Способ дифференциальной диагностики инфекционного гепатита с желтухами невирусной природы Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 G01N33/49 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для дифференциальной диагностики инфекционного гепатита с надпеченочными и подпеченочными желтухами.

Целью изобретения является повышение точности, упрощение способа и его ускорение.

Способ осуществляется следующим образом.

Сыворотку разводят боратным бу- ферньм раствором (рН 8.4) в отношени 1:3 и разливают по 0,33 мл в два ряда пробирок: 1-й ряд содержит 3 мл буферного раств ора и служит контролем, 2-й,ряд 3 мл 4,166%-ного раствора полиэтиленгликоля (ПЭГ) - опытная проба. Инкубацию проводят при комнатной температуре в течение 1 ч, затем пробы замеряют на фотоэлектро- колориметре в диапазоне синего цвета с длиной волны до 400 мкм для определения разницы оптической плот- ;ности контроля (сыворотка с буфером) и опыт (сыворотка с ПЭГ). При по- ложительных результатах отмечается помутнение опытной пробы разной интенсивности. Сыворотку сохраняют в холодильнике при 4 С не более 7 сут, что позволяет накапливать сыворотки от больных и по мере надобности ставить их одновременно. Определяют содержание агрегатированного гамма- глобулина.

Так как показания различных приборов могут иметь некоторые колебания, -для стандартизации показаний приборов используют калибровочную кривую, построенную следующим образом.

Различные серии коммерческого гамма-глобулина разводят физиологическим раствором в отношении 1:10 «(1 мл гамма-глобулина + 9 мл физраствора) и агрегируют на водяной бане при 61 С в течение 1 ч. От каждой серии агрегатированного гамма-глобулина берут по 0,33 мл и смешивают с 3 мл 4,166%-ного раствора ПЭГ. Инкубируют в течение 1 ч при комнатной температуре, затем центрифугируют при 5000 об/мин. Полученный осадок дважды отмьшают смесью 0,3 мл физраствора и 3 мл 4,166%-ного раствора ПЭГ. К осадку добавляют 2 мл 0,1 н.раствора ЫаОН.и определяют в полученных пробах белок по методике .Лоури. Таким образом устанавливают

5

0

5

0

5

0

5

0

5

содержание белка для исходного агрегатированного raMi ia-глобулина, вступившего в реакцию с ПЭГ. После этого для каждой серии агрегатированного гамма-глобулина готовят на физрастворе следующие разведения: 1 :2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 - по 1 мл. С каждым из этих разведений ставят реакцию так же. как с сывороткой. С помощью ФЭК замеряют разницу между опытной и контрольной, пробами и снимают показания прибора для каждого разведения гамма-глобулина. Зная количество белка, вступившего в реакцию с ПЭГ, для исходного агрегатированного препарата, вычисляют белок каждого разведения. Далее строят калибровочную кривую, где по оси абсцисс откладьшают количество агрегатированного гамма-глобулина, а по оси ординат - оптическую плотность в единицах ФЭКа.

Данные циркулирующих иммунных комплексов (ЩК) у больных острым инфекционным гепатитом и желтухами другого генеза сравнивают с показателями ЦИК у здоровых лиц, содержание ЦИК у которых колеблется от 20 до 200 мкг/мл.

При значениях ЦИК более. 200 мкг/мл делают вывод о наличии инфекционного I гепатита, а при содержании ЦИК от 20 до 200 мкг/мл и при наличии соответствующей клинической картины делают вывод о желтухе невирусной природы.

Наблюдали 151 больного желтушной формой острого инфекционного гепатита легкого и среднетяжелого течения и 43 больных желтухами другого генеза.

Результаты показали, что у боль- ных острым инфекционным гепатитом с легким и среднетяжелым течением заболевания в разгаре желтухи содержание ЦИК повышено (83,43% больных) и достоверно отличается от показателей ЦИК у здоровых лиц.

Для сравнения наблюдали больных желтухами невирусной этиологии: механическими желтухами (калькулезный холецистит,опухоли .гепатобилиарной системы) 36 человек, надпеченочными желтухами (гемолитические желтухи, пигментные гепатозы) 7 человек.

