СПОСОБ УДАЛЕНИЯ Т-ЛИМФОЦИТОВ ИЗ СУСПЕНЗИИ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА Советский патент 1995 года по МПК G01N33/53 

Описание патента на изобретение SU1577520A1

Изобретение относится к медицине, а именно к способам получения материалов для иммунологических испытаний с использованием красных кровяных телец.

Цель изобретения обеспечение полноты удаления Т-лимфоцитов за счет удаления предшественников Т-лимфоцитов.

Сущность изобретения заключается в том, что очищенную от Т-лимфоцитов популяцию получают удалением розеток, образовавшихся с эритроцитами барана, в которые добавлено 22-27% эритроцитов барана, нагруженных Е-рецептором, в связи с чем в розеткообразовании участвуют не только зрелые, несущие Е-рецептор Т-клетки, но и их предшественники, которые не несут Е-рецептор, но имеют структуру для его реабсорбции; розетки удаляют в растворе верографин фиколл.

П р и м е р. Мононуклеарные клетки (МНК) выделяют из периферической крови, стабилизированной гепарином (250 ед/мл), методом градиентного центрифугирования в растворе верографин фиколл. Получение Е-рецептора проводят путем инкубации МНК в концентрации 2,5 х 106 кл./мл на водяной бане при 45оС в течение 30 мин, добавления равного объема среды 199 (подогретой до 45оС) и инкубации еще в течение 30 мин при 45оС. Затем клетки осаждают при 400g 10 мин, надосадок замораживают, используя по мере необходимости в качестве источника Е-рецептора.

Розеткообразование: к 0,5 мл МНК (10 х 106 кл./мл) добавляют 0,15 мл 10% -ной взвеси ЭБ, 0,1 мл 5%-ной взвеси ЭБ-Ер и 0,25 мл 2%-ного раствора желатина в среде 199. Смесь клеток перемешивают, осаждают при 200 g 10 мин и наблюдают 40 мин при комнатной температуре.

Получение ЭБ-Ер: кровь барана трижды отмывают средой 199 и готовят 10% -ную взвесь. Часть взвеси инкубируют с равным объемом Е-рецепторсодержащего надосадка клеток при комнатной температуре в течение 1 ч.

Выделение "не Т"-клеток: после инкубации розеток удаляют 0,8 мл надосадочной жидкости, осадок суспендируют осторожным покачиванием пробирок, добавляют 0,8 мл надосадка, перемешивают и медленно наслаивают на 3 мл раствора верографин фиколл (содержащего 0,25% желатина). После центрифугирования (10 мин, 1000 g, при комнатной температуре) с поверхности раствора собирают клетки, которые трижды отмывают средой 199 и суспендируют для подсчета в 1 мл среды.

Предлагаемый способ позволяет получить более чистую популяцию "не Т"-клеток, содержащую в семь раз меньшее количество малодифференцированных Т-лимфоцитов по сравнению со способом-прототипом. Кроме того, в два раза уменьшается и количество зрелых, несущих Е-рецептор Т-лимфоцитов.

Похожие патенты SU1577520A1

название год авторы номер документа
Способ определения активности тимуса 1986
  • Кожевников В.С.
  • Лозовой В.П.
SU1470056A1
Способ прогнозирования лизиса аутодермотрансплантата 1986
  • Волчек Игорь Анатольевич
  • Кожевников Владимир Сергеевич
  • Лозовой Вадим Петрович
SU1455316A1
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ИММУНОДЕФИЦИТНОГО СОСТОЯНИЯ 1999
  • Потапов В.Н.
  • Исаченко Е.Г.
  • Герасименко Т.П.
RU2179316C2
СПОСОБ ОДНОВРЕМЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛЕТОК С РЕЦЕПТОРАМИ К БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫМ ВЕЩЕСТВАМ И ИХ ПОПУЛЯЦИОННОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ 1994
  • Щуковская Т.Н.
RU2081418C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОКАЗАНИЙ К ЛЕЧЕНИЮ ЦИТОСТАТИКАМИ И ГЛЮКОКОРТИКОИДАМИ 1996
  • Рябов С.И.
  • Ракитянская И.А.
RU2112986C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК В ЭКСПЕРИМЕНТЕ 1993
  • Гринзайд Ю.М.
  • Мельникова В.И.
RU2024905C1
Способ выделения лимфацитов и гранулоцитов 1982
  • Михайлова Лидия Григорьевна
  • Давыдова Наталия Ивановна
  • Серова Людмила Дмитриевна
  • Кожина Ирина Сергеевна
  • Гербут Галина Борисовна
  • Нефедова Ирина Алексеевна
  • Салихов Сурат Ахрамович
SU1123645A1
Способ определения е-розеткообразующих клеток 1979
  • Каральник Борис Вольфович
  • Лещинская Людмила Цезаревна
SU862919A1
Способ разделения лимфоцитов периферической крови 1979
  • Зинковская Людмила Николаевна
  • Бубнов Александр Николаевич
  • Калинина Наталия Михайловна
  • Герасева Татьяна Александровна
  • Яковлев Андрей Николаевич
SU895439A1
Способ определения функциональной активности Т-лимфоцитов-супрессоров 1989
  • Гнилорыбов Андрей Михайлович
  • Синяченко Владимир Власович
  • Сокрут Валерий Николаевич
  • Агеев Александр Николаевич
  • Заплотная Анна Алексеевна
SU1702316A1

Реферат патента 1995 года СПОСОБ УДАЛЕНИЯ Т-ЛИМФОЦИТОВ ИЗ СУСПЕНЗИИ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА

Изобретение относится к иммунологии. Целью изобретения является обеспечение точности удаления Т-лимфоцитов из суспензии мононуклеарных клеток человека. Цель достигается путем добавления интактных эритроцитов барана к суспензии мононуклеаров для образования розеток, последующего осаждения розеток на градиенте плотности Т-лимфоцитов в растворе верографин фиколл, причем дополнительно к интактным эритроцитам барана добавляют 22 27% эритроцитов барана, нагруженных Е-рецептором. Способ по изобретению позволяет получить более чистую популяцию "неТ"-клеток, содержащую в семь раз меньшее количество малодифференцированных Т-лимфоцитов по сравнению со способом-прототипом.

Формула изобретения SU 1 577 520 A1

СПОСОБ УДАЛЕНИЯ Т-ЛИМФОЦИТОВ ИЗ СУСПЕНЗИИ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА, включающий добавление интактных эритроцитов барана к суспензии мононуклеарных клеток для образования розеток, последующее осаждение розеток на градиенте плотности Т-лимфоцитов в растворе верографин-фиколл, отличающийся тем, что, с целью обеспечения полноты удаления Т-лимфоцитов за счет удаления предшественников Т-лимфоцитов, дополнительно к интактным эритроцитам барана добавляют 22-27% эритроцитов барана, нагруженных Е-рецептором.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 1995 года SU1577520A1

Кожевников В.С
и др
Иммунология, 1985, N 4, с
Нивелир для отсчетов без перемещения наблюдателя при нивелировании из средины 1921
  • Орлов П.М.
SU34A1

SU 1 577 520 A1

Авторы

Кожевников В.С.

Ермолович Е.Ю.

Лозовой В.П.

Даты

1995-09-10Публикация

1988-06-20Подача