Способ количественного определения @ -аминокислот Советский патент 1987 года по МПК G01N21/78 

Изобретение относит ся к аналитической химии, а именно к способам количественного определешия -аминокислот ,

Цель изобретения - повышение точности и чувствительности определения.

Пример 1. Определение валина при соотношении о-фталевого альдегида и дитиотреитола 1:2 при рН 9,7.

0,25 мл раствора валина концентрацией 2 10 М и 0,25 мл реагента, который готовят смешиванием 0,1 мл раствора о-фтал вого альдегида концентрацией 14,4 мг/мл в этиловом спирте, 0,1 мл этанольного раствора, дитиотреитола концентрацией 30,8 мг/мл н 5 мл 0,1 М боратного буоюра рН 9,7 (этанольные растворы о-фтапевого альдегида и дитиотреитола. стабильны неограниченно долго, реагент стабилен в течение дня),помещают в ячейку спектрофотометра и определяют оптическую плотность при 340 нм относительно разбавленного в два раза реагента. Оптическая плотность составляет 0,059, что при коэффициенте экс- тинкции 5700±200 М -см отвечает Концентрации валина (2,0010507) ,

П р И м е р 2. Определение валина при соотношении о-фталевого альдегида и меркаптоянтарной кислоты 1:2 и при рН среды 9,7,

го буфера рН 9,7. Концентрация лизина . Оптическая плотность составляет 0,054, что при коэффициенте (j экстинкции 10400+100 М см соответствует концентрации лизина (1,00± to,07)- 10 М.

П р и м е р- 4. Определение лизина при рН 9,7 и соотношение реагентов

10 1:1 (о-фталевый альдегид и меркапто- янтарная кислота).

Оптическую плотность определяют по примеру 1. Реагент готовят смешиванием О, 1 мл раствора о-фталевого аль15 дегида в этиловом спирте, 0,05 мл раствора меркаптоянтарной кислоты в 0,05 М боратном буфере (концентрации по примеру 2) и 5,5 м.п 0,1 М боратного буфера при рН 9,7. Концентрация

20 лизина 110 М, Оптическая плотность

составляет 0,057, что при коэффициенте экстинкции 111001300 см отвечает концентрации лизина (1,0010,03) .

25

Пример 5. Определение глицина при рН 9,7 и соотношении реаген- (о-фталевый альдегид и дитио- треитол).

Готовят реагент и определяют опти- 30 ческую плотность по примеру 1. Концентрация глицина 2-10 М. Оптическая плотность составляет 0,054, что при коэффициенте экстинкции 52001100 М

соответствует концентрации гли- 0,25 мл,раствора валина концентра- д цина (2,OOtO,04).

с.. „„„Примерб. Определение глицина

цией 2-10 М и 0,25 мл реагентаэ который готовят смешиванием 0,1 мг/мл раствора о-фталевого альдегида концентрацией 14,4 Mr/i in Б этиловом спирте, Ojl мл раствора меркаптоянтарной кислоты в 0,05 М боратном буфере ; концентрацией 30,0 мг/мл и 5 мл 0,1М боратного буфера рН 9,7, помещают в ячейку спектрофотометра и измеряют оптическую плотность по примеру 1. Оптическая плотность составляет 0,079, что при коэффициенте экстинкции 7700± ilOO М отвечает концентрации валина (,03),

П р и м е р 3, Определение лизина при рН 9,7 и соотношении реагентов 1;1 (о-фталевый альдегид и дитиотреи- тол).

Оптическую плотность определяют по примеру 1. Реагент готовят смеши-, вакием 0,1 мл раствора о-фтале вого альдегида в этиловом спирте, 0,05 дитиотреитола в этаноле (концентрации По примеру 1) и 5,5 мл 0,1 М боратнопри рН 9,7 и соотношении реагентов 1:2 (о-фталевый альдегид и меркапто- янтарная кислота),

40, Реагент готовят по примеру 2. Оптическую плотность определяют по примеру 1. Концентрация глицина 2-10.М. Оптическая плотность 0,071 при коэффициенте экстинкции 69001100 М -см

j«g отвечает концентрации (2,0010,03) .

Пример 7. Определение гисти- дина при рН 9,7 и соотношении реагентов 1:2 (о-фталевый альдегззд и дитио50 треитол).

