Способ определения Т-лимфоцитов Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

1

Изобретение относится к медицине, а именно к исследованию биологических материалов человека, и животных иммунологическими методами. Оно может ыть использовано в клинической иммунологии, хирургии, терапии и других областях медицины в научно- исследовательских, диагностических и лечеб1шх целях.

Целью изобретения является повышение точности определения Т-лимфоци- тов за счет выявления Т-лимфоцитов, на несущих Е-рецепторЫо

Пример. Выделение мононукле- аров. 5 мл венозной крови стабилизируют гепарином (250 ед,/мп) и наслаивают на 3 мл раствора верографинфи- колл (d l5082 г/см). После центрифугирования при 400g в течение 40 мин мононуклеары собирают пастеркой с поверхности раствора и трижды отмывают первый раз при 400g 10 мин, второй - при 200g 5 мин (в забуферен- ном физрастворе) и третий - 200g 5 мин .в среде 199„ Клетки суспендируют в 1 МП среды 199, подсчитывают в камере Горяева и разводят средой 199 до концентрации 2,5-10 кл /мп

Приготовление эритроцитов барана„ Венозную кровь барана хранят не более двух недель после забора--с консервантом (15% от общего объема); используют трижды отмытые средой 199 (первая и вторая отмывка при 200g 5 мин, третья - при 400g 5 мин) эритроциты барана в виде 1%-ной суспензии.

Розеткообразованиео 0,2 мп суспензии мононуклеаров смешивают с О,, 2 мп в.звеси эритроцитов барана, центрифугируют 5 мин при 200g, инкубируют 1,5 ч при 37 С, суспендируют энергичным встряхиванием пробирок до получения гомогенной суспензии (без видимых на глаз сгустков), вновь центрифугируют 5 мин при 200g и инкубируют при 4°С 16-18 ч„ Перед подсчетом удаляют 0,2 мл надосадочной жидкости, осадок суспендируют осторожным покачиванием пробирок (обычно 10-15 движений) , каплю полученной суспензии помещ,ают на предметное стекло и нак

-

-

3597402

рывают покровнымо При 300-400-кратном увеличении под воздушной иммерсией под считывают количество лимфоцитов с 3 и более прикрепившимися эритроцитами барана (розетки) на 100 лимфоцитов.

В таблице приведены результаты исследования Т-лимфоцитов периферичес- 0 кой крови здоровых людей и больных ревматоидным артритом, хирургическим сепсисом и перитонитом. Для сравнения приведем результаты исследования тех же образцов крови методом-прото- 45 типом и методом-анапогом.

Предлагаемый способ во всех обсле- дованнь1х группах дает более высокие результаты определения количества

2Q Т-лимфоцитов (повышение количества Т-клеток при ревматоидном артрите . недостоверно) по сравнению со способом-аналогом и способом-прототипом, которые почти в два раза отличаются

25 друг от друга в случае сепсиса и перитонита (таблица).

Метод розеткообразования для идентификации Т-лимфоцитов тем более то- 30 чен, чем больший процент розеткооб- разующих клеток он выявляет, следовательно, предлагаемый способ примерно в два раза более точен, чем способ-прототип при исследовании здоровых и больных, и также в два раза более точен по сравнению со способом- аналогом при исследовании больных сепсисом и перитонитомо

35

0

Формула изобретения

Способ определения Т-лимфоцитов, включающий смешивание мононуклеарных клеток с эритроцитами бадана, центрифугирование, инкубирование при 37 и 4°С, ресуспендирование и подсчет розеткообразующих клеток, о т л и г ч а ю щ и и с я тем, что, с целью повышения точности способа за счет выявления Т-лимфоцитов, не несущих

0

Е-рецепторы, после инкубирования при 37°С осадок клеток суспендируют и центрифугируют.

31359740

Процентное соде1 жание роэеткообразующих клеток среди мононукпеаров здоровых и больных, определяемое разными методами

Примечание Достоверно.сть различий по сравнению с предлагаемым способом вычислена с помощью парного критерия t Стъюдента.

Редактор Т.Парфенова

Составитель Г.Крюкова Техред Л.Сердюкова

Заказ 6151/48Тираж 776Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие г.Ужгород, ул. Проектная,4

Корректор И.Myска

Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения - повьшение точности способа. Суспензию мононук- леаров смешивают с взвесью эритроцитов барана, центрифугируют и инкубируют. После суспендирования снова центрифугируют суспензию и инкубируют о Осадок суспендируют, каплю суспензии помещают на предметное стекло и подсчитывают количество лимфоцитов с 3 и более прикрепившимися эритроцитами барана на 100 лимфоцитов Точность способа повьшается в 2 разао 1 табЛо со сд со о