Штамм вируса гепатита А,используемый для приготовления специфических диагностических препаратов Советский патент 1987 года по МПК C12N7/00 

1

Изобретение относится к области вирусологии и касается получения диагностических препаратов.

Цель изобретения - вьщеление нового штамма вируса гепатита А, способного вызьшать инфекцию гепатита А на доступных видах обезьян и сопро- вождакицуюся вьщелением вируса, используемого для специфическиой диагностики гепатита А,

Штамм вируса гепатита А (ЯМ-55) выделен из печеночной ткани яванской макаки, спонтанно заболевшей гепатнтом А после воздействия иммунодепрес- ,gфекальных проб людей, больных гепатисантов,том А (содержащих частицы ВГА) покаШтамм депонирован в государствен-зало 100% совпадение результатов: из

ной коллекции вирусов Института виру-514 исследованных сывороток в 499 высологии им, Д,и,Ивановского под номером ГКВ-729,

Штамм характеризуется следующими свойствами: диаметр полных и пустых вирусных частиц 27 нм, основная масса вирусных частиц имеет плавучую плотность ,34 г/см в градиенте

35

плотности хлорида цезия и константу седиментации 1575 в градиенте плотности сахарозы. По злектронно-микро- скопическим радио и энзимо-иммунологическим данным штамм ЯМ-55 по своим 0,1 М раствором фосфатно-солевого бу- антигенным свойствам не отличается фера рН 7,2-7,4, гомогенизируют в от штаммов ВГА, выделенных от больных керамической ступке, добавляют 5 мл гепатитом А, Печеночная ткань яванских и бурьпс макак, инфицированных штаммом ВГА/ЯМ-55, накапливает вирус В количестве, достаточном для получения вирусного антигена и осуществления специфической диагностики гепЙти- та А,

Пример 1, Использование вируса гепатита А, полученного из печени обезьян, для диагностики гепатита А,

Из инфицированной печени яванских и бурых макак, зараженных.ВГА (ЯМ-55), готовят зкстракт (0,5 г ткани промы- для острого гепатита гистологические вают 0,1 М раствором фосфатно-солево- изменения печеночной ткани и накоп- го буфера (ФСБ) рН 7,2-7,4, гомогенизируют, добавляют 5,0 мл 0,1 М раствора ФСБ, вносят несколько стеклянных

л

1лО

40

П р И М е р 2, Из печеночной ткани яванской макаки готовят суспензию, содержащую вирус гепатита А:О,5 г печеночной ткани 3-кратно промывают

0,1 М раствора того же буфера и встряхивают с бусами в течение 14 мин на шуттель-аппарате. Затем гомогенат центрифугируют 30 мин при 3000 об/мин, Надосадочную жидкость отбирают и осветляют. Полученный материал (с добавкой канамицина 0,5-1,0 мг/мл) ис- пользуют для заражения яванской или Iбурых макак. Заражение проводят внут- ривенным введением 1 мл 10%-ного зкстракта. Через 14-16 дней после заражения обнаруживают характерные

бус и смесь встряхивают 15 мин, затем центрифугируют 30 мин, 3000 об/мин, переливают надосадочную жидкость в пластиковые пробирки, осветляют центрифугированием 30 мин, 10000 об/мин, добавляют канамицин 0,5-1,0 мг/мл, который разводят в 0,1 М ФСБ 1:2-1:20 и исследуют на .содержание антигена ВГА, Подбирают опытным путем оптимальное разведение экстракта и его в даль55

ление частиц ВГА в печеночных клетках,

Использование штамма вируса гепатита А ГКВ-729 позволяет получать вирусную массу для приготовления диагностических препаратов с использованием доступного биообъекта, а также изучать в эксперименте данное заболевание ,

Формула изобретения

Штамм вируса гепатита А ГКВ N 729

(Всесоюзная коллекция вирусов Инсти3283762

нейшем используют в качестве антигена ВГА для выявления антител в исследуемых сыворотках больных к ВГА класса М, титрования суммарных антител к указанному вирусу и в качестве положительного контроля при обследовании материалов с помощью радио и зн- зимо-иммунолоГических методов, Парал- Q лельное исследование 514 сьшороток больных и здоровых лиц на наличие антител к ВГА с помощью ЗИМ при использовании экстракта печени обезьян (зараженных штаммом ВГА) и зкстракта

явлены антитела к ВГА, Такое же пол- ное совпадение результатов получено при титровании антител к ВГА в исследуемых сыворотках. Данные приведены в таблице.

Штамм может быть использован также для моделирования гепатита А,

П р И М е р 2, Из печеночной ткани яванской макаки готовят суспензию, содержащую вирус гепатита А:О,5 г печеночной ткани 3-кратно промывают

5

0,1 М раствором фосфатно-солевого бу- фера рН 7,2-7,4, гомогенизируют в керамической ступке, добавляют 5 мл

для острого гепатита гистологические изменения печеночной ткани и накоп-

0

0,1 М раствора того же буфера и встряхивают с бусами в течение 14 мин на шуттель-аппарате. Затем гомогенат центрифугируют 30 мин при 3000 об/мин, Надосадочную жидкость отбирают и осветляют. Полученный материал (с добавкой канамицина 0,5-1,0 мг/мл) ис- пользуют для заражения яванской или Iбурых макак. Заражение проводят внут- ривенным введением 1 мл 10%-ного зкстракта. Через 14-16 дней после заражения обнаруживают характерные

для острого гепатита гистологические изменения печеночной ткани и накоп-

ление частиц ВГА в печеночных клетках,

Использование штамма вируса гепатита А ГКВ-729 позволяет получать вирусную массу для приготовления диагностических препаратов с использованием доступного биообъекта, а также изучать в эксперименте данное заболевание ,

Формула изобретения

Штамм вируса гепатита А ГКВ N 729

(Всесоюзная коллекция вирусов Инсти31328376

тута вирусологии им, Д.И.Ивановского товления специфических диагностичесАМН СССР), используемый для пригоких препаратов,

514

15

5i4

15

Редактор С.Патрушева

Составитель А.Маиыкин

Техред А.Кравчук Корректор В.Гирняк

Заказ 3453/29Тираж 499 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий П3035, Москва, Ж-35, Раушскаянаб., д, 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4

ких препаратов,

58

232

104

84

21

58

232

104

64

21

Изобретение относится к области вирусологии и касается штамма вируса гепатита А, используемого для приготовления специфических диагностических препаратов. Штамм вируса, гепатита А (ВГА) выделен из печеночной ткани яванской макаки, депониро - ван в государственной коллекции вирусов Института вирусологии . им. Д.И.Ивановского под номером ГКВ- 729. Штамм при введении яванским или бурым макакам вызывает гепатит А, При экстракции печеночной ткани зараженных макак вьоделяют антиген, который по антигенным свойствам близок вирусу гепатита А, вызьшающего заболевание людей. Полученный антиген может быть успешно использован для выявления специфических антител в сыво- ротках крови больных гепатитом А. 1 табл. (Л со ю 00 оо