n-R -ri-R -CgHj-CH(NHR))-WHHs.
ос-сн сна,
1л1 -((cooR)
Изобретение касается замещенных цефалоспоринов, в частности винилце- фалоспоринов (ВЦ) с Z - конфигурацией по экзоциклической связи общей формулы
где R - Н, аминозащитная группа -. трет.-бутоксикарбонил; R, - Н, ОН, галоген, низший алкил; R - Н или ОН; R - Н, низший алкил, аралкил, низший алкок си (низший) алкил, R4- Н ИЛИ сложноэфирная группа, которые обладают антимикробной активностью и
Or, П-Rj-M-RrCftHs-CHfNHRVcfOVNH
где и R указаны выше, в среде ; насмешив ающегося с водой ор ганическо- го растворителя в присутствии водной щелочи при комнатной температуре, По- лученньй фосфоранильный продукт обрабатывают в безводных условиях при комнатной температуре карбонильньм соединением формулы 0, где
могут быть использованы в медицине. I Цель изобретения - создание соединений указанного класса, обладающих лучшими свойствами. Получение соединений ВЦ ведут из трифеннлфосфина и соединений формулы
-N-c(coofl4)-c-aH,i3
СИ-8 СН
g
СО
Ф имеет указанные значения, с после
R
дующим, в случае необходимости, снятием аминозащитной или сложноэфирной группы и выделением целевого продукта. Испытания ВЦ показывают, что они активны к грамположительным и грамотрицательным, а также анаэробным бактериям. 8 табл.
4ib
Ы
; Изобретение относится к области |получения новых замещенных винилцефа- piocnopHHOB общей формулы:
C3iCONHn-Г 1
° COOR4
iraR
где R - водород или аминозащитная
группа, такая как трет,-бу- токсикарбонил; К, - водород, гидроксил, галоген
или низшая алкоксигруппа; R - водород или гидроксил; RJ - С -С -алкил или С,-С -аралкил;R - водород шш сложноэфирная
группа,
с Z - конфигурацией относительно эк- зоцнклической двойной связи, обладаю- цие противомикробной активностью.
Целью изобретения является разработка на основе известных методов способа получения новых соединений, обладающих ценными фармакологическими свойствами.
Пример 1. Бензгидриловый эфир 3-оксиметил-7 -фенилацетамидо- -З-цефем-4-карбоновой кислоты (сое- щнение 1),
К перемещиваемой суспензии фосфат JHoro буфера (рН 7, 162,5 мл) и сухих пшеничных отрубей (20, г) при комнат- |ной температуре добавляют натриевую Соль 7-фенилацетамидоцефалоспорано - ой кислоты (5.г, 12,1 ммоль) в виде Одной порции. Протекание реакции (прослеживайт методом жидкостной хроматографии высокого разрешения (ЖХВР) пока не завершится гидролиз (5ч). Суспензию фильтруют, чтобы удалить пшеничные отруби, и фильтрат охлаждают до 5-10°С дпя экстрактивной этери фикации. К охлаждаемому раствору добавляют 32 мл хлористого метилена и затем 24 мд 0,5 М раствора дифенил- диазометана в хлористом метилене. Затем ДОВОДЯТ рН смеси до 3,0 с по- Нощью 28%-ной фосфорной кислоты. Через 1 ч реакционной смеси дают на- реться до . Медленно добавляют 56 мл гептана, образовавшийся кристаллический продукт выделяют фильтрацией. Выход продукта 3,0 г (50%).
0
0
5
0
.
5
Пример 2. Бензгидриловый эфир 7 -амино-3-хлорметил-З-цефем-4- -карбоновой кислоты (соединение 2).
К суспензии РС1, (8,3 г, 40 ммоль) в 1000 мл хлористого метилена добавляют 3,2 г пиридина (40 ммоль), смесь перемешивают при 20 С в течение 20 мин. К этой смеси добавляют 5,1 г бензгидрилового эфира оксиметил-7- -фенилацетамидо-3-цефем-4-карбоновой кислоты (1) 10 ммоль при перемешивании при -40 С за один прием. Эту смесь перемешивают при в течение 15 мин и вьщерживают при -10 до в течение 7 ч. К охлажденному раствору (1-20 С) добавляют 10 мл пропандиола-1,3, смесь выдерживают 16 ч при -20 С и затем при комнатной температуре в течение 20 мин при пе- ремешивании. Полученйьй раствор прог - мываю ледяной водой (2x20 мл) и 10 мл насыщенного водного раствора NaCl, высушивают над сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Смолистый осадок (12 г) растворяют в смеси хлороформа и н-гексана (2:1) и подвергают хроматографическому разделению,, используя колонку с 200 г силикагеля и тот же растворитель в качестве элю- ента. Фракции, содержащие указанное соединение, выпаривают в вакууме, остаток растирают в порошок в н-гекса- не, получая 2,1 г (51%) соединения 2 с т. пл. 1 (с разл.).
ИК-спектр на ЕВг:. 3400, 2800, 1785, 1725 см- .
УФ-спектр в этаноле максимум при 265 нм ( 160).
ЯМР-спектр, хим.сдвиг в ДМСО-б. + CDC13, Н.Д.: 3,69 (2Н, с); 4,43 (2Н, с)я 5,09 (1Н, д, J 4,5 Гц); 5,24 (1Н, д. J 4,5 Гц); 6,87 Он, с); 7,3 (ЮН, м).
Пример 3. Бе1Ьгидрш10Бьш эфир 2-(трет-бутоксикарбонил- амино)-2-пара-оксифенил)ацетамидо - -3-хлорметил-3-цефе1т-4-карбоновой кислоты (соединение 3).
К смеси 20,7 г (0,05 моль) бензгидрилового эфира 7-амино-З-хлорме- тил -3-цефем-4-карбоновой кислоты (2) и 20 г (0,075 моль) 1)-2-(трет-буток- сик арб ониламидо)-2-(пара-ок сифенил) уксусной кислоты в 500 мл сухого тетрагидрофурана (ТГФ) добавляют 15,45 г (0,075 моль) К,Н -дициклогек- силкарбодиимида (ДЦК), смесь перемешивают при комнатной температуре в
течение 2 ч и выпаривают насухо. Остаток растворяют в 1 л этилацетата, а нерастворимую дициклогексилмочеви- ну удаляют посредством фильтрации. Фильтрат промывают водным раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным водным раствором NaCl, высушиваю над безводным сульфатом натрия и выпаривают дсрсуха. Маслянистый остаток разделяют хроматографически на колонке с 500 г силикагеля (Вакогель С-100У элюируя 4 л хлороформа и 6 л смеси 99% хлороформа и 1% метанола. Целевые фракции объединяют и выпари- вают насухо. Маслянистый остаток растирают в порошок с эфир-изопропи- ловым эфиром, получая 30,6 г (92%). соединения 3.
ИК-спектр на КВг, см : 1790, 1710 1670, 1500, 1360, 1230, 1150.ЯМР-спектр, хим. сдвиг в CDClj, ад: 1,45 (%Н, с, С-СН); 3,4 (2Н, шир.с, 2-Н); 4,28 (2Н, с. ); . 4,86 (1Н, д, 4,5 Гц, 6-Н); 5,12 (iH. д, 6 Гц, СН-СО); 5,68 (1Н, д-д, 8 и 4,5 Гц, 7-Н); 6,63 (2Н, д, 9 Гц, фенил-Н); 6,93 (1Н, с, СН-фенил); 7,08 (2Н, д, 9 Гц, фенил-Н Г; 7,0 - 7,5 (10Н, м, фенил-Н). .
Этот маслянистый ортаток может использоваться без хроматографической очистки в rtpHMepe 4.
Пример 4. Бензгидриловый эфир (трет-бутоксикарбонил- амино)-2-(пара-оксифенш1)ацетамидо - -З-иодметил-З-цефем-4-карбоновая кислота (соединение 4J.
Смесь 26,6 г (0,04 моль). 3 т 18 г (0,12 моль) йодистого натрия в 400мл ацетона перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч и выпаривают досуха. Остаток экстрагируют 400 МП этилацетата, экстракт промывают водным раствором Na S О,, водой и насыщенным водным раствором хлористого натрия. После выпаривания раст ворителя остаток растирают с эфир- изопропиловым эфиром, получая 27 г (89%) указанного соединения. Этил- ацетатньй раствор может использоваться непосредственно на следующей стадии (соединение 5) без выделения соединения 4.
ИК-спектр на KBr,jn«ne , 1790, 1710, 1670, 1500, 1360, 1220, П50.
ЯМР-спектр, хим. сдвиг в CDClj, м,д.: 1,47 (9Н, с, C-CH j); 3,3-3,6
(2Н, м, 2-Н); 4,20 (2Н, с, СИ ,); 4,89 (1Н, д, 4,5 Гц, 6-Н); 5,12 (1Н, д, 6 Гц, СН-СО); 5,68 (1Н, д-д, 8 и 4,5 Гц, 7-Н); 6,62 (2Н, д, 9 Гц, фенил-Н); 6,92 (Ш, с, СН-фенил,); 7,08 (2Н, д, 9 Гц, фешш-Н); 7-7,5 (ЮН, м, фенил-Н).
Пример 5. Бензгидриловый эфир D-2-(трет-бутоксикарбонил- амино)-2-(пара-окгифенил)ацетамидо|- -3-(трифенилфосфонио)метил-3-цефем- -4-карбоновой кислоты, иодид (соединение 5).
Смесь 15,1 г (0,02 моль) 4 и 15,7 г (0,06 моль) трифенилфосфина в 200 мл этилацетата перемешивают 1 ч при комнатной температуре. Образовавшийся осадок собирают посредством фильтрации и получают 17,4 г (85,5%) соединения 5 плавящегося при 170-180 С. Фильтрат концентрируют до объема 100 мл, концентрат разбавляют 500 мл эфира, получая дополнительный выход (1,1 г) 5. Общий выход 18,5 г (91%). Суммарньм выход соединения 5 из 2 74,5%. Он может. быть увеличен до 87,5% ввиду исключения стадий очистки и вьщеления, как указано,
ИК-спектр на КВг «акс см : 1780, 1670, 1490, 1420, 1350, 1240, 1150, 1090,
ЯМР-спектр. хим.сдвиг в ДМСО, м,д,: 1,42 (9Н, с, C-CHj); 3,45 (2Н, шир,с., 2-Н); 5-5,4 (ЗН, м, 3-Н и 6-Н); 5,7 (Ш, м, 7-Н); 6,63 (2Н, д, 9 Гц, фенил-Н); 7,1-7,45 (12Н, м, фе нил-Н); 7,5-7,9 (15Н, м, фенил-Н).
Вычислено, %: С 61,36; Н 4,85; N 4,13; S 3,15.
CeeH NASPl
Найдено, %: С 61,26; Н 4,82;
N 4,1-1; S 3,92,
Пример 6. Бензгидриловый эфир )-2-(трет-бутоксикарбонил- амино)-2-(пара-оксифенйл)ацетамидо - -3- (Z) -1-пропен-1-ил -3-цефем-4-кар боновой кислоты (соединение 6).
К раствору 1,8 г (1,77 ммоль) соединения 5 в 100 мл хлороформа добавляют 100 мл воды, содержа цей 2 мл (2 ммоль) 1 Н,раствора гидроокиси натрия, смесь встряхивают в течение 5 мин. Органический слой отделяют , промывают водой и высушивают над безводным сульфатом натрия, Хлороформо- вый раствор отфильтровывают, фильтра концентрируют до 50 .мл при понижен-
ном давлении. К концентрату добавляют 1 г ацетальдегида, смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч и выпаривают досуха. Маслянистый остаток очищают хроматогра- фически на колонке с 50 г силикагёля (Вако-гель С-200), элюируя хлороформом и смесью хлороформа и метанола (99:1), Целевые фракции собирают и выпаривают, получая 318 мг (28%) продукта 6 с т,ш:, 120-130 0 (с разл,).
ИК-спектр на КВг, „ , 1780, 1670, 1710, 1А90, 1360, 1210, 1150.
ЯМР спектр, хим. сдвиг в CDC1,, м,д,: 1,3-1,5 (12Н, м, С-СН,);-3,22 (2Н, шир, си, 2Н); 4,90 (1Н, д, 4,5 Гц, 6-Н); 5,15 (1Н, тир. д,, СН-СО); 5,5-6,1 (ЗН, м, СН - СН и . 7-Н); 6,63 (2Н, д, 9 Гц, фенил-Н); 6,.91 (1Н, с, СН-фенил); 7,09 (2Н, д,
9 Гц, фенил-Н); 7,2-7,5 (ЮН, м, фенил-Н),
Пример 7, Натриевая соль 7f- г-2-амино-2-(пара-оксифенил)ацет- амидо -3-(Z)-I-пропен-1-ил -3-цефем- -4-карбоновой кислоты, соединение 7, ВМУ-28100, натриевая соль.
