Питательная среда для дифференциации энтеробактерий Советский патент 1987 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к медицинекой микробиологии и может быть ис- польэоваио при бактериологической диагностике дисбактериоза,

Цель изобретения - усиление диф- ферешщрую1цих свойств среды,

При мер 1.9 г сухого трипти- ческого гидролизата белкозина, 0,6 г сухого экстракта кормовых дрожжей, 0,75 г алкилбензолсульфонат натрия, 0,036 г нейтрального красного, 23,4 г агар-агара, ,1 г натрия вин- но-киспого кислого и 12,0 г лактозы растворяют в 1 л дистиллированной воды в колбе. Добавлением 1,0 натрия углекислого устанавливают рН 7,5tO,l

Среду кипятят 2-3 мин, фильтруют и разливают по 25 мл в стерильные чашки Петри и оставляют на столе для застывания cpejpj при закрытых крыш- ках. Затем чашки со средой и крышки раздельно подсушивают в термостате до высыхания конденсациоииой влаги на крышках чашек, после чего последние закрывают крышками и (:реда готова для использования. Цвет готовой среда бледйо-розовый.

Пример 2. Готовят среду в соответствии с примером 1, но в 1 л дистиллированной воды вносят 7,5 г сухого триптического гидролизата белкозина, 0,5 г сухого экстракта кормовых дрожжей, 0,65 г алкилбензол сульфоната натрия, 0,03 г нейтрального красного, 19,5 г агар-агара, 1,0 натрия винно-киелого кислого, 11,0 г лактозы и 0,8 г натрия углекислого.

П р и м е р 3. Готовит среду аналогично примеру 1, но в 1 л дистиллй- рован ой воды вносят 6,0 г сухого триптического гидролизата белкозина, 0,4 г сухого экстракта кормовых дрожжей, 0,6 г алкилбензолсульфоната натрия, 0,025 г нейтрального красного, 15,6 г агар-агара, 0,9 г натрия вин- но-кислого кислого, 10 г лактозы и 0,5 г натрия углекислого.

Пример 4. Среду можно гото- вить в сухом виде.

В шаровую мельницу емкостью в 1 кг загружают 75 г сухого триптического гидролизата белкозина, 5 г сухого экстракта кормовых дрожжей, 6,5 г ал- килбензолсульфоната натрия, 0,3 г нейтрального красного, 195 г агар- агара, 10 г натрия винно-кислого, 110 г лактозы, 3 г натрия углекисло

5

0

0 5

л

го. Смесь перемешивают в течение 45 мин.

Навеску вещества 40 г (она содержит оптимальное количество указанных ингредиентов) вносят в 1000 мл воды, кипятят 2-3 мин, фильтруют, разливают по 25 мл в чашки Петри.

Аналогично получают препараты с содержанием минимальных и максимальных концентраций ингредиентов. При этом навеска составляет 3,4 и 4,8 г соответственно на 1 л среды.

Среду используют следующим образом.

П р и м е р 5. Для приготовления микробных взвесей суточные культуры тест-штаммов, вьфащенные на скошенном питательном агаре при 37 С, смывают 0,9%-ным изотоническим раст- врром хлористого натрия, доводят взвеси до 10 ед. по оптическому стандарту мутности, что соответствует 10 микробных клеток в 1 мл.

Затем серийными десятикратными разведениями доводят до содержания 10 тыс. (lO), 1 тыс. (10) и (10), 100 микробных клеток в 1 мл взвеси.

Готовят также смесь культур путем смешивания лактозоотрицательиых штаммов (щигелл, сальмонелл, протея) с лактозоположительной кишечной палочкой из разведения 10 в соотношении 1:1, что соответствует 5 тыс. микробных клеток каждой культуры в I мл.

Из разведений 10 и 10 каждой взвеси монокультур, за исключением стафилококка, который высевается из разведения 10 ° (100 млн. микробных клеток в 1 мл), и смеси культур высевают по 0,1 мл на чашки с предлагаемой и известными средами.

Средами сравнения служат; среда ВШС и среда Левина.

Учет результатов проводят через 18-20 ч инкубации посевов при 37 С. Чувствительность, стабильность исходных биологических свойств, и скорость роста испытуемых тест-штаммов на опытной и известных средах одного порядка: отмечается рост тест- штаммов (S. flexneri № 8516, S.son- nei, S-форма, S. dysent. 1, S.typ- hi H901, E.coli 3912/41) при посеве 10 микробных клеток (10).

