Питательная среда для выращивания бруцелл Советский патент 1988 года по МПК C12Q1/04 

СА9

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для культивирования и поддержания бруцелл в L-форме. Цель изобретения - длительное поддержание бруцелл в L-формв. Питательную среду готовят следующим образом. В 1 л подогретого бульона поочередно растворяют глутаминовую кислоту, двузамещен- ный фосфорно-кислый калий, лимонную кислоту, серно-кислый магний, железо- аммониевый :. цитрат , глицерин. Доводят рН до 7,0-7,2, после этого добавляют агар, смесь кипятят до полного растворения агара. Перед посевом среду расплавляют.на водяной бане, остужают до . Затем в нее добавляют нормальную лошадиную сыворотку, ин- активированную при 1 ч. Длительность поддержания бруцелл в L-форме 60 пассажей (срок наблюдения).2 табл. с & (Л

со 00

113

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в медицине и ветеринарии для культивирования и поддержания L-форм бруцелл.

Цель изобретения - длительное поддержание бруцелл в L-форме.

Приготовление среды осуществляется следующим образом.

В 1 л подогретого бульона поочередно растворяют глутаминовую кислоту, двузамещенный фосфорно-кислый калий, лимонную кислоту, серно-кисльй магний, железоаммониевый цитрат, гли- церин. Раствор регулируют с помощью п NaOH до рН 7,0-7,2, после этого добавляют агар, смесь доводят до кипения до полного растворения агара. Готовую смесь разливают по 300,0 мл во флаконы, закрывают ватно-марлевы- ми пробирками и стерилизуют при 0,6 атмосферы 30 мип. Перед посевом среду расплавляют на водяной бане, остужают до . Затем в нее добавляют нормальную лошадиную сыворотку,инак- тивированную при 1 ч. Содержимо флакона разливают либо по пробиркам, либо по чашкам Петри (в зависимости от характера работы).

Для посева используют 2-суточную культуру двух штаммов бруцелл в L- форме: 7/13 и 66. Проверку чувствительности проводят посевом на чашки Петри суспензии обоих штаммов, содержащей 1000 м.кл. в 1 мл по О, 1мл. Посевы инкубируют при 37°С. Учет результатов проводят через 3-4 сут подсчетом выросших колоний..

Накопление биомассы осуществляют в пробирках. Посев одной стандартной петли (2 мм в диаметре) суспензии, содержащей 1-10 м. кл., проводят на косяки питательной среды. Посевы инкубируют при . Учет результатов проводят через 3 сут. Выросшую массу смывают физиологическим раствором и определяют число микробных клеток.

Проверку длительности поддержания бруцелл в L-форме проводят путем регулярных пересевов каждь1е 2 сут штаммов 7/13 и 66 60 раз.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами..

Пример 1. В 1л подогретого мясопептонного бульона поочередно растворяют, г/л: глутаминовая кислота 3,7; двузамещенный фосфорно-кис- льй 0,5; лимонная кислота 1,25

.

5 0 5

0

5

0

5

382

серно-кислый магний 0,5; железоаммониевый цитрат 0,05; глицерин 23,6. Устанавливают рН 7,0-7,2, добавляют 1,25 сухого питательного агара. Готовую смесь доводят до кипения, стерилизуют при 0,6 атм 30 мин. Перед посевом среду расплавляют на водяной бане, остужают до 5()°С и добавляют 15% нормальной лошадиной сыворотки инактивированной при 56°С 1 ч.

Пример2. В 1 подогретого мясопептонного бульона поочередно растворяют, г/л: глутаминовая кислота 5,0; двузамещенный фосфорно-кис- льш калий 0,62; лимонная кислота 2,5; серно-кислый магний 0,62; глицерин

31,5, сухой питательный агар 13,5; железоаммониевый цитрат 0,062. Готовую смесь доводят до кипения. Стерилизуют при 0,6 атм 30 мин. Перед посевом среду расплавляют на водяной бане, остужают до 56°С и добавляют 20% нормальной лошадиной сыворотки, инактивированной при 56°С 1 ч.

ПримерЗ. В1л подогретого мясопептонного бульона поочередно растворяют, г/л: глутаминовая кислота 6,2; двузамещенный фосфорно-кислый калий 0,75; лимонная кислота 3,7; серно-кислый магний 0,75; железоаммониевый цитрат 0,075; глицерин 39,4 . Устанавливают рН 7,0-7,2, добавляют 20,6 сухого питательного агара. Готовую смесь доводят до кипения, стерилизуют при 0,6 атм 30 мин. Перед посевом среду расплавляют на водяной бане, остужают до 56°С и добавляют 20% нормальной лошадиной сыворотки. Результаты проверки сроков поддержания бруцелл в L-форме, чувствительности и накопления биомассы приведены в табл. 1 и 2.

Таблица 1

Предлагаемая по примеру

1

2

2 60

2 60

Продолжение табл.1

Из результатов, приведенных в табл. 1, видно, что сроки поддержания бруцелл в L-форме без последующей реверсии в исходную форму при использовании предлагаемой среды в 2 раза выше по сравнению с известно (60 пассажей).

Известная среда не обеспечивает поддержание L-форм бруцелл.

Таблица

Предлагаемая 19+4,2 24 + 6,2 2-10

Известная 19+2,8 21 + 5,1 2-10 2-10

1370138

Данные, приведенные в табл. 2 показывают, что ростовые свойства предлагаемой и известной (аналог) питательных сред одинаковы.

Формула изобретения

Питательная среда для выращивания бруцелл, содержащая глутаминовую кислоту, двузамещенный фосфорно-кисльй калий, лимонную кислоту, серно-кислый магний, железоаммониевый цитрат,агар, глицерин, симмулятор роста и мясопеп- тоннь1й бульон, отличающая- с я тем, что, с целью длительного поддержания бруцелл в L-форме, она в качестве стимулятора роста содержит нормальную лошадиную сыворотку при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:

Глутаминовая

3,7-6,2

0,5-0,75 1,25-3,7 0,5-0,75

0,05-0,075

1,25-20,0

23,6-39,4

150-200 1 л