Смесь 318 мг (0,48 ммоль) соединения 6 и 2,5 мл трифторуксусной кислоты (ТФК) перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч и затем разбавляют 50 мл эфира и 50 мл изо- пропилового эфира. Остаток вьщеляюти собирают путем фильтрации, промьюают
эфиром, получая 188,мг (77%) трифторацетата 7, который растворяют в 2 мл метанола, К этому раствору добавляют 2 мл (2 ммоль). раствора 2-этилгекса- ноата.натрия в этилацетате, смесь разбавляют 30 мп эТилацетата, чтобы выделить осадок, который собирают путем фильтрации, промывают эфиром и высушивают в вакууме над пятиокисью фосфора, получая 144 мг (73% от 6) . неочищенного соединения 7, Неочищенный продукт (135 мг) растворяют в 10 мл воды, раствор хроматографируют на колонке (25 мм х 100 мм), используя около 20 МП набивки фазы ргер РАК- 500/Сjg (фирма Уотерз), Колонку элю- ируют водой и элюат, -содержащий целевой продукт, концентрируют до 5 мл, лиофилизуют, получая 93 мг (69%) сое7 динения 7. Т, пл. (постеп, разл,). Оценка чистоты по ЖХВД около 60%,
ИК-спектр на КВг, ,
см
1760, 1660, 1590, 1400, 1360, 1250.
УФ-спектр, в фосфатном буфере рН 7, нм(э): 227 (ПЗОО), 280 (8200),
ЯМР-спектр, хим, сдвиг в D,,0, м.д,: 1,65 (ЗН, д, 6.Гц, -C-CHj); 3,21 ( 1Н, д, 18 Гц, 2-Н); 3,52 (1Н, д, 18 Гц, 2-Н); 5,12 (Ш, д,, 4,5 Гц, 6-Н); 5,68 (IH, д, 4,5 Гц, 7-Н); 5,5-5,9 (1Н, м, винил-Н)| 5,95 (1Н, д, 11,5 Гц, винил-Н); 6,94 (2Н, д, 8 Гц, фенил-Н); 7,36 (2Н, д, 8 Гц, фенил-Н).
Пример 8, 7в- D-2-Aминo-2- -(пapaтoкcифeнил)aцeтaмидo -3- (F)- -1-пр6пен 1-ил}-3-цефем-4-карбоновая кислота (соединение 8, BBS-1067).
Полученный в примере 7 неочищенный
продуктд11,9 г соединения 7 до хрома-, тографической очистки, растворяют в 50 МЛ смеси 0,01 М фосфатного буфера (рН 7,2) и метанола (85:15), раствор подкисляют до рН 6 соляной кислотой
.(6 н,). Этот раствор подвергают препаративной жидкостной хроматографии высокого разрешения (ЖХВР) (ргер РАК-500/С , , System 500, фирма Уотерз) при элюировании 0,01М фосфатным буфером (рН 7,2), содержащим 15% метанола, Элюат анализируют методом ЖХБР, найдено, что первые 4 л фракции содержат цис-изомер (ВМУ-28100), Вторую фракцию О л), содержащую трансизомер, собирают и концентрируют до 500 мл. Концентрат подкисляют до рН 3 разбавленной соляной кислотой и хро- мато1 рафируют на колонке НР-20 (100 мл), элюируя 1 л воды и 1 л 30%нбго метанола. Последний злюат (около 300 мл) концентрируют до 10 мл и лиофилиаируют, получая 290 мг неочищенного транс-изомера (55% чистоты). Этот материал растворяют в 100 мл
50%-ного метанола и обрабатывают активированным углем. Фильтрат концентрируют до объема 20 мл и выдерживают в течение ночи при 5°С, Этот продукт кристаллизуется в виде бесцветных призм, которые собирают при фильтрации и высушивают в вакууме, 129 мг, т, пл, 230°С (с разл,).
ИК-спектр на КВг,
1550,
1520, 1450,
5 1760, 1680, 1590, 1390, 1350, 1240,
УФ-спектр в фосфатном буфере (рН 7), , нм (э): 228 (13000), 292 (16900),
71407400
ЯМР-спектр, хим.сдвиг в + сода, мд: 1,89 (ЗН, д, 6 Гц, С С-СНз); 3,60 (2Н, с, 2-Н);. 5,13 (1Н, д, 4,5 Гц, 6-Н); 5,20 (1Н, с, СН-СО); 5,68 (1Н, д, 4,5 Гц, 7-Н); 5,99 (1Н, д-д, 16 и 6 Гц); 6,54 (1Н, д, 16 Гц); 6,98 (2Н, д, 9 Гц, фенил-Н); 7,41 (2Н, д, 9 Гц, фенил-Н),
II р и м ,е р 9. Кристаллическая 7 - в-2-амино-(пара-оксифенил)ацет- амидо -3-(Z)-1-пропен-1-ид -3-цефем- -4-карбоновая кислота (соединение 9, ВМУ-28100).
Первую фракцию (4 л), полученизло методом препаративной ЖХВР в примере 8, содержащую цис-изомер (ВМУ - 28100), концентрируют до объема 2л, концентрат подкисляют до рН 3
Найдено, %: С 54,15; Н 5,13; N 10,30; S 8,38. С 54,19; Н 5,08; N 10,42; S 8,04.
Маточный раствор из предшествующей кристаллизации концентрируют до объема 10 МП и обрабатывают 20 мл ацетона. После выдерживания раствора в холодильнике в течение ночи образу10 ется кристаллический осадок, который собирают посредством фильтрации и высушивают в вакууме над пятиокисью фосфора, вес 670 мг (чистота 90%,по данным ЖХВР). Часть этого материала
15 (560 мг) растворяют в 200 мл 50%-ного воднЭго метанола, раствор обрабатывают 0,5 г активированного угля и фильтруют. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении при 40 С до объема разбавленной соляной кислотой, Раст- 20 20 мл и хранят в течение 5 ч при
вор загружают в колонку, содержащую 1 л фазы НР-20, и колонку промывают. 6 л воды, пока рН отходящего потока не установится равным 7,0. Затем колонку элюируют 4 л 30%-ноге водного .метанола. Элюантный раствор анализируют методом ЖХВР и соответствующие фракции объединяют (около 2,5 л) и концентрируют до 50 мл при «температуре ниже при пониженном давлении. Образуется кристаллический осадок. Концентрат охлаждают при в течение 2 ч, кристаллический осадок собирают путем фильтрации, промывают 80%-ным водным ацетоном, затем 100%- ным ацетоном и высушивают в вакууме над получая 4,09 г чистого кристаллического целевого продукта, с т. .шт. 218-220 С (с разл.), бесцвет35 Раствор 3 г (2,95 ммоль) бензгид- рилового эфира (N-Tt eT-6yTOKCH- карбониламино)-2-(пара-оксифенил) ацетамидо .-3-(трифенилфосфонио)метил- -З-цефем-4-карбоновой кислоты, иоди-
см :
ные призмы чистотой 95%, как найдено Q да (з) в 50 мл хлороформа встряхива- по анаогшзу ЖХВР.
ИК-спектр, на КВг, чя кс 1750, 1680, 1560, 1520, 1460, 1390, 1350, 1270, 1235. „
УФ-спектр в фосфатном буфере (рН 7), g насыщенного раствора NaCl (20 мп)
ют со смесью 3 мл (3 ммоль) 1 н.раствора едкого натра и 50 мл воды при комнатной температуре 1 мин. Отделяют органический слой после добавле:
макл
нм (з): 228 (12300), 279
С 9800).
ЯМР-спектр, КИМ. сдвиг в + + NaHCGj, мд: 1,71 (ЗН,.д, 6.Гц),.- ,
и промывают водой (3x30 мл). К органическому раствору добавляют 2,5 мл 35%-ного водного формальдегида при тщательном перемещивании и охлаждеС-СН); 3,27 (Ш, д, 18 Гц, 2-Н); 3,59 ел нии водой. Перемешивание продолжают
(1Н, д, 18 Гц, 2-Н); 5,18 (1Н, д,
4,5 Гц, 6-Н); 5,22 (Ш,-с, СНСО);
5,73 (1Н, д, 4,5 Гц, 7-Н); 5,5-6,0
(1Н, м, ); 6,02 (1Н, д, П Гц,
); 6,98 (2Н, д, 9 Гц, фенил-Н);
7,41 (2Н, д, 9 Гц, фенил-Н);
Вычислено, %: С 54,26; Н 5,06; N 10,55; S 8,05.
1/2Н#
C e K NjOjS
в течение 20 мин. Органический слой отделяют, высушивают над безводным сульфатом натрия и концентрируют в вакууме. Концентрат помещают в ко- 55 лонку с силикагелем, которую злюиру- ют хлороформом (600 мл) и 2% метанола в 800 мл хлороформа, получая 850 мг (45%) указанного соединения. Тонкослойная хроматография (ТСХ); R
Найдено, %: С 54,15; Н 5,13; N 10,30; S 8,38. С 54,19; Н 5,08; N 10,42; S 8,04.
Маточный раствор из предшествующей кристаллизации концентрируют до объема 10 МП и обрабатывают 20 мл ацетона. После выдерживания раствора в холодильнике в течение ночи образуется кристаллический осадок, который собирают посредством фильтрации и высушивают в вакууме над пятиокисью фосфора, вес 670 мг (чистота 90%,по данным ЖХВР). Часть этого материала
(560 мг) растворяют в 200 мл 50%-ного воднЭго метанола, раствор обрабатывают 0,5 г активированного угля и фильтруют. Фильтрат концентрируют при по5 С. Продукт кристаллизуется, его собирают путем фильтрации, промывают ацетоном и высушивают в вакууме над PjOj, получая 227 мг кристаллического
25 БМУ-28100 (чистота 98%, по данным ЖХВР). При лиофилизации маточного .раствора получают 181 мг ВМУ-28100, имеющего чистоту 95% (ЖХВР).
Пр имер 10. Дифенил метило вый
30 эфир (тpeт-бyтoкcикapбoнил- амино)-2-(пара-оксифенил)ацетамидо - -З-винил-З-цефем-4-карбоновой кислоты (соединение 10).
35 Раствор 3 г (2,95 ммоль) бензгид- рилового эфира (N-Tt eT-6yTOKCH- карбониламино)-2-(пара-оксифенил) ацетамидо .-3-(трифенилфосфонио)метил- -З-цефем-4-карбоновой кислоты, иоди-
Q да (з) в 50 мл хлороформа встряхива-
да (з) в 50 мл хлороформа встряхива-
насыщенного раствора NaCl (20 мп)
ют со смесью 3 мл (3 ммоль) 1 н.раствора едкого натра и 50 мл воды при комнатной температуре 1 мин. Отделяют органический слой после добавлеи промывают водой (3x30 мл). К органическому раствору добавляют 2,5 мл 35%-ного водного формальдегида при тщательном перемещивании и охлаждении водой. Перемешивание продолжают
в течение 20 мин. Органический слой отделяют, высушивают над безводным сульфатом натрия и концентрируют в вакууме. Концентрат помещают в ко- 55 лонку с силикагелем, которую злюиру- ют хлороформом (600 мл) и 2% метанола в 800 мл хлороформа, получая 850 мг (45%) указанного соединения. Тонкослойная хроматография (ТСХ); R
1407400
0,48 (силикагель, метанол-хлороформ 1:10).
Пример П. 7 - п-2-Амино-2- -(пг1ра-оксифенил)ацетамидо -3-винил- -З-цефем-4-тсарбоновая кислота (соеди- нение 11, BBS-1064).
Смесь 850 мг (1,32 ммоль) соединения 10 и 5 мл 90%-ной водной трифтор; хлороформ чая 1,08 г кия
1:10), выпаривают, полу- (55%) указанного соединеИК-спектр на КВг,
VI и КС
см :
уксусной кислоты вьщерживают при ком- ю оксилат (соединение Гз, , нат1780, 1680, 1500.
