Способ определения фагочувствительности микроорганизмов Советский патент 1988 года по МПК C12Q1/04 

4аь

О Од Од

I Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при постановке реакции фаголизиса.

: Цель изобретения - повышение чувствительности микроорганизмов к iбактериофагам.

: Пример, Для фаготипирования jсальмонелл готовят питательную среду |с ампициллином в концентрации 0,78 мкг/мл (3,9 мкг на чашку), для этого навеску 39 мг ампициллина растворяют в 10 мл 0,9%-ного раствора NaCl и затем троекратно разводят в 10 раз переносом 1 мл раствора антибиотика к 9 мл 0,9%-ного раствора NaCl, В конечном разведении концентрация ампициллина - 3,9 мкг/мл. К 1 мл данного разведения добавляют . 4 мл расплавленного и остуженного до питательного агара, выливают в чашку Петри. Чашку подсушивают в термостате 20 мин..

Для фаготипирования стафилококков протея, кишечной палочки, палочки синезёленого гноя готовят пита-тель- ные средь с интерфероном в титре 1/64: й епарат интерферона разводят физиологическим раствором NaCl до титра 1/8 и к 1 мл данного разведени прибавляют 7 мл остуженного до 46 С питательного агара, выливают в чашки Петри. Чашки подсушивают в термостате 20 мин.

: Исследуемые культуры микроорганизмов наносят на поверхность питательной среды либо стандартной петлей диаметром 5 мм либо засевают сплошным ra3OH(ff, После подсыхания посе- ВОВ на ихтноверхность петлей диаметром 3 мм наносят индикаторный, диагнстический бактериофаг.

Положительную реакцию определяют по наличию-зоны лизиса на месте нанесения ба 1 1офага через 18-20 ч инкубации при 37°t,

Снижение фагорезистентности и ан- тилнзцимной активности микроорганизмов, под действием биологических препаратов представлено в табл. 1.

Как видно из табл.1, под действием препаратов ампициллт-гна и интерферона наблюдается подавление анти- лизоцимной активности исследованных культур. Эффект действия зависит от концентрации препаратов; оптимальными концентрациями, снизившими анти- тилизоцимную активность у большинст

0

5

0.

5

Q 0

5

5

0

5

ва исследованных штаммов являются для ампициллина 0,78 мкг/мл, для интерферона титр 1/64.

Для подтверждения взаимосвязи между антилизоцимной активностью и фагорезистентностью микроорганизмов исследованы культуры с различной степенью антилизоцимной активности.

В табл.2 представлена фагорезис- тентность штаммов Salm. typhi mu- rium с различным уровнем антилизо- цшчной активности.

Фагорезистентность антилизоцим- ноактивньк и неактивных штаммов St. aureus приведены в табл.3.

Как видно из высокоанти- лизоцимо.акти вные штаммы (6-10 мкг) характеризуются более выраженной фагорезистентностью - 65,4% штаммов устойчивы к высоким концентрациям фага в титре 10 -10 , тогда как низкоантилизоцимоактивные штаммы (2-5 мкг) устойчивы к этим концентрациям фага только в 35,4%. Также более выраженной фагорезистентностью харак теризуются антилизоцимоактивные штаммы стафилококков, по сравнению с неактивными (табл.3): среди антили- зоцимоактивных штаммов на 31,1% больше культур, не чувствительных к бактериофагу или чувствительных только к 1-2 типам фага. Полученные в табл. 2 и 3 различия для двух независимых выборок достоверны.

Таким образом, использование способа позволяет снизить Фагорезистентность микроорганизмов, что, в свою очередь, может повысить точность идентификации микроорганизмов по фаголизису.

Формула изобретения

1 с Способ определения фагочувст- вительности микроорганизмов путем посева исследуемых микроорганизмов на питательную среду с последующим нанесением на посевы бактериофага, инкубированием и учетом результатов по фаголизису, отличающий- с я тем, что, с целью повышения чуствительности микроорганизмов к бактериофагам, выращивание осуществляют в присутствии вещества, снижающего антилизоцимную активность микроорганизмов.

2. Способ ПОП.1, отличающийся тем, что, с целью снижения антилизоцимной активности саль314096614

моиеля, используют ампициллин в кон- жения антшшзоцимной активности центрации 0,39-0,78 мкг на 1 мл ере- стафилококков, протея, кгапечнс : иа- ды. ,. лочки или синегнойной палочки, ис3, Способ по п.1,отличаю-пользуют интерферон в титрах 1:64

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при постановке реакции фаголизиса,Цель изобретения - повышение чувствительности микроорганиз мов к бактериофагам. Сущность способа сводится к тому, что исследуемые на фагочувствительность микроорганизмы высевают на питательную среду с введением вещества, снижающего антилизоцимную активность микроорганизмов, например ампициллина или интерферона (в зависимости от вида микроорганизма) в концентрации 0,39- 0,78 мкг/мл среды ив титрах (1:64)- -(1:256) соответственно. На посевы наносят бактериофаг и после инкубирования учитывают наличие фаголизи- са. Установлена корреляция меяэду антилизоцимной активностью микроорганизмов и их фагорезистентностью. Вьфащивание микроорганизмов в присутствии упомянутых веществ снижает фагорезис гентность микроорганизмов, что повьшает чувствительность ьткро- организмов к бактериофагам. 2 з.п. ф-лы, 3 табл. «Л с

щ и и с я тем, что, с целью сниПримечание. Числитель - число .исследованных штаммов.

Знаменатель - число штаммов, у которых нaбJBФдaлcя эффект действия биологических препаратов.

Т а б л и ц а 2

2-5 6-10

34 26

5 7

Примечание. Указан предельньв) титр бактериофага, при котором

наблюдается рост культур.

ВНИИПИ Заказ 3457/27 Тираж 520

Произв.полигр. пр-тие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4

-1:256.

7 10

12 6

7 3

Таблица 3

Подписное