Способ формирования отделов нефрона в имплантатах Советский патент 1988 года по МПК A61B5/00 

САЭ СО

со ее

00 00

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для образования функционирующих структур органов (образование функционирующих структур нефронов может быть использовано для определения жизнеспособности биоптатов и органов для трансплантации, для излучения ор- ганотипической детер минадии тканей, для изучения влияния на нее различных медикаментозных средств),.

Целью изобретения является образование функционирующие отделов нефро- на, что достигается совместной им ппантацией коркового и мозгового веществ в соотношении 1:2 от линейного донора однолинейным /кивотным-реци- пиентам равного или меньшего возраста сразу после извлечения почки у доно- ра.

Способ осуществляют следующим об- разом.

У наркотизированного линейного животного-донора в стерильных условиях извлекают почку, скальпелем иссекают кусочек коркового и прилежащий к нему кусочек мозгового веществ в соотношении 1:2 и измельчают до размера 0,5-1,0 мм, кусочки коркового |и мозгового веществ смешивают и им- |плантируют подкожно животному-реци- Ьиенту той же линии. Период от извлечения органа у донора до имплантации кусочков его реципиенту составляет не более 30 мин. Используют реципиентов и доноров одной линии и одного пола, при этом возраст реципиен- |та не превьш1ает возраст донора. Через |б-8 сут имплантаты извлекают из ор |ганизма реципиента, фиксируют в жид-- сости Карнуа, заливают в парафин и |готовят срезы для гистологического И гистохимического ан;шизов. fta гистологическом препарате определяют тепень морфологической дифференци- ровки новообразованны : в имплантатах (Ьтделах , нефронов, гистохимически оп- 1()еделяют степень функдаональной зрелости этих структур.

Пример. 11роЕ1едена имплантация вещества почки линейных крыс Август однолинейным животным. В стерильных, условиях под эфирным наркозом у донора в возрасте 4 мес извле- левую йочку, в стерильной чаш- к|е Петри скальпелем вырезали кусочек itO4KH, включаниций на 1/3 корковое и аа 2/3 мозгов се вещества, размель™

Q

5 0

5 О п

0

5

чали корковое, а затем мозговое вещество до размера кусочков 0,5- 1,0 мм , смешивали кусочки коркового и мозгового веществ в соотношении 1:2 и стерильным зондом через разрез на коже брюшной стенки реципиента в возрасте 2,5 мес внесли имплантат в подкожную клетчатку. Разрез на коже реципиента зашивали стерильным шовным материалом. От момента извлечения почки у донора до имплантации прошло 20 мин.

На стадии 8 сут опыта животному внутрибрюшинно вводили питуитрин из расчета 5 ЕД на 1 кг веса животного- реципиента. Через 30 мин после введения провели эвтаназию реципиента путем декантации. У реципиента экс- тирпировали почки и имплантат, фиксировали в жидкости Карнуа 1 ч, заливали в парафин. На гистологических срезах толщиной 5-7 мкм проводили гистохимическую реакцию связывания коллоидального железа по методу Хей- ла. Окрашенные срезы микроскопиро- вали, В препаратах в разрастающейся , с оединительной ткани видны новообразованные эпителиальные структуры. различных отделов нефрона, почечные тельца, включающие эпителиальный и соединительно-тканный компонентЬ и по своим параметрам идентичные таковым в интактных почках.. В межкле- точньпс пространствах новообразованных канальцев накапливаются гликозамино- гликаны, при этом гистохимическая картина, в имплантатах аналогична таковой в почках реципиента Это, кроме морфологических тестов, служит еще одним подтверждением функциональной зрелости новообразованных в имплантатах отделов нефронов. 1

П р и м е р 2. Проведена имплантация ткани почки линейных крыс Би- стар однолинейным животным-реципиентам. Как донор, так и реципиент имели одинаковый возраст 3 мес. В. стерильных условиях под эфирным наркозом у донора извлекали левую почку, в стерильной чашке Петри отделили корковое вещество от мозгового,с помощью торсионных весов отделили кз сочек мозгового вещества весом 0,05 г и кусочек коркового вещества весом 0,025 г .Полученные кусочки коркового и мозгового веществ скальпелем размельчили до размера кусочков, 0,5-1,0 мм , смешали кусочки коркового и мозгового веществ

3

в соотношении 1:2, через разрез на коже брюшкой стенки реципиента сте- рильным зондом внесли полученную масу в подкожную клетчатку. Разрез на коже реципиента ушили . От момента извлечения почки з донора до наложения шва на разрез на коже реципиента прошло 18 мин. На стадии 6 сут опыта животному внутрибрюшинно ввели питуитрин из расчета 5 Ед на Г кг веса животного Через 30 мин после введения проведена эвтаназия реципиента путем дека- питации, у животного экстирпированы имплантаты и почки, зафиксированы в жидкости Карнуа 1 ч, залиты в парафин. Изготовлены гистологические срзы толщиной 5-7 мкм, на которых проведена комплексная реакция связыва- ния коллоидального железа по Хейлу и шик-реакция по Мак-Манусу. В полученных гистологических препаратах четко видны сформированные почечные тельца и срезы канальцев различных отделов нефрона, при этом гистохимическая картина в сформированных д стальных отделах аналогична таковой