Пример 13. Натрий -аминЬ-2-(пара-оксифенил)ацетамидо - -3-|(г)-1-бутен-1-ил -3-цефем-4-карб-
нагнои температуре в течение 1 ч и концентрируют приблизительно до 1 мл в вакууме. Концентрат растирают с 20 МП диизопропилового эфира, получая 679 мг желтого продукта, который ра- створяют в 3 МП метанола и затем разбавляют 30 МП воды. Этот раствор пропускают через колонку с фазой НР-20 (50 мл), которую промывают 200 мл во- цы и элюируют 250 мп 30%-ного метано- па. Элюат, содержащий целевое соединение, концентрируют и лиофилизируют получая 197 мг (31%) указанного сое-г (инения, чистота 60% по оценке ЖХВР,
г. пл. 190°С (с разл.). ИК-спектр на КВг,
мяк
1760, 1680, 1615, 1570,l520, УФ-спектр в фосфатном буфере
мопс
СРН 7), 7 183 (14400). ЯМР-спектр в
км (э): 228 (13500),
pjO, хим.сдвиг,, SCH,
М.Д.: 3,6 (2Н, с, SCHg); 5,51 (1Н, А, 5 Гц, 6-Н){ 5,73 (1Н, д, 5 Гц, -Н); 7,03 (2Н, д, 8 Гц, фенил-Н); - 7,45 (2Н, д, 9 Гц, фенил-Н). I Пример 12. Дифенилметиловый :|фир (трет-бутоксикарбонил- амино)-2- (пара-оксифенил) ацетамидо} - -3-(2)-1-буте 1-тш -цефем-4-карбо- 1ЮВОЙ кислоты (соединение 12). ; Раствор 3 г (2,95 ммоль) соедине- 1|сия 5 в 50 МП хлороформа смешивают 4о смесью 3,2 мл (3,2 ммоль) 1 н.ра- йтвора едкого натра ц 50 мл воды, встряхивают при комнатной температуре в течение 3 мин. Отделяют Органический слой, промывают водой (|3 раза по 30 мп) и насьпденным водным раствором NaCl и высушивают над безводным сульфатом натрия, К раствору добавляют 1,71 г (29,5 ммоль) пропио- HtOBoro альдегида. Смесь перемешивают Б| течение ночи при комнатной темпера- Туре и концентрируют при-пониженном д}авлении. Концентрат загружают в ко- лрнку с силикагелем, которую элюируют li-2% 14 танола в хлороформе„Объеди- н1яют фракции, для которых наблюдается методом тех пятно с Rf 0,30 (метанол
0
; хлороформ чая 1,08 г кия
10
1:10), выпаривают, полу- (55%) указанного соединеИК-спектр на КВг,
VI и КС
см :
оксилат (соединение Гз, , нат1780, 1680, 1500.
Пример 13. Натрий -аминЬ-2-(пара-оксифенил)ацетамидо - -3-|(г)-1-бутен-1-ил -3-цефем-4-карб-
5 о
5
0
риевая соль).
Растрор 1,08 г (1,61 ммоль) соединения 12 в 11 мл трифторуксусной кислоты, содержащий 1% воды, вьщерживают в течение 1 ч при комнатной температуре . Смесь концентрируют до объема около 2 мл в вакууме, полученный сироп растирают приблизительно с 20 мл диизопротшлового эфира, получая 796 мг желтого порошка. Этот порошок растворяют в 3 мл метанола, раствор обрабатывают 3 мл 0,8М раствора эти- ленгексаноата натрия в этилацетате, чтобы получить осадок, который фильтруют, промывают диизопропиловым эфиром и растворяют в 5 мл воды. Раст- ,вор пропускают через колонку, заполненную 80 мл фазы ргер PAK-500/C g (сменный патрон фирмы Уотерз), которую промывают водой и элюируют последовательно 10%-ным метанолом, 20%-ным метанолом и 30%-ным метанолом. Целевые фракции (просматривают методом ЖХВР) объединяют, концентрируют и лиофилизируют, получая 118 мг (9,4%) указанного соединения, оценка чистоты 55% (по ЖХВР); темнеет при нагреве в стеклянном капилляре при температуре выше- 180°С.
ИК-спектр на КВг, кс 1755, 1660,-1580.
УФ-спектр в фосфатном буфере (рН 73, 71„якс им (э): 228 (10900), 278 (7200).
ЯМР-спектр в DO, хям. сдвиг,, М.Д.: 0,81 (ЗН, т, 7,5 Гц); 1,7-2,2 (2Н, м); 3,25.(2Н, АВ кв.); 5,01 (1Н, д, 5 Гц);. 5,50 (Ш, д, 7,5 и 12 Гц); 5,58 (1Н, д, 5 Гц); 5,78 (1Н, 0 д, 12 Гц); 6,86 (2Н, д, 8 Гц); 7,26 (2Н, д, 8 Гц).
Пример 14. Дифенилметиловый эфир (трет-бутоксикарбонил- амино)-2-(пара-оксифенил)ацетамидо - g -3- (г)-3-феНил-1-пропен-1-ил -3-це- фем-4-карбоновой кислоты (соединение 14).
Раствор 3 г (2,95 ммоль) соединения 5 В 50 мл хлороформа встряхи5
0
5
вают со смесью 3,2 мл (3,2 ммоль) 1 «.раствора едкого натра и 50 мл воды в течение 1 мин. Отделяют органический слой после добавления насыщенного раствора NaCl (20 мл), промывают водой (3 раза по 30 мл) и насьпцен- ным раствором NaCl и высушивают над безводным сульфатом натрия. К этому раствору до,бавляют 7,2 г (30 ммоль) 50%-ного фенилацетальдегида, смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, концентрат очищают на колонке с 75 г силикагеля, используя 1% метанола в хлороформе как элюэнт, получают 800 мг (37%) указанного соединения.
ТСХ: Rr 0,33 (силикагель, метанол :хлороформ 1:10).
ИК-спектр, КВг: 1780, 1710- 1680 смЧ
Это соединение использовали для синтеза в примере 15 без дополнительной очистки.
Пример 15, 7 - D-2-Aминo- -2г(пара-оксифенил)ацетамидо -3-t(Z)- З-фенил-1-пропан-1-ил -3-цефем-4-кар- боновая кислота (соединение J5, BBS-1076).
Раствор 800 мг соединения 14 в 4 мл 90%-ной трифторуксусной кгспоты вьщерживают в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрируют и концентрат растирают с диизопропиловым эфиром, получая 490 мг желтого порошка. Раствор порошка в 2 мл метанола смешивают с 20 мл воды и подают на колонку с фазой НР-20 (50 ма), которую промывают водой 250 мл и элюируют 250 мл 30%-ного метанола и затем 300 мл 75%- ного метанола. Метанольньй (75%) элюат концентрируют и лиофилизуют в 10 мл 75%-ного метанола и хрюматогра- фируют на колонке, заполненной 80 мл фазы (ргер PAK-300/C,j , сменный патрон фирмы Уотерз). Колонку элюируют 75%-ным метанолом, получая 158 мг (31%) целевого продукта. Оценка чистоты по ЖХБР - 65%. Вещество темнеем при нагреве в ст: клянном капилляре выше .
ИК-спектр, КВг, ,„,(6 см : 1760, . 1680, 1600-1580, 1520,
УФ-спектр в фосфатном буфере
7) м«кс (э 2вО (8900). ЯМР-спектр в ДМСО-а +ПаО (5:1), хим.сдвиг, М.Д.: 4,45 (2Н, д, 4 Гц, ); 4,87 (1Н, c.-CHNDj); 6,7
12
д, 9 Гц, фенил); 6,9-7,5 (7Н, м,
5
0
5
фенил).
Приме
р 16. Дифенилметиловый
эфир (трет-бутоксикарбонил- амино)-2-(пара-оксифенилацетамидо)} - |-3- (2)-3-метокси-1-пропен-1-ил -3- -цефем-4-карбоновой кислоты (соединение 16).
Раствор 3,0 г (2,95 ммоль) соединения 5 в. хлороформе (100 мл) обр,ба- тывают смесью 2 н.раствора едкого на- тра (1,8 мл) и 100 мл воды при натной температуре в течение 5 мин. Органическую фазу отделяют, промывают 50- мл воды и 50 водного NaCl, высушивают и вьшаривают до объема около 10 мл. Полученный красный раствор илида обрабатывают 1,8 мл метоксиацет- альдегида (15 ммоль) при комнатной температуре в течение 15 мин. После выпаривания растворителя остаток хроматографируют на колонке с силика- гелем (100 Л), элюируя смесью толуол- этилацетат (3:1 и 1:1), чтобы получить указанное соединение (750 мг, .38%).
30
35
ЯМР-спектр в CDClj+D 0, хим. сдвиг. м,д.: 1,45 (9Н, с, трет.-бутил ); 3,15 (ЗН, с, ОСНз); 3,27 (2Н, с, 2-СН2); около 3,5 (2Н, м, -СН - Оме); 4,9 (1Н, д, 5,0 Гц, 6-Н); 5,12 (1Н, с, -CH-ND-); около 5,5 (1Н, м, СН-СН.-);5,72 (1Н, д, 6-Н); 6,18 (1Н, д, 12 Гц, -СН СН-СН2-); 6,65 и 7,10 (каждый 2Н , д, ); 6,90 (1Н, с, -CHPh) ; 7,3 (ЮН, с, Ph). Пример 17. 7 -С2-АМИНО-2- Q (п-оксифенил)ацетамидо -3-(2)-3-ме- токси-1-пропен-1-ил -З-цефем-4-кар- боновая кислота (соединение 17, BBS- 1092).
5
Соединение 16 деблокируют трифторуксусной кислотой (3 мл) при комнатной температуре в течение 1 ч. При выпаривании растворителя с последующим выделением осадка из изопропилово- го эфира получают трифторацетат продукта, который очищают на колонке с НР-20 хроматографически. Колонку промывают 500 мл воды и элюируют 500 мл 30%-ного метанола, чтобы получить 350 мг (75%) целевого продукта. Оценка чистоты по ЖХВР-90%, т. пл. 1бЬ С
0
(с разл,).
ИК-спектр, КВг, кс 3180 1760, 1680.
3400,
13
УФ спектр, в фосфатном буфере СР 7), „„, , нм (э): 228 (11500), :279 (9400).
: ЯМР-спектр в , хим.сдвиг, м.д.: 3,4 (ЗН, с, ОСН); 3,40 (2Н, iAB-KB, 2-СН); 4,0 (2Н, м, ); 15,19 (1Н, я, 4,5 Гц, 6-Н); 5,25 (IE, с, -CH-ND); 5,77 (Ш, д, 7-Н); около 5,8 (Ш, м., СН-СН -); 6,20 (1Н, д, 11 Гц, -СН СН-СН,); 7,05 и 7,45 (каж- дьй 2Н, д и д, ). I Пример 18. Дифенилметиловый I эфир (трет-бутоксикарбонил- амино)-2-(п-оксифенил)адетамидо1 -3- ;-(г)-3-хлор-1-пропен-1-ш1 -3-цефем- {-4-карбоновая кислота /соединение 1 8). I Раствор соединения 5 (5 г, 4,9 ммоль) в 100 мл хлороформа обра- 1батывают смесью 2 и.раствора едкого 1натра (2,9 мл, 5,8 ммоль) и воды 1(100 мл) при комнатной температуре IB течение 5 мин. Отделяют органичес- |кую фазу и промывают 50 мл воды и |50 мл насыщенного раствора NaCl. и |высушивают над безводным сульфатом |натрия. Фильтрат выпаривают до объема около 20 мл и добавляют 2,0 мл (25 ммоль) хлорацетальдегида. Смесь
1)ия (3,9 ммоль) в 18 мл ацетона пе ремешивают при комнатной температу в течение 1 ч. После выпаривания р створителя остаток растворяют в эт ацетате (100 мл), промывают после вательно водой, водным раствором и водным раствором NaCl, в сушивают и выпаривают, получая ука
10 ное соединение (1,02 г).
ЯМР-спектр в CDClj+D O, хим.сдв м.д.: 1,45 (9Н, с, трет.-бутил); о ло 3,4 (2Н, м, 2-CHj); около 3,8 ( м, ); 4,90 (1Н, д,.5 Гц, 6-Н
15 5,14 (1Н, с, -CH-ND-); 5-,73 (1Н, д 7-Н); около 5,5-6,0 (1Н, м, СН-СН 6,68 и 7,10 (каждый 2Н, каждьгй д, фенил) ;6,78 (Н,д,5 Гц,3-СН СН-°СН 6,99 (1Н, с, CHPhi); 7,3 (ЮН,
20 Ph),
Пример 20. Дифенилметило эфир (трет-бутоксикарбонил но)-2-(п-оксифенил)ацетамидо -3- 3 -1,2,3-триаз ) тио- 1 -пропен-1
25 ил 3-цефем-4-карбоновой кислоты ( единение 20) .
К раствору 1,0 г соединения 19 (1,3 ммоль) в этилацетате (20 мл) бавляют 0,27 мл окиси пропилена
перемешив ают при комнатной температу- зо ( ммоль) и 19 мл 0, Ш раствора
ре 30 мин и выпаривают в вакууме. Оставшийся сироп хроматографируют на колонке со 100 г силикагеля, элюируя |смесью толуол-этил ацетат (3,1), по-
|лучая 900 мг (27%) .указанного соеди- „ шийся сироп хроматографируют на ко
. f4i- f f.