Реагент готовят и оптическую плотность измеряют по примеру 1. Концентрация гистидина . Оптическая плотность 0,052 при коэффициенте

55 экстинкции 50001100 . см соответствует кон,тте..ытрации гистидина (2,001

-0,04)х10- М.

П р и м е р Е дина при рН 9,7

, Определение гисти- и соотношении peaго буфера рН 9,7. Концентрация лизина . Оптическая плотность составляет 0,054, что при коэффициенте экстинкции 10400+100 М см соответствует концентрации лизина (1,00± to,07)- 10 М.

П р и м е р- 4. Определение лизина при рН 9,7 и соотношение реагентов

1:1 (о-фталевый альдегид и меркапто- янтарная кислота).

Оптическую плотность определяют по примеру 1. Реагент готовят смешиванием О, 1 мл раствора о-фталевого альдегида в этиловом спирте, 0,05 мл раствора меркаптоянтарной кислоты в 0,05 М боратном буфере (концентрации по примеру 2) и 5,5 м.п 0,1 М боратного буфера при рН 9,7. Концентрация

лизина 110 М, Оптическая плотность

составляет 0,057, что при коэффициенте экстинкции 111001300 см отвечает концентрации лизина (1,0010,03) .

Пример 5. Определение глицина при рН 9,7 и соотношении реаген- (о-фталевый альдегид и дитио- треитол).

Готовят реагент и определяют опти- ческую плотность по примеру 1. Концентрация глицина 2-10 М. Оптическая плотность составляет 0,054, что при коэффициенте экстинкции 52001100 М

соответствует концентрации гли- цина (2,OOtO,04).

при рН 9,7 и соотношении реагентов 1:2 (о-фталевый альдегид и меркапто- янтарная кислота),

Реагент готовят по примеру 2. Оптическую плотность определяют по примеру 1. Концентрация глицина 2-10.М. Оптическая плотность 0,071 при коэффициенте экстинкции 69001100 М -см

отвечает концентрации (2,0010,03) .

Пример 7. Определение гисти- дина при рН 9,7 и соотношении реагенов 1:2 (о-фталевый альдегззд и дитиотреитол).

Реагент готовят и оптическую плотность измеряют по примеру 1. Концентрация гистидина . Оптическая плотность 0,052 при коэффициенте

экстинкции 50001100 . см соответствует кон,тте..ытрации гистидина (2,001

-0,04)х10- М.

П р и м е р Е дина при рН 9,7

, Определение гисти- и соотношении pea3136

ентов 1:2 (о-фталевый альдегид и мер-- аптоянтарная кислота). Реагент готоят по примеру 2.

Оптическую плотность определяют по римеру 1. Концентрация гистидина М, Оптическая плотность 0,066 ри коэффициенте экстинкции 6500i tlOO М -см соответствует концентрации (2,00±0,03)- .

П р и м е р 9. Определение аргили- на при рН 9,7 и соотношении реагентов 1:2 (о-фталевый альдегид и дитиотреи- тол) .

Реагент готовят и оптическую плотность измеряют по примеру 1. Концентрация аргинина 2 10 М. Оптическая плотность составляет 0,067, что при коэффициенте экстинкции 6500i200 М отвечает концентрации аргинина (2,OOiO,06).

Пример 10. Определение аргинина при рН 9,7 и соотношении реагентов 1:2 (о-фталевый альдегид имеркап- тоян-тарная кислота) .

Реагент готовят по примеру 2. Оптическую плотность измеряют по примеру 1. Концентрация аргинина 2-10 М. птическая плотность 0,084 при коэффициенте экстинкции 8200 + 200 М . соответствует концентрации (2,00t iO,04) .

П р и м е р .11. Определение лизина при рН 9,7 и соотношении реагентов 1:10 (о-фталевый альдегид и меркапто- янтарная кислота).

Оптическую плотность определяют по примеру 1. Реагент готовят смешиванием 0,1 мл.раствора о-фталевого альдегида в этиловом спирте и 0,5 мл раствора меркаптоянтарной кислоты в 0,1 н боратном буфере (концентрации по примеру 2) и 5 мл 0,1 М боратного буфера с рН 9,7. Концентрация лизина I-IO M. Оптическая плотность 0,055 при коэффициенте экстинкции 11100± ±300 -см отвечает концентрации лизина (0,96+0,03)10 М. - .

