозирование по отношению р-РОК и в-РОК обеспечивает точность не ниже 96%.

Прогноз по б-РОК обеспечивает точность не ниже, чем на

шению

и б-РОК позволяет еще

Комплексирование прогноза по отнор-РОК

в-РОК

больше увеличить точность определения приживляемости аутодермотрансплантата.

Формула изобретения

Способ прогнозирования лизиса аутодермотрансплантата, включающий

вьщеление у больных мононуклеарных клеток, инкубацию их с зритроцитами барана и определение числа розетко- образующих клеток, отличающийся тем, что, с целью повышения точности прогноза, у больных определяют количество ранних, восстановленных и безосадочных розеткооб- разующих клеток, вычисляют отношение ранних и восстановленных розеток

и при его значении большем 0,7 и/или при количестве безосадочных розеток меньшем 4%, прогнозируют приживление аутодермотрансплантата.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологическим способам прогноза приживляемости яутодермотрансплантата. Целью изобретения является повьшение точности прогноза. Способ осуществляется следующим образом. У больных определяют количество розеткообразующих клеток: ранних, образующихся при 15-25°С в течение 5 мин восстановленных, обра- зующихся при двухэтапной инкубации клеток при 37 С в течение 1,5 ч и затем при 15-25 С в течение 1 ч, и безосадочных, образующихся при 15- 25°С в течение 1 ч. При отношении ранних и восстановленных розеткообразующих клеток более 0,7 и/или при числе безосадочных розеткообразующих клеток свыше 4% прогнозируют возможность лизиса аутодермотрансплантата. (Л