1нения 18.
ЯМР-спектр в CDCl,, хим.сдвиг, м.д.: 1,45 (9Н, с, трет.-бутил), около 3,3 (2Н, м, 2-СН2); 3,5-4,0 (2Н, м, ); 4,92 (1Н, д, 5,0 Гц, |6-Н); 5,12 (Ш, с, -CH-ND-) ; около 5,7 (2Н, м, 7-Н и СН-СН2); 6,15 (Ш, д, 11 Гц,-3-СН СН-СН2-); 6,63 и 7,10 (каждьй 2Н, д, и д, ,); 6,89. («И,
При деблокировании этого вещества трифторуксусной кислотой, как в предыдущих примерах (например, 7, 11 и др.) образуется 7- в-амино-2-(п-окси- фенил)-ацетамидо -3- (г)-3-хлор-1- -пропен- -ил -З-цефем-4-карбоновая кислота.
П р. и м е р 19. Дифенилметиловый эфир (трет-бутоксикарбониламилонке с силикагелем С-200 (50 г). Целевой продукт элюируют смесью хлоро- . форм-метанол (10:1) и получают 800мг (83%) указанного соединения. 40 ЯМР-спектр в CDClj+H G, хим. сдвиг, М.Д.: 1,45 (9Н, с, трет-бу- тил); около 3,3 (4Н,.м, и -CHg-.); 4,80 (1Н, д, 5,0 Гц, 6-Н); 5,20 (Ш, с, -CH-ND-); 5,70 (Ш, д.
фенил). 7-Н); около 5,95 (1Н,
м.
СН-СН - );
50
6,68 (2Н, д, НО-фенил); 6,90 (1Н, с, -CH-Phg); 7,25 (ЮН, с, Ph); 7,52 (Ш, с, триазол-4-Н).
Пример 21. 7 - В-2-амино- . -2-(п-оксифенил)ацетамидо -3- 3-(Ш- -2,2,З-триазол-5-ил)тио-1-пропен-1- -ил З-цефем-4-карбоновая кислота (соединение 21, ВВ5-1091).
Смесь 800 мг соединения 20 и
Но)-2-(п-оксифенил)ацетамидо -3-(Е)- gg 2 мл трифторуксусной кислоты выдержи- З-иод- -пропен-1-илЗ-З-цефемкарбо- вают 1 ч при комнатной температуре йовой кислоты (соединение 9). и затем выпаривают досуха. К остатку
Смесь 900 мг соединения 18добавляют изопропиловый эфир и получа(1,8 ммоль) и 590 мг йодистого нат- ют желтый осадок (600 мг), которьй о
.
1)ия (3,9 ммоль) в 18 мл ацетона перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. После выпаривания растворителя остаток растворяют в этил- ацетате (100 мл), промывают последовательно водой, водным раствором и водным раствором NaCl, высушивают и выпаривают, получая указан10 ное соединение (1,02 г).
ЯМР-спектр в CDClj+D O, хим.сдвиг, м.д.: 1,45 (9Н, с, трет.-бутил); около 3,4 (2Н, м, 2-CHj); около 3,8 (2Н, м, ); 4,90 (1Н, д,.5 Гц, 6-Н);
15 5,14 (1Н, с, -CH-ND-); 5-,73 (1Н, д, 7-Н); около 5,5-6,0 (1Н, м, СН-СН -)5 6,68 и 7,10 (каждый 2Н, каждьгй д, НС- фенил) ;6,78 (Н,д,5 Гц,3-СН СН-°СН.(-); 6,99 (1Н, с, CHPhi); 7,3 (ЮН,
20 Ph),
Пример 20. Дифенилметиловый эфир (трет-бутоксикарбонилами- но)-2-(п-оксифенил)ацетамидо -3- 3(1Н -1,2,3-триаз ) тио- 1 -пропен-1 -
25 ил 3-цефем-4-карбоновой кислоты (соединение 20) .
К раствору 1,0 г соединения 19 (1,3 ммоль) в этилацетате (20 мл) добавляют 0,27 мл окиси пропилена
(1Н-1,2,3-триазол-4-ил)тиола в этил- ацетате. Смесь перемешивают при комнатной температуре 30 мин и выпаривают при пониженном давлении. Остав. f4i- f f.
лонке с силикагелем С-200 (50 г). Целевой продукт элюируют смесью хлоро- . форм-метанол (10:1) и получают 800мг (83%) указанного соединения. ЯМР-спектр в CDClj+H G, хим. сдвиг, М.Д.: 1,45 (9Н, с, трет-бу- тил); около 3,3 (4Н,.м, и -CHg-.); 4,80 (1Н, д, 5,0 Гц, 6-Н); 5,20 (Ш, с, -CH-ND-); 5,70 (Ш, д.
7-Н); около 5,95 (1Н,
м.
СН-СН - );
50
6,68 (2Н, д, НО-фенил); 6,90 (1Н, с, -CH-Phg); 7,25 (ЮН, с, Ph); 7,52 (Ш, с, триазол-4-Н).
Пример 21. 7 - В-2-амино- -2-(п-оксифенил)ацетамидо -3- 3-(Ш- -2,2,З-триазол-5-ил)тио-1-пропен-1- -ил З-цефем-4-карбоновая кислота (соединение 21, ВВ5-1091).
растворяют в 1 мл воды и заливают на колонку со 100 мл фазы НР-20. Колонку промывают 500 мл воды и элюируют 30% метанола и затем 50%-ным метанолом. Фракции, содержащие целевое соединение, собирают, выпаривают и лио- филизируют, получая 170 мг (33%) целевого продукта, оценка чистоты по ЖХВР - 50%,, т. пл. (с разл.).
ИК-спектр на КВг, „„ , 3360, 3280, 1755, 1670.
УФ-спектр в фосфатном буфере, if/Houc (э): 235 (14100); 252 (12300)
ЯМР-спектр в + DCl, хим.сдвиг, М.Д.: около 3,4 (4Н, м, , ); 5,43 (Ш, д, 4,5 Гц, 6-Н); 5,15 (Ш, с, -CH-NDjj); около 6,0 (2Н, м, 7-Н и СН-СН -); 6,7 и 7,15 (каждый 2Н, казвдый д, HO-Ph-); 8,05 (1Н, с, триазол-4-Н).
Пример 22. Бензгидриловый эфир (трет-бутоксикарбонш1- амино)-2-фенипацетамидо -3-(трифенил- фосфонио)метил-З-цефем-4-карбоновой кислоты, иодид (соединение 22).
Смесь 14,5 г (0,0196 ммоль) бенз- гидрилового эфира (-)-а-(трет- -бутоксикарбониламино)-а-фенилацет- амидо -З-иодметил-З-цефем-4-карбоно- вой кислоты и 5,24 г (0,02 моль) три- феннлфосфина в 300 мл этилацетата перемешивают при комнатной температуре 2 ч. В эту реакционную смесь добавляют 200 МП эфира для образования осадка, который собирают посредством фильтрации и промывают эфиром, получая 14,3 г (73%) указанного соединения. Фильтрат концентрируют до 50 мл и концентрат разбавляют эфиром, получая 2,4 г дополнительного выхода продукта. Общий выход 16,7 г (85%).
ИК-спектр, КВг, - , 1780, 1690, 1480, 1420, 1350, 1240, 1150.
Пример 23. Бенэгидриловьй эфир (трет-бутоксикарбонш1- амино)-2-фенилацетамидо -3-(Z)-l- -пропен- l- ил -З-цефем-4-карбоновой кислоты (соединение 23).
К раствору 5 г (5 ммоль) соедине- ния 22 в 200 МП хлороформа добавляют смесь 100 мл воды и 5 мл (5 ммоль) H,ijacTBOpa едкого натра, смесь встряхивают 3 мин. Отделяют органический слой, промывают водой и насыщен- ным раствором NaCl и высущивают над безводньгм сульфатом магния. Хлорофор- мовый раствор фильтруют, фильтрат концентрируют до 100 мп при пониженном давлении. К концентрату добавляют 3 мл ацетальдегида, смесь перемешивают при комнатной температуре 1,5 ч и выпаривают досуха. Маслянистый остаток хроматографируют на колонке с 50 г силикагеля (кизель-гель 60), элюируя хлороформом. Целевые фракции собирают и выпаривают досуха, а остаток растирают с н-гексаном,-получая 990 мг (31%) указанного соединения 23
ИК-спектр, КВг, ддякс 17:iO, 1710, 1660, 1510, 1490, 1360, 1240, 1210, 1150.
ЯМР-спектр, в CDClj, хим.сдвиг, м.д.Г: 1,3-1,5 (12Н, м. C-CHj-); 322 (2Н, с, 2-Н); 4,93 (1Н, д, 4,5 Гц, 6-Н); 5,23 (1Н, д, 8 Гц, СН-СО); 5,5- 6,2 (ЗН, м, 7-Н и винил-н); 6,94 (Ш, с, CHPh); 7,2-7,5 (15Н, м, фенил-Н).
Пример 24. Натрий -амино-2-фенилацетамидо -3- (Z)-l- -пропенил -З-цефем-4-карбоксилат (соединение 24, BBS-1065).
Смесь 0,94 г (1,47 ммоль) соединения 23 и 3 МП трифторуксусной кислоты перемешивают 30 мин при комнатной температуре, затем разбавляют 50 мл смеси этилового эфира и изопропилово- го эфира (1:1), получая около 800 мг выделившегося осадка, который собирают фильтрацией и растворяют в 3 мп метанола. К раствору добавляют 4,5 мл (4,5 ммоль) 10 раствора 2-этилгекса- ноата натрия в этилацетате, смесь разбавляют 50 мп эфира и затем 50 мл изопропилового эфира. Осадок собирают путем фильтрации и получают 710 мг неочищенного продукта 24, который растворяют в 20 мл воды, и хроматографируют на колонке, используя 50 мл набивки фазы ргер PAK-500/C,j (сменный патрон фирмы Уотерз). Колонку элюируют водой и 10% метанола. Содер- жаоще целевой продукт фракции собирают, анализируя их методом ЖХВР, концентрируют до 3 мл и лиофилизируют, получая 182 мг (31%) целевого продукта, плавящегося при 200°С. Оценка чистоты по ЖХВР-50%.
ИК-спектр, КВг, кс 1760, 1660, 1400, 1180, 1100.
УФ-спектр в фосфатном буфере (рН 7), -я , нм (э): 282 (5500).
ЯМР-спектр в , м.д.: 1,60 (ЗН, д, 6 Гц, С-СНз); 3,12 (1Н, д, 18 Гц, 2-Н); 3,48 (1Н, д, 18 Гц, 2-Н); 5,03 (1Н, д, 4,5 Гц, 6-Н); 5,62 (Ш, д, 4,5 Гц, 7-Н); 5,93 (1Н, д, 10 Гц,
17 1407АОО. 18
винил-Н); 5,2-5,8 (IH, м, винил-Н);лиофилизируют, получая 60 мг твердого 7,41 (5Н, с, фенил-Н)tпродукта, плавящегося при 200°С (noil р и м е р 25. Бензгидриловыйстеп. раэл.).
эфир (трет-бутоксикарбонил-ИК-спектр, КВг, ддакс см 1760,
амино)-2-фенилацетамидо -3-цг)-3-® 1660, 1630, 1360, 1120, 1070.
-хлор-1-пропен-1-ил -3-цефем-4-кар-УФ-спектр в фосфатном буфере,
боковой кислоты (соединение 25). Я;,а„ , нм (э): 243 (12700), 200 плеК раствору 2 г (2 ммоль) соеди-чо (4200).
нения 22 в.50 мл хлороформа добавляют Пример 27. (-)-2-Ами50 мл воды, содержащей 2 мл (2 ммоль)но-2-фенилацетамидо -3-(г)-1-пропенГн.раствора едкого натра, смесь-1-ил -3-цефем-4-карбоновая кислота
встряхивают 3 мин. Органический слой(соединение 24, ВВ-1065, в виде амфиотделяют и промывают водой, затем на-она).
сьщенным раствором NaCl. Высушенный15 г,соединения 23, диметилметихлороформовый раствор концентрируютлового эфира (трет-бутоксипри пониженном давлении до объемакарбонш1амино)-2-фенш1ацетамидо -330 МП. К концентрату добавляют 2 мл-(1-пропенил)-3-цефем-4-карбоновой
хлорацетапьдегида.исмесь перемешиваюткислоты (2,34 ммоль) обрабатывают
при комнатной температуре 1 ч, промы-2о - мл трифторуксусной кислоты, смесь
вают водой и насыщенньм растворомперемешивают 20 мин при комнатной
NaCl. Органический раствор высушиваюттемпературе и разбавляют 100 мл этии выпаривают досуха. Маслянистый ос-лового эфира, получая 1,15 г (96%)
таток хроматографируют на колонке снеочищенного трифторацетата BBS-1065.
