Способ определения адгезивной способности холерных вибрионов Советский патент 1990 года по МПК C12N1/00 C12Q1/02 C12N1/00 C12R1/63 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для характеристики пато- генности холерных вибрионов.

Целью изобретения является ускоре- пне и упрощение способа за C4et из- менениА вида субстрата.

Способ осуществляется следующим образом.

У кролика берут кровь из сердца, дефибринируют, фильтруют через 4 слоя стерильной марли, центрифугируют при 1000 об/мни в течение 15 мин и дважды в течение мин центрифугирова- iWeM при 2000-3000 об/мин отмывают 0, фосфатно-буферным раствором рН 7,2. Полученные эритроциты сохраняют под слоем физиологического раствора при С.

3-часовую культуру холерного вибриона в пептонной воде в объеме О,1 мл в лунке полистироловой пластинки смешивают с равньгм объемом 055-1%-ной взвеси эритроцитов с пос ледующей инкубацией смеси при 28-37 С в течение 25-40 мин и приготовлением мазков (по 2 из ка,ждой лунки). Мазки фиксируют метиловым спиртом в течение 5 мин и окрашивают по Рома1 овскому - Гимза краской Лейшмана или прочным зеленым с докраско й азуром П.

Мазки просматривают под увеличением микроскопа раз (объектив .х90, масляная иммерсия, оЛуляр х10 на бинокулярной насадке АУ-12). При окраске по Романовскоку-Гимза или краской Лейшмана эритроциты - розовые, а холерные вибрионы - синие; при окраске прочным зеленым .эритроциты светло-зеленые, вибрионы - синие. Прикрепившиеся к эритроцитам вибрионы подсчитывают на 100 эритроцитах в разных полях зрения микроскопа.Определяют среднее количество прилипших вибрионов на 1 эритроцит.

Составитель Г. Смирнова Редактор Ло Купрякова Техред А.Кравчук Корректор И.Эрдейи

Заказ 2146Тираж 497Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская, наб,, д. 4/5

Прозводственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4.

Пример. Бактериологическую петлю 10-часовой агаровой культуры Vibrioeltor 563, Ината, засевают в Пробирку с 1%-ной пептонной водой и инкубируют при З7 с в Течение 3 ч,

В лунках на полистироловой пластинке готовят смесь из равньтх объемов (по 0,1 мм) 3-часовой культуры вибриона на 1%-ной пептонной воде и 1%-ной взвеси эритроцитов. Пластинку помещают в термостат при 37°С с периодическим легким покачиванием.Через 30 мин на предметных стеклах готовят мазки, фиксируют и окрашивают.

Подсчет вибрионов проводят на 50 эритроцитах в мазках, окрашенных прочным зеленым, и на 50 эритроцитах в мазках, окрашенных по PoMa. ioBCKOhry- Гим за или краской Лейшмана, Определяют количество прикрепившихся вибрионов на 1 эритроцит. Оно составляет .3,4±0,26.

.Адгезивная способность холерных вибрионов Е зависимости от вирулентности колеблется от 2,4i;0,1 до.6,О 0,2 (количество вибрионов, прикрепившихся к 1 эритроциту).

. Срок проведения исследования - около 6 ч (по известным способам от 1 до 10 дней),.

Фррмулз .изобретения

Способ определения адгезивной спо- 35 собносТи холерных вибрионов, включающий инкубирование исследуемой культуры с последующим приготовлением.микроскопических препаратов и определением адгезивной способности по коли- честву вибрионов, прикрепившихся к субстрату, отличающи йс я тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, исследу емуто культуру инкубируют с О,5-1%-ной взвесью эрит- роцитов кролика, используеьязгк в качестве субстрата и взятых в равных объемах,, в течение мин.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и Может быть использовано для определения патогеннос- ти холерных вибрионов. Цель изобретения - ускорение и упрощение способа за счет изменения вида субстрата. Культуру холерного вибриона смешивают с равным объемом взвеси эритроцитов. Затем смесь инкубируют и готовят маз- ;КИ. Мазки фиксируют метиловым спиртом и окрашивают по Романовскому-Гимза или краской Лейп1ма1га. Прикрепившиеся :к эритроцитам вибрионы подсчитьтают :на 100 эритроцитах в разных полях зрения микроскопа. Определяют среднее . количество прилипших вибрионов на один эритроцит. 2