Питательная среда для культивирования растительных клеток и протопластов Советский патент 1987 года по МПК C12N5/00 

V133

Изобрете ние относится к биотехнологии, в частности к использованию клеточной инженерии для селекции сельскохозяйственных растений.

Целью изобретения является повышение эффективности высева протопластов и клеток, увеличение выхода |каплусной ткани, а также сокращение сроков получения клеточных линий и растений-регенерантов.

Среду готовят путем растворения в бидистиллированной воде при соотношении, представленном в таблице.

После установления рН среды

5,6 раствор в колбах стерилизуют в течение 15 мин в автоклаве при избы- .точном давлении 0,7-0,8 атм.

В стерильном боксе или в потоке стерильного в оздуха при использовани ламинар-боксов КПГ-1 свежевьщеленные протопласты помещают в питательную среду (плотность 10-10 протопластов/мл) и разливают по 2,5-3,5 мл суспензии в стерильные чашки Петри ( 0 60x11 мм). Чашки Петри стерилизуют сухим жаром в сушильном шкафу при 140-160 С. Помещают чашки Петри в климатическую камеру (24-25 С, 16- часовой световой день, освещенность 4000-5000 лк), где из протопластов развивается каллусная ткань, а затем и растения-регенеранты. Растения пересаживают в почву известным способом по типу рассады.

Выход растений-регенерантов по сравнению с известным способом дает для картофеля ускорение на 13-60%, для гороха получены регенеранты за 14-18 недель.

Формула изобретения

Питательная среда для культивиро- .вания растительных клеток и протопластов, содержащая калий азотнокислый, кальций хлористый, магний сернокислый, борную кислоту, марганец сернокислый, цинк сернокислый, калий йодистый, натрий молибденовокислый, медь сернокислую, кобальт хлористый, железо сернокислое, мезоинрзит, никотиновую кислоту, тиамин, пиридок- син, 2,4-дихлорфеноксиуксусную кисло

5

0 5 о

S

0

5

;

ту, отличающаяся тем, что, с целью повышения эффективности высева протопластов и клеток, увеличения выхода каллусной ткани, а также сокращение сроков получения клеточных линий и растений-регенерантов, питательная среда дополнительно содержит аммоний хлсзристый, калий фосфорнокислый, натрий ЭДТА, глютамин, гидроли- зат казеина, ксилозу, с -нафтилуксус- ную кислоту, 6-бензила-минопурин и глюкозу при следуюш 1Х соотношениях компонентов, мг/л:

Аммоний хлористый 133,5-134. Калий азотнокислый 949-951 Кальций хлористый

(2-водный)219-221

Магний сернокислый

(7-водный)184-186

Калий фосфорнокислый однозамещенный 84-86 Борная кислота 2,9-3,1

Марганец сернокисльй

(4-водный)13,1-13,3

Цинк сернокислый

(7-водный)1,5-2,5

Калий йодистый 0,74-0,76

Натрий молибденовокислый

(2-водный) 0,24-0,26

Медь сернокислая

(5-водная)0,024-0,026

Кобальт хлористый

(6-водный)0,024-0,026

Железо сернокислое

(7-водное)27,7-27,9

Натрий ЭДТА

(2-водный)37,2-37,4

Мезоинозит 99-101

Никотиновая

кислота0,9-1,1

Глютамин99-101

Гидролизат

казеина495-505

Ксилоза249-251

Тиамин9,9-10,1

Пиридоксин0,9-1,1

а/-Нафтилуксусная

кислота1,9-2,1

6-Бёнзиламинопурин 0,4-0,6

2,4-Дихлорфеноксиуксусная кислота . 0,19-0,21

Глюкоза71900-72100

Дистиллированная

водаДо 1 л

Аммоний сернокислы Аммоний хлористый Калий азотнокислый

Кальций хлористый (2-водный)

Магний сернокислый (7-водный)

Калий фосфорнокислы однозамещенный

Натрий фосфорнокисл

однозамещенньш

(водный)

Борная кислота

Марганец сернокислы (4-водный)

Цинк сернокислый (7-водный)

Калий йодистый

Натрий молибденово- кислый (2-водньй)

Медь сернокислая (5-водная)

Кобальт хлористый (6-водный)

Железо сернокислое (7-водное)

Натрий ЭДТА (2-водный)

Мезоинозит

Никотиновая кислота

Глютамин

Гидролизат казеина

133,75 950

220

185

85

134 951

221

186

86

Ксилоза

Тиамин

Пиродокеин

о -Нафтилуксусная кислота

6-Бензиламинопурин

2,4гДихлорфенокси- уксусная кислота

Сахароза Глюкоза

Дистиллированная вода

Редактор И.Егорова

Составитель С.Светльшев Техред В.Кадар

Заказ 3770/23Тираж 499Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

.Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная,4

13318926

Продолжение таблицы

0,19

0.2

0,21

72000

72100

До 1л

Корректор М.Шароши

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к использованию клеточной инженерии для селекции сельскохозяйственных растений. Целью изобретения является повьшение эффективности высева протопластов и клеток, увеличение выхода каллусной ткани, а также сокращение сроков получения клеточных линий и растений- регенерантов. Питательную среду готовят путем растворения в бидистил- лированной воде 28 компонентов. После полного растворения и установления рН среды до 5,6 раствор стерилизуют в автоклаве. Свежевыделенные протопласты помещают в питательную среду и в климатическую камеру, где из протопластов развивается каллусная ткань, а затем и растения-регенеран- ты. Применение данной питательной среды позволяет увеличить эффективность высева протопластов на 5-50%, ускорить ими регенерацию клеточной стенки на 25-50% и первое деление на 40-60%. 1 табл. 91