Способ определения антител к бактериальным гемолизинам Советский патент 1988 года по МПК G01N33/49 

00

со со

Эд 00 СД

Изобретение относится к медицине, а именно.к иммунологическим исследованиям, и может быть использовано для оценки имунного ответа на бактериальные гемолизины на ранних этапах иммуногенеза.

Целью изобретения является более раннее определение антител путем определения количества клеток : продуци- рукщнх антитела против бактериальных гемолизинов.

Способ осуществляют следующим образом.

Приготовляется в определенной кон- центрации взвесь клеток, к которой :добавляется растопленный полужидкий iагар и взвесь эритроцитов, чувстви- 1 тельных к лизирующему действию взято- I го в опыт бактериального гомолизина. I Например,, для стафилококкового аль- ; фа-гемолизина - кроличьи эритроциты. : Полученная, смесь наливается в чашки Петри. После застывания агара и инкубации в термостате на поверхность агара наливается раствор бактериального гемолизина в концентрации, необходимой для того, чтобы вызвать гемолиз эритроцитов в агаре. Чашки инкубируются в термостате до полного гемолиза и затем при комнатной температуре до четкого выявления зон задержки гемолиза. С помохфью стереоскопического микроскопа при боковом освещении на прозрачном фоне подсчитывается количество непрозрачных зон задержки гемолиза с расположенной в центре лимфондной клеткой.

Пример. Агар Дифко в. концентрации 1,4% готовили на фосфатном бу- фере рН 7,2, стерилизовали и разливали в стерильные колбы. До опыта хранили в холодипьнике. Перед опытом растапливс1ли на водяной бане. Для прготовления взвеси эритроцитов у кролка из краевой вены уха брали кровь в стерильный флакон со стеклянными бусами и дефибринировали путем встряхивания, трижды отмьюатш 0,9%-ным раствором хлорида натрия и готовили 50-ную взвесь на среде 199.

умерщвляли под эфирным наркозом, извлекали селезенку, часть ее измельчали.с помощью гомогенизатора в среде 199. Взвесь процеживали чере четыре слоя капрона в силиконирован ную пробирку. Клетки дважды отмывали

O 5 о

- 0

5

5

средой 199 по 1 мл, центрифугировали при 1000 об/мин в течение 5 мин. Под- счит1)вали лейкоциты в камере Горяева. Готовили рабочее разведение 2-10 в мл.

в пробирку с рабочим разведением лейкоцитов добавляли 0,5 мл 50%-ной взвеси эритроцитов кролика и 1,5 мл агара при 42 С. Полученную взвесь вы- ливапи в подогретые до чашки Петри. Чашки помещали в термостат и инкубировали при 37 С в Течение 1,5ч. На поверхность агара наливали 3 мл раствора стафилококкового альфа-гемо-; лизина в концентрации 0,5 Lh/мл. Стафилококковый токсин был получен из ИЭМ АМН СССР им. Н.Ф. Гамалея. После добавления токсина чашки бировали в термостате при 37°С в те- .чение часа и оставляли при комнатной температуре до следующего дня. С помощью стереоскопического микроскопа при боковом освещении с окулярами х12,5 и объективом х2 подсчитьгоали число непрозрачных зон задержки гемолиза с расположенной в центре лим- фоидной клеткой.

Таким образом, предложенный способ может быть использован для оценки .. иммунного ответа на бактериальные гемолизины. Применение методики повысит информативность исследований, так как позволит определить количество клеток, продуцирующих антигемолизины, т.е. оценить иммунный ответ более все- сторонне и на более ранней фазе иммуногенеза. За счет того, что оценивается не только конечная, но и более ранняя фаза иммуногенеза, повышается точность оценки, так как появляется возможность оценки динамики процесса.

Формула изобретения

Способо определения антител к бактериальным гемолизинам путем проведения реакции нейтрализации гемолизинов антителами, отличающий- с я тем, что, с целью более раннего определения, реакцию нейтрализации проводят путем смешивания лимфоидных клеток, продуцирующих антитела с эритроцитами в агаровом геле, инкубации, внесений на поверхность агара бактериального гемолизина с последующим учетом количества клеток, образующих зоны локальной задержки гемолиза.

Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения - более раннее определение антител. К взвеси клеток добавляют полужидкий агар и взвесь эритроцитов, чувствительных к лизирунщему действию бактериального гемолизина. После застьшания агара и инкубации в термостате на поверхность агара наливают раствор бактериального гемолизина. Чашки инкубируют до четкого выявления зон задержки гемолиза. С помощью стереоскопического микроскопа подсчитьшают количество непрозрачных зон задержки гемолиза с расположенной в центре лимфоидной .. клеткой,

ВНИИПИ Заказ 2662/46 Тираж 847

Произв.-полигр. пр-тие., г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Подписное