Способ определения этамбутола в сыворотке крови Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в клинической фармакологии при изучении метаболизма и фармакокинетики этам- бутола, а также при выборе оптимальных доз при лечении ууберкулеза.

Цель изобретения - упрощение способа за счет того, что в пробу добавляют внутренний стандарт, вьщеляют анализируемое вещество, упаривают, проводят трифторацилирование с последующим газохроматографическим анализом, а также используют в, качестве внутреннего стандарта изоверин, выделение анализируемого вещества на колонке с силикагелем RSILPREP SILIC (25-40 мкм), при этом элюирование проводят смесью гептан - изрпропансж объемном соотношении 88:12.

Способ осуществляют следующим образом,

В стеклянную ампулу вносят 0,02м сыворотки, 0,1 мл этанола с внутренним стандартом (0,05%-ный раствор изоверина). После перемешивания смес высупивают досуха в токе.азота. Добавляют 50 мкл ангидрида трифторук- сусной кислоты, ампулу запаивают и проводят реакцию при 70°С 20 мин. После этого содержимое уп аривают в токе азота и сухой остаток растворяют в 0,2 мл гептана. Затем весь растворитель с содержащимися в нем три- фторацильными производными ЭМБ переносят на микроколонку с 18iO,5 мг силикагеля RSIL PREP SILICA (25- 40 мкм) и продавливают через сорбент с помощью медицинского ишрица на 2 мл. Затем на колонку наносят 0,2 мл элюирующей смеси гептан - изо пропанол в объемном соотношении 88:12, продавливают через сорбент в чистую ампулу и 2 мкл вводят в хроматограф. Анализ проводят на набивной колонке длиной 1,8 м, внутренВлияние изменения соотношения в смеси гептан - изопропанол на конечный выход этамбутола

Относительное содержание этамбутола в элюате, %

77

5

0

5

0

5

0

5

НИМ диаметром 2 мм, наполненной сорбентом Chromosorb WAW 100-120 меш с жидкой фазой OV - 101 3%, газ-носитель - азот, 20 мл/мин.

Хроматографические условия анализа: Т инжектора 250 с, Т колонки 165 с, Т электронно-захватного детектора .

В табл.1 представлены данные, подтверждающие выбор оптимального соотношения в элюирующей смеси гептан- изопропанол.

Соотношение гептан-изопропанол 88:12 является оптимальным. При меньших количествах изопропанола ЭМБ не полностью элюируется с колонки, при больших количествах изопропанола элюирующая смесь становится более полярной и смьшает с колонки наряду с искомым соединением различные примеси, мешающие последующему хроматог- рафическому определению. При этом относительное содержание ЭМБ в образце снижается.

Способ позволяет при сохранении точности определения ЭМБ (табл.2) существенно упростить процесс.

Формула изобретения

Способ определения этамбутала в сыворотке крови, включающий добавление в пробу внутреннего стандарта, выделение анализируемого вещества, упаривание, трифторацилирование с последующим газохроматографическим анализом, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве внутреннего стандарта используют изоверин, а рьщеление анализируемого -вещества осуществляют на колонке с силикагелем RSIL PREP SILICA с размером частиц 25-40 мкм, при этом элюцию проводят смесью гептан - изопропанол в объемном соотношении 88:12.

Таблица 1

92

95

75

Сравнение концентраций ЭМБ, определенных из 20 мкл сыворотки крови.больных по предлагаемому способу и способу-прототипу

Редактор А.Огар

Составитель .Агуреев Техред Л.Сердюкова

Заказ 3958/42Тираж 776Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

.Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Таблица 2

Корректор А.Тяско

Для упрощения способа в пробу забавляют изоверин, проводят трифтор- ацилирование. Смесь упаривают и растворяют в гептане. Вьщеляют анализируемое вещество на колонке с силика- гелем PREP Silica (25-40 мкм), при этом элюирование проводят смесью геп- тан - изопропанол в объемном соотношении 88:12. 00 со 4ib