Дифференцирующие свойства: при посеве смеси культур на опытной среде отмечается четкая дифференциация

патогенных энтеробактерий (сальмонелл, шигелл), не ферментирующих лактозу бесцветных колоний от кишечной палочки, ферментирующей лактозу и окрашенных в малиновый цвет.

Диффузного окрашивания среды, в том числе и в йесте скопления колоний кишечной палочки, не отмечается, что является положительным признаком качества среды, обеспечивающим выделение и дальнейшее изучение культур.

На среде сравнения ВШС отмечается диффузное пожелтение среды, на фоФормула

изобретения

Питательная среда для дифференциации эитеробактерий,;, содержащая 5 питательную основу, углевод, индикатор, поверхностно-активное вещество агар, дистиллированную воду, о т л и ч а ю щ а я fc я теЫ, что, с целью усиления дифференцирующих свойств, она дополнительно содержит натрий винно-кислый кислый и натрий углекис лый, сухой экстракт кормовых дрожжей в качестве питательной основы она со держит сухой триптический гидроли10

не которого патогенные микроорга шз- зат белкозина в качестве углевода - мы отличаются от непатогенных лишь лактозу, в качестве индикатора - по степени прозрачности и диаметру нейтральный красный, в качестве по- колоний, но не по основному призна- верхностно-актирного вещества - ал- ку, заложенному в среду - по окрас- килбензолсульфонат натрия при опеке колоний, что значительно затруд- 20 дующем соотношении компонентов,г/л:

няет вьщеление искомой культуры.

Показатель йнгибиции, определяемый при посеве стафилококка (10 млн микробных клеток) и вульгарного про- тея (1000 a кpoбныx клеток) на опытной среде и среде ВШС, paBHqpHa4eH: на обеих средах стафилококк не растет и протей не роится.

На среде Левина, взятой в качест- ве контроля, отмечается сливной рост стафилококка и феномен роения протея

Результаты апробации дифференциально- диагйостической среда (нейт- ральрот лактозный агар, 1,2,3 серии средние данные) на 11 этапе (при исследовании испражнений) приведены в таблице.

Среда Левина 105

15 14,2 30 28,5 Дифференциация

отсутствует в U.2a

Редактор Н.Рогулич

Составитель Г.Смирнова

Техред А. Кравчук Корректор и. ЭрдеГш

Заказ 862/26 Тираж 500Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, , Раушская наб., д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная, 4

рмула

изобретения

Питательная среда для дифференциации эитеробактерий,;, содержащая питательную основу, углевод, индикатор, поверхностно-активное вещество, агар, дистиллированную воду, о т л и- ч а ю щ а я fc я теЫ, что, с целью усиления дифференцирующих свойств, она дополнительно содержит натрий винно-кислый кислый и натрий углекислый, сухой экстракт кормовых дрожжей, в качестве питательной основы она содержит сухой триптический гидроли

зат белкозина в качестве углевода - лактозу, в качестве индикатора - нейтральный красный, в качестве по- верхностно-актирного вещества - ал- килбензолсульфонат натрия при опедующем соотношении компонентов,г/л:

сей

6,0-9,0

0,4-0,6 15,6-23,4

0,6-0,75 0,025-0,036

0,9-1,1 10,0-12,0

0,5-1,0 Остальное

Отсутствие роста, X

8,6 3.8

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть применено при бактериологической диагностике дисбактериоза. Цель изобретения - усиление дифференцирующих свойств среды. Для этого питательная среда для дифференциации знтеробак- терий содержит, г/л: в качестве питательной основы сухой триптичес1 ий гидролизат белкознна 6,0-9,0, сухой экстракт кормовых дрожжей 0,4-0,6, агар 15,6-23,4, в качестве поверхностно-активного вещества - алкил- бензолсульфонат натрия 0,6-0,75, в качестве индикатора - нейтральный красный-О,025-0,036, натрий виннокислый кислый 0,9-1,1, лактозу 10,0 - 12,0, натрий углекислый 0,5 - 1,0, воду дистиллированную - остальное. Среду кипятят 2-3. мин, фильтруют, разливают в стерильные чашки Петри. Затем чашки со средой подсушивают в термостате. Среда гот.ова для использования. 1 табл. Q S сл N3 (Г) 00 ю Ni;; сл