Способ определения концентрации гемоглобина в крови Советский патент 1988 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области биохимии и медицины, а именно к определению концентрации гемоглобина.

Цель изобретения - снижение токсичности.

Поставленная цель достигается за счет добавления к анализируемой пробе феррицианида калия соли жирной кислоты (С 4 -С,р ) , или додецилсуль- фата натрия.

Пример 1. Установление жирных кислот, образующих комплекс с гемоглобином.

В восемь пробирок, Содержащих по 0,2 мл раствора метге- моглобина приливают 4,8 мл раствора калиевой соли жирной кислоты. При этом в первую приливают раствор кап- риновой, во вторую - лауриновой, в третью - мйристиновой, в четвертую - пальмитиновой, в пятую - стеариновой, в шестую - арахиновой, в седьмую - олеиновой и в восьмую - арахидоновой кислоты. Пробы инкубируют 10 мин и регистрируют на спектрофотометре Спекорд,

В спектрах проб 3-8 наблюдается появление пика с максимумом поглощения при 540 нм, интенсивность которого не зависит от повьш ения концентрации соли жирной кислоты.

П р и м е р 2. Определение коэффициента экстинкции комплекса гемоглобина с миристатом.

В девять пробирок помещают по 4 мл растворов, содержащих гемоглобин в разных концентрациях, по 10 мМ трис - НС1, 1 мМ ЭДТА, рН 7,4. Добавляют в каждую 1 мл раствора, содержащего 5 мМ миристат калия, 6 мМ фер- рицианид калия, 10 мМ трис - НС1, 1 мМ ЭДТА, рН 7,4. Пробы инкубируют

ее ос сз ее

5-10 мин и измеряют оптическую плотность при 540 нм в кювете с толщиной слоя 1 см против холостой пробы, не содержащей гемоглобина. По данным ойтической плотности и известных кон- цйнтраций гемоглобина строят калиб- ро|вочный график, из которого опреде- ля{ют коэффициент экстинкции комплекса гемоглобина с жирной кислотой. Коэффициент равен 35920 М см или 8980 в расчете на 1 гем,

П р и м е р 3. Определение концентрации гемоглобина в крови,

I К 20 мкл крови приливают 5 мл pajcTBOpa, содержащего 1 мМ миристат к4пия, 0,6 мМ феррицианид калия, 1 мМ ЭДТА, 10 мМ трис-HCl, рН 7,4, Смесь инкубируют 10 мин и измеряют оптическую плотность при 540 нм в кювете с толщиной слоя 1 см против холостой пробы, не содержащей крови. Концентрацию гемоглобина в крови определяют по формуле

68000

1,9 - коэффициент для выражеНЬ(М)

251 или

8980-4 : НЬ (г/л) 1,9- Е 251, Е - оптическая плотность пробы ПИИ 540 нм,

: При ,27 ,9-0,27-251 129 г/л

Цифра 4 обозначает количество С1 бъединиц в молекуле гемоглобина, - коэффициент разведения крови.

8980-4

ния концентрации в г/л,

П р и м е р 4. Определение концентрации гемоглобина в крови.

В девять пробирок, содержащих 5 мл 0,06%-ного раствора додецилсульфата натрия, добавляют по 20 мкл крови до,Q нора, энергично встряхивают, инкубируют 10 мин при комнатной температуре и измеряют поглощение при 540 нм на спектрофотометре Спекорд в кювете с длиной оптического пути 1 см,

Рассчитывают концентрацию гемоглобина в крови по формуле, приводимой выше, учитывая что коэффициент молярной экстинкции гемоглобина с доде- цилсульфатом натрия равен 9860,

20

Формула изобретения

Способ определения концентрации гемоглобина в крови путем обработки

25 пробы крови комплексообразователем с последующим измерением оптической плотности при 540 нм и расчетом, отличающийся тем, что, с целью снижения токсичности, в качеJQ стве комплексообразователя используют додецилсульфат натрия, или феррицианид калия и соли жирных кислот (С, .

68000

1,9 - коэффициент для выраже8980-4

Изобретение относится к области биохимии и медицины и может быть использовано для определения концентрации гемоглобина в крови. Цель изобретения - снижение токсичности. К пробе крови добавляют додецилсульфат натрия или соль жирной кислоты (С С 2д),-феррицианид калия, ЭДТА, трис- НС1, затем смесь инкубируют десять минут и измеряют оптическую плотность при 540 нм в кювете с длиной оптического пути 1 см и рассчитывают концентрацию гемоглобина с учетом коэффициентов молярной экстинкции и разведения крови. с б (f. С