силикагелем (50 г Бако-геля 0-200),25 ИК-спектр,КВг, ямкс 1760,
элюируя хлороформом. Целевые.фракции1670, 1200, ИЗО.
собирают и вьтаривают досуха, получаяУФ-спектр в фосфатном буфере
534 г неочищенного продукта. (рН 7), , 283 нм ().
ИК-спектр, КВг, у,и , 1780,1,1 ;Г трифторацетата (2,25 ммоль)
1710, 1660, 1500, 1490, 1360, 1240,ЗО растворяют в 20 мл воды и раствор
1210, 1150.хроматографируют на колонке, содерСтруктура этого образца не под-жащей 100 мл набивки, полученной из ;
тверждена ввиду нечеткости его ЯМР-ргер РАК-500/С (сменный патрон фирспектра. - мы Уотерз). Колонку элюируют водой.
Пример 26. Натрий 7 - в-2-. 10%-ным метанолом и 30%-ньи метано|-амино-2-фенилацетамидо -3-(Z)-3-лом, Элюат.30%-ного метанола концен хлор-1-пропен-1-ш11(-3-Цефем-4-карб-трируют до 10 мл. Кристаллический
оксилат (соединение 26, BBS-1066).продукт выделяют, собирают и промыСмесь 472 мг (0,7 ммоль) соедине-вают ацетоном и высушивают в вакууме
:ния 25 и 1,5 мл трифторуксусной кис-40 пятиокисью фосфора. Получают
1лоты перемешивают 15 мин при 10-15 С. 505 мг (46%). чистого BBS-1065 (в ви|И разбавляют 30 мл смеси эфира и изо-де амфиона), плавящегося при 180 ;пропилового эфира (1г1), чтобы полу-183 С (с разл.). Оценка чистоты чить 330 мг светло-желтого осадка,95%.
которьй собирают посредством фильтра- g ИК-спектр, КВг, )м«6с
ции. К раствору осадка в 3 мл метано- 1750, 1690, 1590, 1400, 1350.
ла добавляют 2 мл (2 ммоль) 2-этил- УФ-спектр в фосфатном буфере
гексаноата натрия в этила11етате и(рН 7), 3,0, 282 нм().
сМесь разбавляют 50 мл этилацетата.ЯМР-спектр в + NaKCO, хим.
Образовавшийся осадок собирают путемgQ сдвиг, м.д.: 1:53 (ЗН, д, J 6 Гц,
фильтрации и промывают эфиром, полу-С-СН); 3,3 (2Н, д, 2-Н); 5,03 (Ш,
чая 244 мг неочищенного продукта.д, J 4,5 Гц, 6-Н); 5,2 (1Н, с,
раствор неочищенного продукта в 10 млСН-СО); 5,1-5,8 (1Н, м, )J
воды хроматографируют на колонке, эа-5,63 (Ш, д, J 4,5 Гц, 7-Н); 5,92
Полненной 50 мл фазы ргер PAK-500/C,jgg (Ш, д, J 12 Гц, ); 7,4 (5Н,
(сменньш патрон фирмы Уотерз) .1Солон-с, фенил-Н),
(су элюируют водой и 10%-ным метанолом.Пример 28. В(-)-2-(трвт-б.уЦелевые фракции в 10%-ном метаноле токсикарбониламино)-2-(3-хлор-4-оксиобъединяют и концентрируют до 5 мл ифенил)уксусная кислота (соединение 28).,
.(
.(
Смесь 6 г (0,03 моль) З-хлор-4-ок- сифенилглицина и 9,8 г (0,045 моль) ди-трет-бутилдикарбоната в 120 мл 50%-ного водного тетрагидрофурана, содержащего 10 мл (О, 071 моль) три- этиламина, перемешивают при комнатной температуре 3 ч. Смесь концентрируют до 60 мл и концентрат промывают эфиром. Водный.слой подкисляют 6 н.соля- 10 осадок, который собирают посредством
ной кислотой и экстрагируют 200 мп эфира. Экстракт промывают водой и насыщенным раствором NaCl, сушат над сульфатом магния и вьтаривают досуха, получая 10 г маслянистого остатка, который не отверждается при рафильтрации и высушивают, получая 9,2 г иодина фосфония 30,
ИК-спектр, КВг, „.tc , 1780, 1680, 1490, 1350, 1240, 1150.
15 Пример 31. Бензгидриловый эфир (трет-бутоксикарбонил- амино)-2-(3-хлор-4-оксифенил)ацетами- (г)-1-пропен-1-ил -3-цефем-4- -карбоновой кислоты (соединение 31),
15 Пример 31. Бензгидриловый эфир (трет-бутоксикарбонил- амино)-2-(3-хлор-4-оксифенил)ацетами- (г)-1-пропен-1-ил -3-цефем-4- -карбоновой кислоты (соединение 31),
Раствор 9,5 г (9 ммоль) соединения 30 в 200 МП хлороформа располагают слоем со смесью 100 мл воды и 10 мл 1 н,раствора едкого натра, смесь встряхивают 3 мин. Органический слой
25 промывают водой и насыщенным раствором NaCl, сушат сульфатом магния и .концентрируют примерно до 50% объема. К концентрату добавляют 20 мл 90%-но- го ацетальдегида, смесь перемешивают
экстрагируют 200 мл этилацетата, экстракт промывают водным раствором
стирании в смеси эфира с гексаном.
Пример 29. Бензгидриловый эфир )-2-(трет-бутоксикарбонил- амино)-2-(3-хлор-4-оксифенил)ацетами 20 до1-З-хлорметил-З-цефем-4-карбоновой кислоты (соединение 29),
К раствору 6,2 г (0,015 моль) со- . единения 2 и 5,4 г (0,018 моль) соединения 28 в 150 мл сухого тетрагидрофурана добавляют 3,7 г (0,018 моль) дицикпогексилкарбодиимида, смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч., Дициклогексилмочевину, которая выделяется при перемешивании, 30 при комнатной температуре в течение удаляют посредством фильтрации и 3ч, обрабатывают безводным сульфа- фильтрат выпаривают досуха. Остаток том магния и фильтруют. Фильтрат выпаривают досуха, остаток хроматогра- фируют на 120 г кизель-геля (фирма бикарбоната натрия, водой и насыщеннымgg Мерк), элюируя смесь толуола и этил- раствором NaCl и высушивают над суль- ацетата (4:1), Целевые фракции соби- фатом магния. Фильтрат выпаривают до- рают и выпаривают досуха , остаток суха, маслянистый остаток хроматогра- растирают со смесью этилового и изо- фируют на колонке с 140 г силикагепя , пропилового эфиров и н-гексана, По- (Вако-гель С-200), элюируя смесью то- 40 лучают 1,33 г блокированного продук- луола и этилацетата (10:1). Целевые та 31.
ИК-спектр, КВг, OIKU 1770, 1700, 1660, 1480, 1350, 1210, 1120. Пример 32. 7 - В-2-Амино- 45 -2-(3-хлор-4-оксифенил)ацетамидо -3- - (Z)-1-пропен-1-ил -З-цефем-4-кар- боновая кислота (соединение 32, ВМУ- 28060),
CttecJ} 1,33 г (1,93 ммоль) соедине- 50 ния 31 и 3 МП трифторуксусной кислоты перемешивают при комнатной температу-, ре 30 мин,смесь разбавляют 50 мл сме-: си (1:1) этилового и изопропилового эфиров, получая 1,072 г неочищенного смесь перемешивают 30 мин при комнат- 55 трифторацетата 32, который хромато- ной температуре. Смесь концентрируют графируют на колонке, заполненной фа- до 30 мл, К концентрату добавляют зой ргер РАК-500/С, (сменный патрон 200 мл этилацетата, смесь промывают фирмы Уотерз) (80 мл). Колонку элюи- водным раствором Na S Oj, водой, на- руют водой и 10%-ным метанолом,«Элюат
фракции собирают и выпаривают досуха, получая 10 г продукта 29,
ИК-спектр, КВг, , 1720, 1680, 1500, 1370, 12йО, 1160,
Пример 30, Бензгидриловый эфир )-2-(трет-бутоксикарбонил- амино)-2-(З-хлор-4-оксифенил)ацетами- до -3-(трифенилфосфонио)-метил-3-це- фем-4-карбоновой кислоты (соедине- 1ше 30), иодид,
К раствору 10 г (14,3 ммоль) соединения 29 в 100 мл ацетона добавляют 11,2 г (75 ммоль) йодистого натрия.
сьпценным раствором NaCl и высушивают сульфатом магния. Этилацетатный раствор фильтруют, фильтрат концентрируют до половины объема. К концентрату добавляют 3,9 г (15 ммоль) трифенил- фосфина, смесь перемешивают 2 ч при комнатной температуре. К раствору добавляют 300 мл эфира, чтобы выпал
фильтрации и высушивают, получая 9,2 г иодина фосфония 30,
ИК-спектр, КВг, „.tc , 1780,. 1680, 1490, 1350, 1240, 1150.
Пример 31. Бензгидриловый эфир (трет-бутоксикарбонил- амино)-2-(3-хлор-4-оксифенил)ацетами- (г)-1-пропен-1-ил -3-цефем-4- -карбоновой кислоты (соединение 31),
Раствор 9,5 г (9 ммоль) соединения 30 в 200 МП хлороформа располагают слоем со смесью 100 мл воды и 10 мл 1 н,раствора едкого натра, смесь встряхивают 3 мин. Органический слой
промывают водой и насыщенным раствором NaCl, сушат сульфатом магния и концентрируют примерно до 50% объема. К концентрату добавляют 20 мл 90%-но- го ацетальдегида, смесь перемешивают
при комнатной температуре в течение 3ч, обрабатывают безводным сульфа- том магния и фильтруют. Фильтрат выпаривают досуха, остаток хроматогра- фируют на 120 г кизель-геля (фирма Мерк), элюируя смесь толуола и этил- ацетата (4:1), Целевые фракции соби- рают и выпаривают досуха , остаток растирают со смесью этилового и изо- пропилового эфиров и н-гексана, По- лучают 1,33 г блокированного продук- та 31.
21140740022 .
|0%-ного метанола концентрируют дои смесь его 3-(и-4) моно-0-бутокси|02 от первоначального объема, прикарбонильных производных (соединение
iroM выделяется кристаллический оса-346).
Док, который собирают посредством g Смесь 8 г (19,3 ммоль) соединения
фильтрации, промывают ацетоном и су-2,8 г смешанного продукта опыта 33 и
в вакууме над PjOj. Получают4,12 (20 ммоль) дициклогексипкарбодиi38 мг соединения 32 (чистота 95%),имида в 200 мл сухого тетрагидрофураглавящегося при 180-185 С (постеп.на перемешивают 1 ч при комнатной
раэл,). Фильтрат концентрируют до ютемпературе. Реакционную смесь выпа5 мл и лиофшшзируют, получгш 154 мгривают досуха. Остаток растворяют в
дополнительного выхода продукта,200 мл этилацетата, нерастворимый
чистотой 80% .(по ЖХВР).материал (дициклогексилмочевину)
ИК-спектр, КВг, 1760,удаляют с помощью фильтрации. Фильт1&80, 1570, 1410, 1390, 1350, 1290, 15рат промывают водным pactaopoM бикар1270,боната натрия, водой и насыщеиньм раУФ-спектр, фосфатный буфер (рН 7),створом хлористого натрия, высушивают
nKotc (э): 232 ПОООО), 280сульфатом магния и выпаривают досуха
(10500),при пониженном давлении. Маслянистый
ЯМР-спектр в DjO « NaHCO, хим. 20остаток хроматографируют на колонке
с,5виг, м.д.: 1,68 (ЗН, д, J 6 Гц,с силикагелем (130 г кизещь-геля 60),
С С-СНз); 3,25 (ш, д, J 18 Гц,элюируя смесью толуол-этил ацетат
2-Н); 3,57 (Ш, д, J 18 Гц, 2-Н);(5:1). и затем той же смесью (2:1),
(1Н, с, СНСО); 5,18.(1Н, д, J Элюат с соотношением толуол/этил |4,5 Гц, 6-Н); 5,72 (1Н, д, J 25ацетат (5:1) собирают и выпаривают
|4,5 Гц, 7-Н); 5,5-5,9 (1К, м,досуха, получая г смеси моно-0С С); 5,97 (Ш, д, J 12 Гц, );.-трет-бутилоксикарбонил (БОК)-Н-БОК
Пример 33. С(-)-2-(трет-бу-получая 3 г 3 4-диоксифенильной
т(ксикарбонштамино)-2-(3,4-диоксифе-производной 34а.