Пример 12. Определение лизина при рН 9,7 и соотношении реагентов 1:40 (о-фталевый альдегид и меркапто- янтарная кислота).

Оптическую плотность определяют при 340 нм через 20 мин после смешивания реагента и анализируемой пробы. Реагент готовят смешиванием 0,1 мл раствора о-фталевого альдегида в этиловом спирте и 2 мл раствора меркаптоянтарной кислоты в 0,05 М боратном

74

буфере (концентрации по примеру 2) и 3,5 мл 0,1 М боратного буфера при рН 9,7. Концентрация лизина 2-10 М.

Оптическая плотность составляет

0,057, что при коэффгпи С ггс экстипк-- ции 11100 + 300 i-TRct;aciT концентрации лизина (1,0010..O- i) -1C . -i. П р и м е-р 13, Опредслени.е алаиина при рН 11 и соотношеншт реагентон 1:2 (о-фталевьш альдегид и дитио- треитол).

Оптическую плотность определяют и реагент готовят по примеру 1 . Кон-центрация аланина 5 10 М. Оптическая плотность при измерении через 5,15 и 30 мин составляет 0,058, 0,048 и 0,030, что при коэффициенте экстинкции 23001100

концентрации (5,0 + 0,1) (4,0± + 0,1) (I,3t0,2).

Пример 14. Определение вали- на при рН 8 и соотношении реагентов 1:2 (о-фталевый альдегид и меркаптоянтарная кислота).

Оптическую плотность определяют по примеру 1. Реагент готовят по примеру 2. Концентрация валипа М. Оптическая плотность при измерении

через 5, 15 и 30 мин составляет

0,060, 0,048 и 0,028, что при коэффициенте экстинкции 4000±100 М см отвечает концентрации (3,0±0,1) х10- М; (2,410,1) (1,410,2)

Пример 15. Определение валина при рН 9,6 и соотношении о-фталевого альдегида и дитиотреитола 1:0,5. Оптическую плотность определяют по

примеру 1. Реагент готовят смешиванием 0,1 мл раствора о-фталевого альдегида концентрацией 14,4 мг/мл в этаноле и 0,025 мл раствора дитиотреитола концентрацией 30,8 мг/мл в

этиноле и 5 мл 0,1 К боратпого буфера с рН 9,6. Концентрация валина 4«10 М. Оптическая плотность составляет 0,060, что при коэффициенте экстинкции 28001 ±200 см отвечает концентрации

валина (4,0+0, 2) .

Приме р 16. Определение глицина при рН .9,5 и соотношении реагентов 1:2 (о-фталевый альдегид и меркапто- янтарная кислота).

Реагент готовят по примеру 2. Оп

тическую плотность определяют по примеру 1. Концентрация глицина 2-10 М. Оптическая плотность 0,071 при коэф- фи.циенте экстинкции 6900+100 М -см

51361477в

отвечает концентрации (2,00-i-0,03)«зируемой пробы смесью о-фталевого

.альдегида и тиосоединения при рН 8-11

Таким образом, предложенный спо-с последующим фотометрированием полусоб по сравнению с известным позволя-ценного раствора, отличаюет повысить точность и чувствитель-щ и и с я тем, что, с целью повышеность (до 0,001 мг/мл) определения.ния точности и чувствительности определения, в качестве тиосое;}инения исФормулаизо.бретенияпользуют дитиотреитол или меркаптоян10тарную кислоту при молярном соотношеСпособ количественного определениянии о-фталевого альдегида и тиосоеди;;(.- аминокислот путем обрабоГки анали-нения 1:1... 1:10.

Изобретение касается аналитической химии, в частности количественного определения «i-аминокислот (ЛК). Для повышения точности и чувствительности определения АК при обработке пробы о-фталевым ангидридом и тио- соединением в качестве последнего используют дитиотреитол или меркапто- янтарную кислоту при их молярном со отношении, равном 1:1...1:10. Реакцию ведут при рН 8-11 и полученный раствор подвергают фотометрированию. Эти условия позволяют определять разные АК с точностью до 0,001 мг/мл. оэ 05 4