Время (15-30 мин) пребывания материала после извлечения из организма донора до момента имплантации обусловлено тем, что при хранении донорского материала более 30 мин наступают изменения в компонентах не- фронов и мочеотводящих путей в результате ишемизации тканей. Имплантация длительно ишемизированного мав почках реципиента, что подтверждает

функциональную дифференцировку отде- JQ териала не позволяет сформировать

лов нефрона в имплантатах,отделы нефрона. Имплантация материала

,Пример 3. Проведена имплантация ткани линейных крыс Август однолинейньп-1 животным. Возраат донора и реципиента равен 3 мес. В стерильных условиях под эфирным наркозом у донора извлекли левую почку, в стерильной чашке Петри скальпелем вырезали кусочек коркового вещества весом 0,03 г и кусочек мозгового вещества весом 0,06 г, размельчили полученные кусочки до размера 0,5- 1,0 мм, смешали полученные кусочки коркового и мозгового веществ в общую массу и стерильным зондом через разрез на коже брюшной стенки реципиента внесли имплантат в подкожную клетчатку. Разрез на коже реципиента ушили стерильным шовным материалом.

35

40

45

ранее 15 мин невозможна по техническим причинам. Соотношение коркового и мозгового веществ 1:2 подобрано экспериментальным путем.

Предлагаемый способ позволяет моделировать в имгшантатах индуктивную систему нефрогенеза, устранить иммунологический конфликт в системе донор-реципиент, сохраняет жизнеспособность имплантируемых тканей, обеспечивает функциональную дифференцировку образующихся в имплантатах отделов нефрона.

Формула изобретения

Способ формирования отделов нефрона в имплантатах, включающий извлечение почки у донора, измельчение ее и имплантацию реципиенту, отличающийся тем, что, с целью образования функционирующих отделов нефрона, проводят совместную имплантацию коркового и мозгового веществ в соотношении 1:2 от линейного донора однолинейным животным-реципиен ам равного или меньшего возраста сразу после извлечения почки у донора.

От момента извлечения почки у донора до имплантации ткани почки в подкожную клетчатку реципиента прошло 16 мин,

На стадии 15 сут опыта у реципиента под эфирным наркозом экстирпиро- вали имплантат, зафиксировали в жид кости Карнуа, залили в парафин. На гистологических срезах толщиной 5- 7 мкм проведена комплексная реакция

:

связывания коллоидального железа по Хейлу и шик-реакция по Нак-Ману- су. Проведена докраска гематоксилином Гарриса. На гистологических срезах хорошо видны сформированные канальцы различных отделов нефрона и почечные i тельца по своей морфологической структуре аналогичные таковым в почках. Гистохимическая картина выявления нейтральных гликопро- теинов и гликозаминогликанов позволяет четко дифференцировать сформированные проксимальные и дистальные отделы нефрона,что подтверждает органотипи- ческую детерминацию эпителия нефрона и возможность формирования дифференцированных отделов нефрона в им- плантатах.

Время (15-30 мин) пребывания материала после извлечения из организма донора до момента имплантации обусловлено тем, что при хранении донорского материала более 30 мин наступают изменения в компонентах не- фронов и мочеотводящих путей в результате ишемизации тканей. Имплантация длительно ишемизированного ма

ранее 15 мин невозможна по техническим причинам. Соотношение коркового и мозгового веществ 1:2 подобрано экспериментальным путем.

Предлагаемый способ позволяет моделировать в имгшантатах индуктивную систему нефрогенеза, устранить иммунологический конфликт в системе донор-реципиент, сохраняет жизнеспособность имплантируемых тканей, обеспечивает функциональную дифференцировку образующихся в имплантатах отделов нефрона.

ормула изобретения

50

55

Способ формирования отделов нефрона в имплантатах, включающий извлечение почки у донора, измельчение ее и имплантацию реципиенту, отличающийся тем, что, с целью образования функционирующих отделов нефрона, проводят совместную имплантацию коркового и мозгового веществ в соотношении 1:2 от линейного донора однолинейным животным-реципиен ам равного или меньшего возраста сразу после извлечения почки у донора.

Изобретение относится к области экспериментальной медицины и может быть использовано для образования функционирующих структур, нефронов почки, предназначено для образования функционирующих структур органов,создания экспериментальной модели для апробации фармакологических веществ, определения жизнеспособности биопта- тов. Целью изобретения ,является образование функционирующих зрелых отделов нефрона в имплантатах путем того, что через 15-30 мин после извлечения почки у линейного животного- донора и измельчения ее до размеров 0,5-1 мм проводят совместную имплантацию коркового и мозгового веществ в соотношении 1:2 однолинейным животным-реципиентам равного или меньшего возраста. (Л С