)уксусная кислота (соединение ЗЗа) Соединение 34d: ИК-спектр, КВг,
в смеси с ее 3-(и-4)- моно-О-бутокс - . , 1720, 1690, 1500,
Кс рбонильными производными (соедине- , 1240, 11507. Hi|e ЗЗб).ЯМР-спектр в CDCl,, хим. сдвиг..
Смесь 3,66 г (20 ммоль) 3,4-диок-м.д.: 1,42 (9Н, с, С-СН,); 3,4 (2Н,
С1:фенилглицина и 9,24 г (40 ммоль) -пгар, с., 2-Н); 4,30 (2Н, щяр. с.,
ди-трет-бутилдикарбоната в 120 мл 50%- .); 4,85 (1Н, д, J 4,5 Гц,
Hcjro водного раствора тетрагидрофура- 406-Н) j 5,07 (1Н, д, J 6 Гц, СН- ;
н4, содержащего 10 мл (71 ммоль) три-NH); 5,74 (ЬН, д-д, J 9 и 4,5 Гц,
Э7)иламина, перемешивают 16 ч при ком-7-Н); 6,6-6,9 (ЗН, м, ф енил-Н); 6,93
на|тной температуре и смесь концент-(1Н, с, СНРп);;7,3 (10Н, с, фенил-Н). ри|руют до 60 мл. Концентрат промывают ; Смесь 34б. ИК-спектр, КВг,,, ,
10|0 МП эфира, подкисляют 1 н.соляной 45см : 1770, 1720, 1690,1500, 1370,
ки слотой и экстрагируют эфиром1240, 1150.
(ibOx2 мл). Объединенные экстракты ЯМР-спектр в CDClj, хим. сдвиг,
.промывают водой и насьш(енным раство-м.д.: 1,42 (9Н., C-CHj); 1,55 (9Н, с,
роЦ NaCl, высушивают сульфатом магнияC-CHj); 3,4 (2Н, шир.с, 2-Н); 4,35
и Вьтаривают досуха, получая 8 г ма- 50(2Н, шир.с ,, CHgCl); 6,9-7,1 (4Н, м
слйнистого остатка, который представ-CHPh и фенил-Н); 7,3 (ЮН, фенил-Н), ля1ат собой смесь целевой производной Пример 35. Бензгидриловый
3,14-диоксифенила и 3- и 4-моно-О-бу-эфир (-)-2-(трет-бутоксикарбото сикарбонипзащищенных производных.ниламино)-2-(3,4-диоксифенил)ацетамиПример 34, Бензгидриловый 55до 3-трифенилфосфониометил-3-цефемэфйр (-)-2-(трет-бутоксикарбо--4-карбоновой кислоты, иодид (35а). ниЛамино)-2-(3,4-диоксифенил)ацетами- Смесь 3 г (4,4 ммоль) продукта
до1-3-хлорметил-3-хлорметил-3-цефем-34а и 3,3 г (22 ммоль) иодида натрия
-4 ькарбоновой кислоты (соединение 34а)в 50 мл Ацетона перемешивают при
комнатной температуре 30 мин, смееь концентрируют насухо. Остаток экстрагируют этилацетатом (100 мл), экстракт промывают водным раствором , водой и насыщенным раствором NaCl. После высушивания сульфатом магния экстракт концентрируют до 60 МП. К концентрату добавляют 1,4 г (5,3 ммоль) трифенилфосфина, смесь перемешивают 1 ч при комнатной температуре. К смеси добавляют 100 мл эфира, чтобы выделился осадок, который собирают посредством фильтрации - и промывают эфиром, получая 3,2 г (70%) йодистого фосфония (35а),
ИК-спектр, КВг,
. см 1780, 1680, 1480, 1430, 1360, 1240, 1150.
По аналогичной методике 9,5 г (12 ммоль) смеси моно-0-БОК-защищен- ных производных (346) подвергают взаимодействию с йодистым натрием и затем с трифенилфосфином, получая 10,7 г (77%) смеси соответствующих производных моно-О-БОК-К-БОК-трифе- нилфосфониометипа (356),
1770, 1240,
ИК-спектр, КВг, )
глакс
см1720, 1680, 1480, 1430, 1360, 1140.,.
Пример 36. Бензгидриловый эфир (-)-2-(трет-бутоксикарбо- ниламино)-2-(3,4-диокеифенил)ацетами- (2)-1-пропен-1-ил}-3-цефем-4- карбоновой кислоты (соединение Зба).
К перемешиваемому раствору 3,15 г (3 ммоль) соединения 35а и 10 мл ацетальдегида в 50 мп хлороформа добавляют по каплям 8 мп (4 ммоль) 0,5 н.раствора гидроокиси натрия в течение 10 мин, смесь перемешивают 1 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь промывают водой и насыщенным раствором NaCl, высушивают над сул ьфатом магния и выпаривают при пониженном давлении. Маслянистый остаток хроматографируют на колонке с 60 г силикагеля (Вако-гель С-200), которую элюируюг 2 л хлороформа и 2% метанола в хлороформе, анализируя элюат методом ТСХ (хлороформ-метанол 10:1). Целевые фракции из 2%-ного метанольного элюата собирают и выпаривают досуха, получая 0,8 г (40%) пропенильной производной Зба.
ЯМР-спектр. в CDClj, хим.сдвиг, М.Д.: 1,28 (ЗН, д, J 6 Гц, C-CHj); 1,42 (9Н, с, C-CHj); 3,25 (2Н, с, 2-Н); 4,92 (1Н, д, J - 4,5 Гц, 6-Н); 5,08 (1Н, д, J 6 Гц, ,СН-Н); 5,3 5,8 (1Н, м, ); 5,80 (IH, д, J 4,5 Гц, 7-Н); 6,04 (1Н, д, J 11 Гц, ); 6/70 (2Н, с, фенил-Н); 6,82 (1Н, с, фенил-Н); 6,92 (1Н, с,
CHPh); 7,3 (ЮН, с, фенил-Н).
По аналогичной методике подвергают взаимодействию 10,5 г (9,3 ммоль) смеси 3- и 4-0-BOK-N-BOK-дизащищенных производных 356 с аце- тальдегидом, получая 3,3 г (46%) соответствующей З-пр пенильной произ- водной 366.
ИК-спектр, КВг, (акс ,
5 1700, 1500, 1370, 1240, 1150.
ЯИР-спектр, хим. сдвиг в CDClj, М.Д.: 1,4 (9Н, с, С-СН ); 1,55 (9Н, с, C-CH,j); 3,25 (2Н, с, 2-Н); 6,07 (1Н, д, J 11 Гц, ); 6,9-7,1
0 (4Н, м, СН-фенил и фенил-Н); 7,3-7,5 (ЮН, м, фенил-Н).
Пример 37. )-2-Ами- но-2-(3,4-диоксифенил)ацетамидо -3- -(г)-1-пропен-1-ил -3-цефем-4-карбо5 новая кислота (соединение 37, ВМУ- 28068). .
Смесь 0,8 г (1,2 ммоль) соединения Зба, 0,8 МП анизола и 3 мл три- фторуксусной кислоты перемешивают
0 5 мин при комнатной температуре и разбавляют 25 мл эфира (диэтилового) и 25 мд изопропилового эфира. Образовавшийся осадок собирают посредст фильтрации и промывают изопропи-
g ловьм эфиром, получая 557 мг неочищенной трифторацетатной соли соединения 37. Раствор неочищенного продукта в 10. мл воды очищают хромато- графически на колонке, заполненной
0 100 мл фазы ргер РАК-500/С (сменный патрон фирмы Уотерз), колонку элюи- руют водой и затем 5%-ным метанолом. Метанольный элюат (5%), содержащий желаемьш продукт, концентрируют до
5 объема 5 мл и лиофилизируют, получая 231 мг (47%) соединения 37 (в виде амфиона, чистота 90%). Т. пл. 200°С (постеп. разл.).
ИК-спектр, ,аке ™ 1760,
0 1690, 1580, 1530, 1400, 1360, 1290, 1270.
УФ-спектр, фосфатный буфер (рН 7),
маке
км (э): 233 (9200), 281
5
(1I000).
ЯМР-спектр, хим. сдвиг в , М.Д.: 1,68 (ЗН, д, J 6 Гц, С-Сн 3,26 (1Н, д, J 18 Гц, 2-Н); 3,58 (1Н, д, J 18 Гц, 2-Н); 5,18 (Ш, с, CHNH); 5,22 (1Н, д, J 4,5 Гц,
3)J
25
6-Н); 5,5-5,9 (2Н, м, и 7-Н); 5,97 (1Н, д, J II Гц, ); 7,05 (ЗН, м, фенил-Н),
Аналогично из 3,3 г (4,3 ммоль) М,0-ди-трет-БОК-зап1ищенных производных смеси 366 получают 1,3 г (75%7 соединения 37 в виде амфиона (чистота 90%), которое имеет спектры, идентичные приведенным.
Пример 38. В(-)-2-(трет- -Ьутоксикар6ониламино)-2-(А-окси-3- -метоксифенил)-уксусная кислота (соединение 38),
Смесь 2,96 г (15 ммоль) D(-)-2- -амино-2-(4-окси-3-метоксифенил)уксусной кислоты и 3,6 г (0,0165 моль) ди-трет-бутилдикарбоната в 100 мл 50%-ного водного тетрагидрофурана, содержащего 4,2 мл (0,03 моль) три- этиламина, перемешивают 16 ч при комнатной температуре, реакционную смесь концентрируют до 50 мл. Концентрат промывают 50 мл эфира, подкисляют 1 н,соляной кислотой и дважды экстрагируют эфиром (по 100 мл). Объединенные экстракты промывают водой и насьпценным раствором хлористого натрия. Высушенные экстракты вают досуха, получая 4,38 г соединения 38 в виде твердой пены,
ЯМР-спектр, хим. сдвиг в CDCl, j,A. 1,4 (9Н, с, -С-СНз); 3,8 (ЗН, с, OCHj); 5,15 (1Н, д, J 6 Гц, :Н-Ш); 6,85 (ЗН, р, фенил-Н).. j Пример 39. Бензгидриловый эфир (-)-2-(TpeT-6yTOKCHKap6o- лиламино)-2 -(4-окси-3-метоксифенил)- ацетамидо -З-хлорметил-З-цефем-4- карбоновой кислоты (соединение 39),
Смесь 4,3 г соединения 38,5 г (12 ммоль) соединения 2 и 3 г (15 ммоль) дициклогексилкарбодиимида ft 150 мл сухого тетрагидрофурана пеют и выпаривают досуха, получая 7 г 3-хлорметилцефема, соединение 39, в виде твердой пены, ЯМР-спектр, хим, сдвиг, м.д.: 1,4
(9Н, с, C-CHj) ; 3,45 (21, шир., с, 2-Н); 3,83.(ЗН, с, ОСН,); 4,32 (2Н, с, -СН,г,С1); 4,92 (Ш, д, J 4,5 Гц, 6-Н); 5,13 (1Н, д, J б Гц, CHNH);
10 5,65 (1Н, д, J 6 Гц, NH); 5,80 (1Н, д-д, J 8 и 4,5 Гц, 7-Н); 6,85 (ЗН, фенил-Н); 6,95 (1Н,:С, CH-Ph); 7,2- 7,5 (ЮН, м, фенил-Н).
Пример 40, Бензгидриловый
15 эфир (-)-2-(трет-бутоксикарбо- ниламино)-2-(4-окси-3-метоксифенил) ацетамидо -3-трифенилфосфониометил-З- -цефем-4-карбоновой кислоты, иодил (соединение 40),
20 Смесь 7 г (10 ммоль) соединения 39 и 7,5 г (50 ммоль) иодида натрия в 100-мл ацетона перемешивают при .комнатной температуре в течение 30 мин и выпаривают досуха. Раствор
2S остатка в 200 мд этилацетата промывают в водном растворе , водой и насьпценным раствором NaCl, сушат сульфатом магния и концентрируют до 100 МП, К концентрату добавляют 3,1 г
30 (12 ммоль) трифенилфосфина, смесь перемешивают 1 ч при комнатной температуре, К реакционной смеси добавляют 100 мл эфира и вьщеливйийся осадок собирают посредством фильтрации, мывают эфиром и сушат, получая 5,8 г трифенилфосфониевой производной соединения 40, Эфирный фильтрат концентрируют до 10 мл, к концентрату добавляют 300 МП эфира, чтобы получить
40 0,9 г продукта в виде дополнительного выхода Общий выход 6,7 г.
