Способ диагностики эхинококкоза Советский патент 1987 года по МПК G01N33/535 

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано для диагностики эхинококкоза.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа за счет использования в качестве меток антигена фермента каталазы.

Пример 1, Определение антител в сыворотке больного эхинококковом. Адсорбцией эхинококковый антиген фиксируют на поверхности лунок планшет. Затем вносят в лунки по 0,1 мл исследуемой сыворотки человека с разведения 1:50 и после экспо- зии и отмывания избытка сыворотки вносят по 0,1 МП коньюгата с активностью фермента 100 нкат (вносимый в лунки коньюгат состоит из прочного комплекса глобулинов кроличьей антисыворотки против глобулинов сыворотки человека и фермента каталазы сшитых глютаровым альдегидом), выдерживают 60 мин при и отмывают 0,05%-ным раствором твина-20. Пос- 25 соб, основанный на использовании

ле этого во все лунки добавляют 0,05 мл HjOj и выдерживают в течение 30 мин, затем в эти же лунки вносят 0,025 мл 5%-ного раствора KI и 0,025 МП 0,1%-ного раствора крахмала Результат , анализа проявляется через 20-30 мин в виде синего окрашивания в лунках, где отсутствовали антитела к эхинококковому антигену. В случае, если исследуемая сыворотка в определенных разведениях содержит антитела к эхинококковому антигену, соответствующие лунки остаются бесцветными.

Влияние ферментативной активности каталазы в используемом для реакции коньюгате показано в табл.I,

Таким образом, коньюгат работает специфически с ферментативной активностью 1000 нкат. При активности менее 30 нкат он не дает положительной дс держащий HjO, в концентрации 0,001- реакции с иммунной сывороткой. Сле- ,0,0005%, KI 1-5%и крахмал О,1-0,2%.

5

0

довательно, коньюгат может применяться с ферментативной активностью 30- 1000 нкат.

Влияние концентрации и KI на чувствительность реакции показано

в табл,2.

Из приведенных в табл.2 результатов видно, что оптимальным.сочетанием для проявления активности каталазы являются концентрации 0,0010- 0,0005% и KI 1„0-5,0%.

Влияние дозы крахмала на чувствительность метода показано в табл.3.

Из результатов, приведенных в табл.3 видно, что оптимальной концентрацией крахмала является 0,1. - 0,2%-ный раствор.

Чувствительность диагностики при использовании коньюгата с пероксида- зой (известный метод) и каталазой (предлагаемый метод) показана в табл.4.Таким образом, предлагаемый спо

фермента каталазы и простого по составу субстрата, позволяет с большей чувствительностью проводить определение антител по сравнению с известным способом.

Формула изобретения

Способ диагностики эхинококкоза, включающий фиксацию антигена на твердой фазе, добавление исследуемой сыворотки кровид вторичного коньюгата антигена с ферментом и соответ- ствующего субстрата, отлич аю- щ и и с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве фермента для коньюгата используют каталазу с активностью 30- 1000 нкат и добавляют субстрат .соИммунной1:10

ной

+ +

+ + +

+ +

+

Примечание, +

It II

положительный результат реакции; отрицательный результат реакции.

0,5

Реакция от- 1:40 1:80 1:160 1:160 Реакция рицательнаяотрицательная

Примечание, к+ - положительная реакция в контроле.

Таблица 1

Т а б л и ц а 2

С пероксида- зой (известный)1:800 1:200 1:400 1:800 1:1600

С каталазой (предлагаемый)1:1600 1:560

ТаблицаЗ

Таблица4

1:800 1:2400 1:3200

.1 :50

Изобретение предназначено для биохимии при диагностике эхинокок- коза. Цель изобретения - повьшение чувствительности способа путем использования в качестве меток антигена фермента каталазы с ферментативной активностью 30-1000 нкат и про,- стого по составу субстрата (Н.О,, в концентрации 0,001-0,0005%, KI 1-5% и крахмал 0,1-0,2%). Результат анализа проявляется через 20-30 мин в виде синего окрашивания в лунках, где отсутствуют антитела к эхинокок- новому антигену. При наличии антитела к эхинококковому антигену окрашивания нет. 4 табл. СП