Способ выявления солей кальция в хряще при электронно-микроскопическом исследовании Советский патент 1987 года по МПК G01N1/38 G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, а именно к морфологии, и может быть использовано, в частности, для приготовления препаратов для световой и электронной микроскопии из биологических объектов.

Цель изобретения - выявление водорастворимых соединений кальция за счет фиксации раствором четырехоки- си осмия в смеси органических растворителей и дегидратации в смеси этих растворителей с изменяющимся соотношением ингредиентов.

Способ осуществляют следующим образом.

Осуществляют фиксацию в 1-3%ном растворе четырехокиси осмия в смеси эфира этилового и ацетона абсолютного в объемном соотношении 2:Г в течение 30-60 мин при 3-5 С и производят дегидратацию в безводной смеси эфира и ацетона при последовательных соотношениях 2:1, 1:1, 1:2 соответственно. Затем в три смены, в течение 20-40 мин каждая, погружают образцы в заливочную среду. Четыре этапа дегидратации осуществляют при

.

Пример 1. Обработке подвергают образцы эмбрионального кальци- фицирующегося хряща человека размерами 1x1x1 мм. Фиксацию образцов проводят в 2%-ном растворе четырехокиси осмия в смеси эфира этилового и ацетона абсолютного в объемном соотношении 2:1 при 4 С в течение 60 мин

Затем образцы последовательно переносят в ряд дегидрирующих жидкостей, имеющих температуру 4 С. Первая из них представляет собой смесь эфира этилового и ацетона абсолютного в объемном соотношении 2:1. В ней образцы находятся 1 ч. Затем переносят их в смесь эфира этилового и ацетона абсолютного в объемном соотношении 1:1 также на 1 ч. Третья жидкость представляет собой смесь эфира этилового и ацетона абсолютного в объемном соотношении 1:2. В ней образцы находятся 1 ч.

Следующим этапом дегидратации является троекратное погружение образцов каждый раз в с вежие порции ацетона абсолютного по 30 мин в каждую

/ о -1 при 4 С.

ВНИИПИ Заказ 7704/41

Произв.по1шгр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

5

Далее образцы заливают в эпоксидные смолы с применением абсолютного ацетона по известным методикам.

В результате такой обработки полу- чают сериальные ультратонкие гистологические срезы. Полностью сохраняется и четко выявляется структура из изучаемой ткани как на уровне световой, так и электронной микроскопии. 0 Пример 2. Обрабатывают образцы эмбрионального кальцифицирующе- гося хряща человека размерами 1х1х х1 мм. Фиксацию осуществляют в 1%-ном растворе четырехокиси осмия в смеси эфира этилового и ацетона абсолютного при их объемном соотношении 2:1 в течение 30 мин. Температура фиксатора .

Далее проводят дегидратацию в трех смесях эфира этилового и ацетона абсолютного с различными их объемными соотношениями при 3 С по 30 мин в каждой. 1 смесь - эфир этиловый и ацетон абсолютный в соотно- |шении 2:1, 2 смесь - эфир этиловый и ацетон абсолютный в соотношении 1:1, 3 смесь - эфир этиловый и ацетон абсолютный в соотношении 1:2.

Продолжают дегидратацию в трех сменах ацетона абсолютного при 3 С по 20 мин в каждой.

0

5

0

Затем заливают в эпоксидные смолы. В результате получают ультратонкие гистологические срезы.

Формула изобретения

Способ выявления солей кальция в хряще при электронно-микроскопическом исследовании, путем фиксации в 1-3%-ном растворе четырехокиси осмия при температуре 3-5 С с последующей дегидратацией, заключением в смолы и определением кристаллов кальция на препарате, отличающий- с я тем, что, с целью выявления водорастворимых соединений кальция, фиксацию проводят в течение 30-60 мин при этом используют четырехокись осмия на смеси эфира и ацетона при их соотношении 2:1, а дегидратацию ведут в смеси эфира и ацетона при последовательных соотношениях 2:1, 1:1, 1:2 соответственно.

Тираж 776

Подписное

Изобретение бтносится к области медицины, а именно к морфологии, и может быть использовано, в частности, для приготовления препаратов для световой и электронной микроскопии из биологических объектов. Целью изобретения является выявление водорастворимых соединений кальция. Образцы эмбрионального кальцифицирующегося хряща человека фиксируют в 1-3%-ном растворе четырехокиси осмия в смеси эфира этилового и ацетона абсолютного в объемном соотношении 2:1 при 3-5°С в течение 30-60 мин, затем производят дегидратацию в безводной смеси эфира и ацетона при последовательных соотношениях 2:1, 1:1, 1:2 соот- . ветственно при 4 С. Следующим этапом дегидратации является троекратное погружение образцов каждый раз в свежие порции ацетона абсолютного по 30 мин в каждую при 4 С. Далее образцы заливают в эпоксидные смолы с применением абсолютного ацетона. Получаются сериальные ультратонкие гистологические срезы. i (Л С 1C 00 о: со со