Пример 41. Бензгидриловый эфир (-)-2-(трет-бутоксикарбо- ниламино)-2-(4-окси-З-метоксифенил ||емешивают 2 ч при комнатной темпера- ацетамидо -3-(2)-1-пропен- -кл - 3-цефем-4-карбоновой кислоты (соединение 41),
К перемешиваемой смеси 5,8 г (5,5 ммоль) соединения 40 и 10 мп 50 90%-ного ацетальдегида в 100 мл хлороформа добавляют по каплям 11 мл (5,5 ммоль) 0,5 г раствора гидроокиси натрия в течение 25 мин, смесь перемешивают 2 ч при комнатной темtype. Выпавшую в осадок мочевину уда- ляют фильтрацией, фильтрат выпаривают досуха. Раствор остатка в 200 мл этил- Лцетата промывают водным раствором (бикарбоната натрия, водой и насыщен- 11ым раствором NaCl, сушат сульфатом aaгнгя и выпаривают досуха, Масляни- йтый остаток хроматографируют на ко- Лонке со 100 г силикагеля (кизель-
60), которую элюируют смесью то- gg пературе. Реакционную смесь промыва- Луола и этилацетата (4;1), анализируя ют водой, затем насьш енным раствором Злюаты методом ТСХ (проявитель толу- NaCl, сушат сульфатом магния и вы- Ол/этилацетат 1:1 или хлороформ/ме- паривают насухо. Маслянистый остаток танол 50:1).-Целевые фракции собира- хроматографируют на колонке с 130 г
ют и выпаривают досуха, получая 7 г 3-хлорметилцефема, соединение 39, в виде твердой пены, ЯМР-спектр, хим, сдвиг, м.д.: 1,4
(9Н, с, C-CHj) ; 3,45 (21, шир., с, 2-Н); 3,83.(ЗН, с, ОСН,); 4,32 (2Н, с, -СН,г,С1); 4,92 (Ш, д, J 4,5 Гц, 6-Н); 5,13 (1Н, д, J б Гц, CHNH);
10 5,65 (1Н, д, J 6 Гц, NH); 5,80 (1Н, д-д, J 8 и 4,5 Гц, 7-Н); 6,85 (ЗН, фенил-Н); 6,95 (1Н,:С, CH-Ph); 7,2- 7,5 (ЮН, м, фенил-Н).
Пример 40, Бензгидриловый
15 эфир (-)-2-(трет-бутоксикарбо- ниламино)-2-(4-окси-3-метоксифенил) ацетамидо -3-трифенилфосфониометил-З- -цефем-4-карбоновой кислоты, иодил (соединение 40),
20 Смесь 7 г (10 ммоль) соединения 39 и 7,5 г (50 ммоль) иодида натрия в 100-мл ацетона перемешивают при .комнатной температуре в течение 30 мин и выпаривают досуха. Раствор
2S остатка в 200 мд этилацетата промывают в водном растворе , водой и насьпценным раствором NaCl, сушат сульфатом магния и концентрируют до 100 МП, К концентрату добавляют 3,1 г
30 (12 ммоль) трифенилфосфина, смесь перемешивают 1 ч при комнатной температуре, К реакционной смеси добавляют 100 мл эфира и вьщеливйийся осадок собирают посредством фильтрации, мывают эфиром и сушат, получая 5,8 г трифенилфосфониевой производной соединения 40, Эфирный фильтрат концентрируют до 10 мл, к концентрату добавляют 300 МП эфира, чтобы получить
40 0,9 г продукта в виде дополнительного выхода Общий выход 6,7 г.
Пример 41. Бензгидриловый эфир (-)-2-(трет-бутоксикарбо- ниламино)-2-(4-окси-З-метоксифенил2714074
силикагеля (киэель-гель 60), элюируя ее смесью толуола и этилацетата (соотношение изменялось постепенно - 4:1 (1,3 л), 3:1 (1,1 л), 2:1 (1,0л) и элюат собирают во фракции по 20мл, Фракции 26 - 59 объединяют и выпаривают досуха, получая 830 мг целевой 3-пропенильной производной соединения 41 в виде твердой пены.
Q
Спектр ЯМР в CDClj, хим, сдвиг, м,д,: 1,35 (ЗН, д, ); 1,4 (9Н, с, C-CHj) ; 3,85 (ЗН, с, O-CHj); 6,07 (1Н, д, J 11 Гц, -СН-С).
Пример 42, (-)-2-Ами- но-2-(4-ок си-3-меток сифенил)ацетами- до -3- (г)-1-пропен-1-ил -3-цефем-4- -карбоновая кислота (соединение 42, ВМУ-28097),
Смесь 830 мг (1,2 ммоль) соединения 41, 0,5 МП анизола и 2 мл три- фторуксусной кислоты перемешивают при комнатной температуре 5 мин, смесь разбавляют 30 мл эфира (этилового) и 30 мл изопропилового эфира. Образовавшийся осадок собирают посредством фильтрации, промывают изо- пропиловым эфиром и сушат,получая
течение опыта давали воду. Объем м мл,собранш й в различные интервалы времени:
0-2 ч 2-4 ч 4-6 ч 6-24 ч Су
15 18 19,5 13 42 92
Мочу (около 90 мл) подкисляют д рН 3 однонормальной соляной кислот и фильтруют, чтобы удалить осадок. Фильтрат подвергают хроматографиро
20 нию на колонке, заполненной 300 мл фазы НР-20; колонку элюируют 2 л в ды и 2 л 30%-ного метанола, анализ руя элюаты методом ЖХВР, Фракции, держащие биологически активные ком
25 ненты в 30%-ном метанольном элюате собирают,, концентрируют до 10 мл и .лиофилизируют, получая 390 мг кори невого твердого вещества. Раствор этого вещества в 20 мл воды хромат
437 г неочищенного трифторацетата со- 30 графируют на колонке, заполненной
единения 42, Неочищент ш продукт хро. матографируют на колсхнке, заполненной 100 мл фазы ргер PAK-500/Cj, (сменная колонка фирмы Уотерз), которую элюируют водой и 5%-ным метанолом, Элюат 5%-ного метанола концентрируют до 5 МП и лиофилизируют, пот лучая 225 мг соединения 42 (амфион, чистота 90%), Т, пл, 176-180 С (разл,).
35
200 МП фазы ргер РАК-500/С,, (смен ный патрон фирмы Уотерз), последов тельно злюируя водой, 5%-ным метан лом и 10%-ным метанолом. Первую по вину 5%-ного метанольного элюата к центрируют до 5 мл и лиофилизируют ползшая 44 мг соединения 37 (чисто 70%), содержащего примеси, перешед шие из мочи. Вторую половину 5%-но
Q метанольного элюата концентрируют 5 мл и лиофипизируют, получая 36 м продукта, который представлял собо смесь соединения 37, соединения 42 примесей, перешедших из мочи. Элюа
см
1760,
ИК-спектр, , 1690, 1590, 1530, 1400, 1360, 1280,
УФ-спектр в фосфатном буфере (рН 7), 71, , нм (э): 235 (10000), 280 (11000),
ЯМР-спектр в , хим, сдвиг, м,д,: 1,68 (ЗН,а д, J .6 Гц, C-CHj); 3,25 (1Н, д, J 18 Гц,.2-Н); 3,57 (1Н, д, J 18 Гц, 2-Н); 4,01 (ЗН, с, OCHj); 5,10 (1Н, с, СН-СО); 5,19 (JH, д, J 4,5 Гц, 6-Н); 5,78 (1Н, д, J 4,5 Гц, 7-Н); 5,5-5,9 (1Я, м, . ); 5,98 (1Н, д, J 11 Гц, );
Q метанольного элюата концентрируют до 5 мл и лиофипизируют, получая 36 мг продукта, который представлял собой смесь соединения 37, соединения 42 и примесей, перешедших из мочи. Элюат
Д5 10%-ного метанола (около 600 мл) концентрируют до 5 мл и лиофилизируют, получая 38 мг соединения 42 (чистота 70%, по данным ЖХВР), которое повторно хроматографируют на колонке с той же набивкой, что и вьш1е (40 мл), элю- ируют водой, 5%-ным метанолом и 10%- ным метга-нолом. Целевые фракции, элю- ированные 10%-ным метанолом, объединяют и концентрируют до 5 нл и лио50
;7,07(2Н, с, фенил-Н); 7,17 (1Н, шир, 55 Филизируют, получая 16 мг соединения с, фенил-Н).42.с чистотой 90%, по данным ЖХВР
, ЖХВР: время удержания 9,3 мин , (.0,02 М ацетатный буфер с рН 4 - аце- (0,02 М ацетатньй буфер с рН 4, содер- тонитрил 85:15). Т. пл. 180 С (по- жащйй 15% ацетонитрила..степ, разл,).
07400
28
П р и м е- р 43. Вьщеление соединения 42 из мочи крыс, принимавших соединение 37,
Шесть самок крыс Уистлера (вес 400-600 г) помещают в стальные метаболические клетки после перорального введения соединения 37 в дозе 100 мг/кг и в течение 24 ч собирают Q мочу крыс. Крыс кормили регулярно и в
течение опыта давали воду. Объем мочи мл,собранш й в различные интервалы времени:
0-2 ч 2-4 ч 4-6 ч 6-24 ч Сумма
18 19,5 13 42 92,5
Мочу (около 90 мл) подкисляют до рН 3 однонормальной соляной кислотой и фильтруют, чтобы удалить осадок. Фильтрат подвергают хроматографированию на колонке, заполненной 300 мл фазы НР-20; колонку элюируют 2 л воды и 2 л 30%-ного метанола, анализируя элюаты методом ЖХВР, Фракции, содержащие биологически активные компоненты в 30%-ном метанольном элюате, собирают,, концентрируют до 10 мл и иофилизируют, получая 390 мг коричневого твердого вещества. Раствор этого вещества в 20 мл воды хромато
200 МП фазы ргер РАК-500/С,, (сменный патрон фирмы Уотерз), последовательно злюируя водой, 5%-ным метанолом и 10%-ным метанолом. Первую половину 5%-ного метанольного элюата концентрируют до 5 мл и лиофилизируют, ползшая 44 мг соединения 37 (чистота 70%), содержащего примеси, перешедшие из мочи. Вторую половину 5%-ного
метанольного элюата концентрируют до 5 мл и лиофипизируют, получая 36 мг продукта, который представлял собой смесь соединения 37, соединения 42 и примесей, перешедших из мочи. Элюат
10%-ного метанола (около 600 мл) концентрируют до 5 мл и лиофилизируют, получая 38 мг соединения 42 (чистота 70%, по данным ЖХВР), которое повторно хроматографируют на колонке с той же набивкой, что и вьш1е (40 мл), элю- ируют водой, 5%-ным метанолом и 10%- ным метга-нолом. Целевые фракции, элю- ированные 10%-ным метанолом, объединяют и концентрируют до 5 нл и лио
ИК-спектр, KBr, , см : 1760, :1690, 1590, 1530, 1400, 1360, 12бО. УФ-спектр (фосфатньй буфер рН 7), 1: , нм (э): 233 (8200), 280 (8800). g i ЯМР-спектр (DO), хим. сдвиг, |м.д.: 1,68 (ЗН, д, J 6 Гц, C-CH); |3,26 (1Н, д,„ J 18 Гц, 2-Н); 3,58 1(1Н, д, J 18 Гц, 2-Н); 4,01 (ЗН, с, CHj)j 5,12 (Ш, с, СН-СО); 5,21 (Ш, д, J 4,5 Гц, 6-Н)} 5,78 (1Н,
10
15
ными к пенициллину. Организмы Гп-1б представляют собой грамположительные стафилококки, которые являются стойкими к пенициллину и продуцируют пе- нициллиназу. Организмы Го-1а представляют собой граМОтрицательные бактерии, которые являются чувствительными к ампициллину и цефапотину. Соединения по изобретению обычно обладают пониженной активностью в отно- иении грамотрицательных бактерий, стойких к ампициллину и цефалотину. Из табл. 2 можно сделать следующие 15 выводы относительно противомикробной активности этих соединений вне организма.
Все соединения обладают хорошей активностью против стафилококков.