Содержание. ЦИК у этих больных колеблется в пределах, наблюдаемых у здоровых лиц, и достоверно отлича-3

ется от показателей ЦИК у больных инфекционным гепатитом.

Пример 1. Больная М., 40 лет. Поступила в инфекционный стационар с подозрением на инфекционный гепатит. Жалобы на боли в животе, тошноту, рвоту, плохой аппетит, температура 38,5 С. Отмечалась болезненность при пальпации в правом подреберье, нарастала желтуха. Наряду с изменением функциональных про печеки: общий билирубин 10,56 мг% (в норме до 1 мг%)5 прямой билирубин 8,56 мг% (в норме О мг%). тимоловая проба 130 оп. ед. (в норме до 40 оп. ед.)} аланинаминотрансфераза в разведении 1:10 940 к.ед. (в норме до 100 к.ед.) - имелась выраженная би- лирубинурия.

Параллельно с этими анализами проведено определение содержания ЦИК OQ предложенному методу. Оно оказалось повышенным 331 мкг/мл (в норме до 200 мкг/мл). На основании этих данных поставлен диагноз: острый инфекционный гепатит, желтушная форма, среднетяжелое течение. Правильно поставленньм диагноз способствовал адекватной терапии и скорейшему выздоровлению больной.

У остальных 150 больных диагноз острого инфекционного гепатита ставился аналогичным образом.

Пример 2. Больная Н.,60 лет Поступила в инфекционный стационар с подозрением на инфекционный гепатит, с жалобами на слабость, тошноту, рвоту, боли в животе, температуру 138,6°С . При обследовании выявлена выраженная желтушность кожи и склер, умеренная болезненность при пальпации в области правого подреберья, билирубинурия, изменение функциональных проб печени: общий билирубин 6,4 мг%, прямой билирубин 4 мг%, тимоловая проба 7 оп.ед..

Составитель Г.Крюкова Редактор Л.Веселовская Техред А.Кравчук Корректор С.Черни

5789/40

Тираж 776Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

.по делам изобретенж и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Пдректная, 4

559274

аланинаминотрансфераза в разведении 1:10 250 к.ед. Проведено определение уровня ЦИК в сыворотке крови (54 мкг/мл). На основании этих данных исключена возможность инфекционного гепатита, предположитель- ньш диагноз - хронический калькулез- ный холецистит, холедохолитиаз, ме- ig ханическая желтуха. Больная переведена в хирургическую клинику. Диаг- ; ноз подтвердился.

У остальных 35 больных предположительный диагноз ставился аналогич- 15 ным образом.

Таким образом, предложенный способ позволяет более точно диагностировать инфекционный гепатит и желтухи невирусной природы по содержанию 20 в сыворотке крови ЦИК, при этом используются и другие клинико-лабора- торные данные.

Предложенньй способ более точен за счет точного определения желтух 25 невирусной природы (12,5%), в то же время он менее трудоемок и не требуО

ет дефицитных реактивов, причем время на постановку реакции сокращается в два раза (вместо 4 ч по спосо- 30 бу-прототипу 2 ч для исследования 30 сывороток)о

Формула изобретения

35

Способ дифференциальной диагностики инфекционного гепатита с желтухами невирусной природы путем исследования крови, о тличающий- с я тем, что, с целью повышения

.Q точности, ускорения и упрощения способа, в исследуемой крови определяют циркулирующие иммунные комплексы и при содержании их равном 200 мкг/мл и менее диагностируют желтуху неви--

.g русной природы, а при содержании более 200 мкг/мл диагностируют инфекционный гепатит.

Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения - повышение точности, ускорение и упрощение способа. Берут различные серии агрегированного гамма-глобулина, смешивают с полизтиленгликолем и инкубируют. После центрифугирования осадок отмывают и к осадку добавляют едкий натрий. В пробах определяют содержание белка и снимают показания прибора для каждого разведения гамма-глобулина. Вычисляют содержание белка для каждого разведения. Данные циркулирующих иммунных комплексов у больных сравнивают с зтими же показателями у здоровых людей. Способ не требует дефицитных реактивов. с S (Л со ел ел о ю