Способ отбора штаммов дрожжей-сахаромицетов @ -типа спаривания Советский патент 1987 года по МПК C12N15/00 C12N15/00 C12R1/865 

13337

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается генетико-селекционных работ с дрожжами-сахаромицетами.

Цель изобретения - ускорение и удешевление отбора штаммов дрожжей-сахаромицетов о;,-типа спаривания. .

Способ заключается в том, что ис-

кодную культуру рассевают отдельньши колониями, которые переносит методом Отпечатков на густой посев тестерио- го штамма oi-типа спаривания, сверхчувствительного к действию oi, -факто- ра (), визуально выявляют зоны подавления роста вокруг отпечатанных клонов и на исходном посеве отбирают Клоны, подавляющие рост тестерного штамма,

Дпя увеличения выхода клонов об - типа спаривания исходную культуру обрабатывают дополнительно мутагеном„

В качестве тестерного штамма oi-гк- па спаривания, сверхчувствительного к действию ot-фактора, () используют штамм ВКПМУ-614, а также другие Штаммы Ssa Петергофской генетической коллекции дрожжей - 2Г-П3238, 27Б-П3238, 22J-n3238.

На отбор об -клонов данным спосо-ч бом требуется 5-6 дней. Способ позво- ляет проводить отбор об -клонов у культур различной плоидности и у про- тотрофов.

Изобретение иллюстрируется примерами .

Пример 1. В качестве исход- нЬй культ уры для отбора штаммов oi - типа спаривания используют прототроф- НЫй диплоид Saccharomyces cerevisiae П5188 Петергофской генетической коллекции дрожжей, гетерозиготный по ло кусу ,об-типа спаривания. Суспензию облученных клеток (УФ лучи двух па раллельных бактерицидных ламп ДБ-30- 1, мощность дозы 2,5 Дж( с), рассевают на чашки с полноценной питательной средой ЛАРД (глюкоза 20 г, пентон 20 г, дрожжевой автолизат 10 мл, агар 30 г, дистиллированная вода до 1 л) из расчета 200-300 колоний на чашку. Через 3 дня выросшие клоны пересевают методом отпечатков на чашки, засеянные густой суспензие ( клеток на чашку) тестерного штамма ВКПМ У-614, сверхчувствитель- ного к действий) об-фактора (Ssa) . Через 2 дня выявляют зоны подавления

102

роста вокруг отпечатанных клонов и с матричных чашек отбирают клоны, nd- давляющие рост штамма ВКПМ У-61А. Все выделенные клоны представляют собой клоны об-типа спаривания. Гомозиготи- зация по локусу типа спаривания иногда сопровождается гомозиготизацией по генам thr4 и Ieu2, которые у Saccharonyces cerevisiae также находятся в ТГГ хромосоме и сцеплены с локусом об-типа спаривания. Результаты приведены в табл.1.

Отбор клонов oi -типа спаривания у штамма Saccharomyces cerevisiae П5188 дан в табл.1.

Таблица 1

Количество отобранныхсС-клонов

Фенотип об-клонов

Thr

Leu

6010

12

40 45 gg gg

35

Пример 2. В качестве исходных культур для отбора штаммов об -типа спаривания используют два диплои- да, гетерозиготные по локусу ei-типа спаривания, П5199 и П5200, а также три триплоида 3-172, 3-174 и 3-175 из той,же коллекции. Отбор об-клонов проводят по способу, описанному в примере 1.

Результаты сведены в табл.2.

Т а блица 2

- 1333710

Формула изобретения спаривания, отличающийся

тем, что, с целью ускорения и удешевСпособ отбора штаммов дрожжей-са- ления процесса отбора, в качестве харомицетов ot -типа спаривания, пред- тестерного штамма об-типа спаривания усматривающий рассев исходной- культу- нспользугот штамм, сверхчувствитель- ры отдельными клонами, пересев их на ньй к действию oi.-фактора, а отбор полноценную питательную среду мето- клонов ведут на исходном посеве пудом отпечатков на густой посев тес- тем выявления зон подавления роста терного штамма ot -типа спаривания с ю тестерного штамма вокруг отпечатан- последующим отбором клонов oi -типа ных клонов.

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается генетико-селекционных работ с дрожжами-сахаромицетами. Цель изобретения - ускорение и удешевление процесса отбора клонов oi -типа спаривания. Способ заключается в отборе oi-клонов, подавляющих ррст тестерного штамма oi -типа спаривания, сверхчувствительного к действию oi.-фактора, при посеве методом отпечатков анализируемых колоний на густой посев тестерного штамма. 2 табл. 00 00 со