, J 4,5 Гц, 7-Н); 5,5-5,9 (Ш, м,
); 5,98 (1Н, д. j 11 Гц, ); 7,07 (2Н, с, фенил-Н); 7,17 Ш, шир.с, фенил-Н) ,
Структура продукта метаболизма установлена как (-)-2-амино-2-(4-окси-З-метоксйфенил) ацетамидо -3-(2)-1-лропен-1-ил -З-цефем-4-карЗоновая кислота посредством сопостав- 20 чувствительных к пенициллину (Гп-1а). 1ения спектров ЯМР, ИК, УФ и хрома- Обычно они менее активны (в три или гограмм ЖХВР с соединением 42, при- более, раз) против стафилококков, отовленным по методикам примеров стойких к пенициллину (Гп-1б). Одна- J8-42-, ко в каждом случае эти соединения в
Фармакологические испытания соеди- 23 несколько раз более активны, чем це- , подтверждающие их противомик- фалексин и цефадроксил. 11|0бную активность, приведены в ниже. Удовлетворительной активностью
против грамотрицательных бактерий (Го-1а) обладают только те соедине- 30 НИН, в которых имеется незамещенная 4Hc(Z)-пропенильная группа в положении -3. Это соединения 9, 24, 32 и 42. Транс-(Е)-пропенильное вещество, соединение 8, обладает в восемь раз li некоторых соединениях содержит эа- 35 ™ активностью против грамотрицаБ табл. 1 дана структура продук- ов примеров 1-43. Больщая тих соединений представляет собой -(В-фенилглищу1амидо)цефапоспорины5 II которых имеется 1-пропен-1-ильная группа в положении 3, Концевой атом глерода пропенильного заместителя
Цеститель, такой как апкильная груп- Ца (метил), галоид (хлор или иод), 4рильную группу (фенил) гетероцикли- 1 ескую тио-группу ( 1,2,3-триазол-5- Нил-тио) или алкокси-группу (меток- с1и-) . Фенилглициламидо-группа может незамещенной, или моно- или /(изамещенной окси-, алкокси-группой ирпи атомом галогена. ,
В табл. 2 представлена противо- м;икробная активность вне организма предложенных соединений. Приведены величины минимальной ингибирующей кЬнцентрации, которые определяли по методике разбавления агаром для трех групп организмов, обозначенных Гп-1а, Гй-16 « Го-1а, Каждая из этих трех г|)упп Организмов содеркит пять ин-
тельных бактерий по сравнению с соответствующим цис-пропенильным соединением -9. Аналогично.замещение концевой метильной группы в пропенильном
40 заместителе в положении -3, по-видимому, приводит к понижению грамотри- цательной активности. Это соединения 13, i5, 21 и 17. Это также верно для винильного соединения 1I. Тем не ме45 нее эти соединения являются потенциальными противомикробными агентами, которые практически эквивалентны це- фалексину и i цефадроксилу. Замещение в кольце никоим образом не ухуд-.
gQ шает противомикробной активности. Сравните соединения 9, 24, 32 и 42. По-видимому, соединение 37 является исключением, однако фактически оно является высокоактивным соединением
д)йвидуальных штаммов микроорганизмов, gg против грамположительных и грамотрицательных бактерий, как показано в табл, 3, .
кФторые идентифицированы в сноске к т.йбл, 2, Организмы Гп-1а представля- ют собой грамположительные стафилококки, которые являются чувствительg
0
ными к пенициллину. Организмы Гп-1б представляют собой грамположительные стафилококки, которые являются стойкими к пенициллину и продуцируют пе- нициллиназу. Организмы Го-1а представляют собой граМОтрицательные бактерии, которые являются чувствительными к ампициллину и цефапотину. Соединения по изобретению обычно обладают пониженной активностью в отно- иении грамотрицательных бактерий, стойких к ампициллину и цефалотину. Из табл. 2 можно сделать следующие 5 выводы относительно противомикробной активности этих соединений вне организма.
Все соединения обладают хорошей активностью против стафилококков.
ротив грамотрицательных бактерий (Го-1а) обладают только те соедине- НИН, в которых имеется незамещенная 4Hc(Z)-пропенильная группа в положении -3. Это соединения 9, 24, 32 и 42. Транс-(Е)-пропенильное вещество, соединение 8, обладает в восемь раз ™ активностью против грамотрицательных бактерий по сравнению с соотетствующим цис-пропенильным соединением -9. Аналогично.замещение концеой метильной группы в пропенильном
заместителе в положении -3, по-видиому, приводит к понижению грамотри- цательной активности. Это соединения 13, i5, 21 и 17. Это также верно для винильного соединения 1I. Тем не менее эти соединения являются потенциальными противомикробными агентами, которые практически эквивалентны це- фалексину и i цефадроксилу. Замещение в кольце никоим образом не ухуд-.
шает противомикробной активности. Сравните соединения 9, 24, 32 и 42. По-видимому, соединение 37 является исключением, однако фактически оно является высокоактивным соединением
против грамположительных и грамотрицательных бактерий, как показано в табл, 3, .
В табл. 3 содержатся сравнительные данные о противомикробной активности
пне организма против тех же оргайиз- мов, что и в табл. 2, при использовании двух различных микробиологических культурных сред. Агар Мюэллер- Хинтона является стандартной средой, применяемой в испытаниях, относящихся к табл. 2, В табл. 3 содержится сопоставление минимальных ингибирую- щих концентраций для тр .. испытуемых соединений, которые определяли первоначально в среде Мюэллер-Хинтона и затем в питательном агаре дпя соединения 9, которое содержит А-окси-за- меститель в фенильном кольце и соединение 42, которое содержит 3-метокси- -4-окси-заместитель в фенильном кольце, наблюдается только умеренное влияние среды. Это означает, что различия в минимальных ингибирующих кон- центрациях не превьшают трехкратной величины. Соединение 37, 3,4-диокси- фенильное замещенное соединение, иллюстрирует различие в активности между двумя средами, которое составляет от 600 до 1200%, причем минимальная ингибирующая концентрация в питательном агаре гораздо ниже, чем в агаре №оэллэра-Хинтона. В соответствии с этим противомикробное действие соединения 37 сравнимо с таковым для других цефалоспоринов, имеющих цис- пропенильную группу в положении -3, которые приведены в табл. 2.
Выведенные из указанных исследований вне организма корреляции между структурой и активностью подтверждаются результатами исследований in vivo на мышах. В табл. 4 сведены за- щитные дозы для мышей, зараженных летальной посевной культурой бактерий (пероральная обработка). В этом ис- следовании применяли два различных вида бактерий: грамположительные и грамотрицательные. Защитная доза (ЗДс ) представляет собой дозу, ко-- торая при введений группе зараженных мышей (5 особей) приводит к 50%-ному выживанию спустя 5 сут. (найдена путем интерполяции из кривой зависимости отклика от дозы). Обычно зараженные необработанные мыши умирают в течение 3 сут после заражения летальной посевной культурой.
Данные в табл. 4 состаапены из нескольких различных экспериментов. В этих экспериментах в качестве контрольной обработки использовался цефалексин. Значение ЗД , найденное для цефалексина в том же эксперименте, приведено в скобках сразу после величи гы ЭД go Для испытуемого соединения. Очевидно, что ка-адьнЧ из цефалоспоринов обладает хорошей активностью против инфекции грам + Stap-
Q hylococcus aureus и что соединения, имеющие цис-пропенильную группу в положении -3, являются более актия- ными против грамотрицательной инфекции - соединения 9, 24, 37.
5 В табл. 5 содержатся сравнительные данные о содержании соединений в крови мышей, обработанных перорально и внутримьпиечно испытуемыми соединениями, указанными в табл. 1. Одинако-
Q во хорошее поглощение при пероральном введении наблюдается для всех соединений, кроме соединения 21, которое имеет гетероциклический тио-замес- титель в 3-пропенильной группе. Для
5 соединения 37 наблюдается исключительно высокое содержание в крови мышей после перорального введения. Было .показано, что это соединение при метаболизме у крыс превращается в со0 единение 42 (см. пример 43). Соединение 37 представляет собой 3,4-диок- сифенильное соединение, а соединение 42 является 3-. 1етокси-4-оксифенильным соединением. Последнее соединение имеет высокую активность в организме (in vivo) и вне организма (in vitro). В табл. 6 содержатся дополнительные in vivo данные для соединения 9 против четырех других организмов в
сравнении с цефапоксином, цефаклором и цефадрокснлом. В табл, 7 и 8 содержатся сравнительные in vitro данные для соединения 9 в сопоставлении с цефапексином, цефадроксилом и цефа- хлором в отношении ряда стрептококков, Neisseria, Haemophilis и различных анаэробных бактерии.
В опытах по выделению с мочой крыс выделение в течение 24 ч соединения 9 с мочой крыс, обработанных перорально, сравнимо с тaкoвы f для цефалексина и цефадроксила и выше, чем для цефахлора. Изучение стабильности соединения 9 по сравнению с цеj фалексином и цефахлором в растворе с использованием фосфатного буфера при рН 6,5 м рН 7,0, человеческой сыворотки (рН 6,8), лошадиной сыворотки (рН 7,6) и телячьей сыворотки
5
5
33140740034
(рН 6,8) в качестве носителей пока- // заио, что соединение 9 существенно R2-v /-CHCONH более стабильно, чем цефахлор и срав- /I нимо по стабильности с цефалексином,
NHR О
Формула изобретения
CHgO COOR4
где R, R и R имеют указанные значения.
Способ получения замещенных винил- подвергают взаимодействию с триарил- цефалоспоринов общей формулы Q фосфином при комнатной температуре
в среде несмешивающегося с водой органического растворителя в присутствии водной щелочи, образовавшееся при этом фосфоранильное соединение
Rj- V CHCdNH-i-ГУ
I -..
ОТН о T-CH-CHRj
C.OOR.A15 обрабатывают в безводных условиях
при комнатной температуре карбониль де R . - водород или аминозащитнаяным соединением общей формулы
группа, такая как трет; бутоксикарбонил;R СНО,
К, - водород, гидроксил, галоген 20
или низшая алкоксигруппа;где R - имеет указанные значения,
с последующим, в случае необходимости, снятием аминозащитной группы или сложноэфирной группы, и вьоделеRj водород или гидроксил; RJ - С,-Сф-алкил или С -С арал- кил
R водород или сложноэфирная 2§ нием целевого продукта.
Iгруппа,
ё 2-конфигурацией относительно эк- эоциклической двойной связи, о т- личающийся тем, что ; иненив общей формулы
21 (BBS-109I)
(Гн он -СН2-$Д JN
CHCONH I
NHR О
Приоритет по признакам: 28,01,83 - при R. - водород или гидроксил, R - гидроксил;
28,12.83 при R - галоген или 30 низшая алкоксигруппа, Rg водород, Таблица 1
Среднее для пяти организмов каждой группы: Гп-1а, грамположи- тельные стафилококки: чувствительные к пенициллину; пеницил- ли.наза не образуется: S. aureus Smith А9537, S. aureus A9497, S. aureus Terajima, S. aureus A9534, S,.aureus A9601,
Гп-16 грамположительные стафилококки, -стойкие к пенициллину; продуценты пенициллиназы: S, aureus 193, S. aureus ВХ-1633-2 А9606, S. aureusVA15092, S. aureus Russell, A. aureus A9602;
Го-la грамотрицательные бактерии, чувствительны.к ампициллину и цефалотину: Е. coli Jiihi. А15119, Е, coli А9660, К, pneumo- niae flil, P. mirabilis A9554, P. mirabflis A9900. . He часть испытанияД, a отдельное испытание.
А: агар №оэллера-Хинтона. Б: питательный агар.
Средние величины для тех же групп организмов, что и в табл. 2.
Величины в скобках - данные для цефалексина в том
же опыте,
В этом опыте для ВМУ 28100 получено значение дозы 0,16 мг/кг; контрольные величины для цефалексина или дефадроксила отсутствуют.
P
00
00
о evi
Гх
«n «N|- CM
- N n in
r О
CO io
CO so
ch o
о о о о
I I
00 CS
«п
(Ч
t D f yQ rt
N n n CO - or- «M CM CM - CM 00
VO
N sf 2:0 Я°о :5« 22
CO CO
,
CM - -, . tM
00
«
-. f.
ОЧ sf « 00
IM - r
. . - - - CM
CO о « st
n vO
VOvO r.
о00
53и te
nn pq
mn m
-
sf CM
00 in
-
O
t fO CO
mm -
- enГЧ
CM
ch o
о
- о
IT) vO
о о
о (О
sf со
0000
оо
00
- сч
о -
г.
со
s
VO
CO о - - f СЧ C«4
VO CO S rx .
- -« -
o
VOrx -
VO
о to -
fx
-
00
CM
«Л
IT OV
o
:oo 00
lO «
- л r.
CO ОЧ
r. fl
CO VO I vO
о 00 :
IV. NO
CO vO VO
r
VO
r
« . --
CO
CO
r Ю
Ю
-
sf
CO
r
rx
«
VO. CO1Л) о-
in VO CO СЧ 00 in
I n
vO
r.
0
te
pq
m
n
5ч Ov1
2 2§
IIи
CO COк
mm01
mme
v
- ГХ
о--N
оin
с VO
s 00о
о CM-
к II
о 31 m
mm
ем - ft
Ф
ОЧ ;sf :«м
о00
VOVO
оо
00со CMсм
1I
CM r
CO CO
у
К
о
I
&
n s
Ш
ё
5
ex
CJ
Организм
Минимальная ингибирующая концентрахщя.
