Защитная среда для хранения молочнокислых бактерий Советский патент 1988 года по МПК C12N1/20 

:o :с

Изобретение относится к микробиологической промьшшенности, а именно к разработке защитной среды для сохранения активности кислотообра- зования молочнокислых бактерий, и :Может быть использовано при производ ;стве бактериальных препаратов.

Целью изобретения является обеспечение сохранения активности кисло- тообраэования молочнокислых бактерий при хранении в лиофилизирован- ном виде и удешевление среды.

Экстракт травяной мукк, получен- |ный из расчета содержания исходной травяной мутси 25-35 г/л, характери- |зуется следутощими показателями: Количество сухих I веществ,%б,,7

I Общий азот,% от

I сухого вещества 0,47-0,67 ; Зола,% от сухого

вещества0593-1,31

И служит источником азотного питания (молочнокислых батерий, а также обо- |гащает среду минеральньми веществами |И проявляет стимулирующее действие |Иа сохранение активности кислотооб- |)азования молочнокислых бактерий в ходе их хранения в лиофилизирован- ;ном виде.

. Кормовой витамин В, является ис- |точником B,j , а также пуриновых и пи 1 имидиновых оснований и оказывает |стимулирующее влияние йа сохранение Иорфолого-кулътуральньпс и физиологи- ескик признаков молочнокислых бак- ;терий, в частности на сохранение ак- :Тивности кислотообразования.

Кальций углекислый, является как стабилизатором рН, так и стимулятором процесса кислотообразования мо- ЛОЧНО1СИСЛЫХ бактерий в ходе хранения их в лифолизированном виде.

Назначение обезжиренного молока в составе представленной защитной среды определяется в обогащении ее углеводами, кальцием, витамином А, рибо- флавином и другими представителями комплекса витамина Bg, а также проявляется в качестве наполнятеля.

Пример 1. Готовятзащитную среду при следующем соотношении компонентов, г/л:

Травяная мука25,0

Кормовой витамин В.1,5

Кальций углекислыйi,5

Обезжиренное молокоДо 1 л

Q

5

0

5 0

0

5

25 г травяной муки в гранулах заливают 250 см водопроводной воды (в соотношении 1:10), ставят в термостат при на 16 ч для экстрак- ции. Затем смесь стерлизуют при 3 течение 30 мин, после чего фильтруют через складчатый бумажный фильтр и к полученному фильтрату в количестве 130 см добавляют 1,5 г кормового витамин В и 1,5 г кальция углекислого, рН доводят до 7,0 раствором едкого натра и еще раз стерилизуют при 115 С в течение 30 мин. Полученный объем доводят стерильным обезжиренным молоком до 1 л.

Обезжиренное молоко получают путем центрифугирования 20 мин при 3000 об/мин. Стерилизацию обезжиренного молока производят 3 дня текучим паром при 100 С по 20 мин

Пример 2. Готовят защитную среду следующего состава, г/л:

Травяная мука 30,0 (или

150 г водного экстракта травяной муки)

Кормовой витамин В 2,0 Кальций углекислый 2,0 Обезжиренное молоко До 1 л Приготовление среды проводят аналогично примеру 1.

Пример 3. Готовят защитную среду при следующем соотношении компонентов, г/л:

Травяная мука 35,0 (или/

170 г водного экстракта травяной муки)

Кормовой витами В 2,5 Кальций углекислый 2,5 Обезжиренное молоко До 1 л Приготовление защитноый среды проводят аналогично примеру 1.

Пример 4. Готовят защитную среду при следующем соотношении ком- понентов, г/л:

Травяная мука 20,0

Кормовой витамин В I ,0

Кальций углекислый 2,0

, Обезжиренное молоко До 1 л

Приготовление защитной среды проводят аналогично примеру 1.

Пример 5. Готовят защитную среду при следующем соотношении компонентов, г/л:

Травяная мука 40,0 Кормовой витамин В 3,0 Кальций углекисльш 3,0

Обезжиренное молоко До 1 л Приготовление защитной среды проводят аналогично примеру 1 .

Количественные данные в пределах и за пределами соотношения компонентов защитной среды, следующие:

Пример Кислотообраэование, ммоль/jri

191+2,2

299+2,5

399+2,7

4904:2,1

5102+2,8

За пределами соотношения компонентов (пример 4) активность кислотооб- разования на много меньше активности примера 2, а данные активности примера 5 близки к данным примера 1, поэтому нецелесообразно применение защитной среды с повьш1енной концентрацией компонентов.

Пример 6. Изучение активности кислотообразования молочнокислых бактерий в ходе их хранения.

Известную среду и оптимальный вариант среды засеивают клетками молочнокислых стрептококков и палочек из расчета З-Ю клеток в 1 см . Полученную суспензию по 0,3 см помещают в ампулы и лиофилизируют.

Активность кислотообразования определяют после инкубирования культур в обезжиренном молоке в течение 8, 12, 16, 20 и 24 ч. Температуру культивирования для стрептококков поддерживают при 37 С, для палочек - при ЗО С.

Кислотообразование определяют по следующем методике.

5 см культуральной жидкости титруют 0,1 и раствором NaOH в присутствии фенолфталеина (контроль - незасеянная среда). Полученное число умножают на 20, что выражает кислотность в градусах Тернера.

Оживление лиофилизированных культур проводят следующим способом. Содержимое ампулы заливают 0,3 см защитной среды, выдерживают 12-16 ч при соответствующей температуре (30 С для палочек и для стрпетококков затем засевают пробирки со стерильным обезжиренным молоком из расчета 0,5%.

0

5

0

5

0

:5

а

45

0

5

Изучают изменение активности кислотообразования 16 штаммов молочног кислых стрептококков и 4 штаммов молочнокислых палочек в ходе хранения их в лиофилизированном виде с известной средой (табл. 1) и предлагаемой средой (табл. 2).

Активность определяют в исходной культуре непосредственно после лио- филизации, а также в ходе хранения, в частности после 6 мес, 1 г. и 2 лет хранения.

Как видно из табл. 1 активность кислотообразования большинства фтам- мов молочнокислых стрпетококков непосредственно после лиофйлизации с. известной средой колеблется в преде- лах погрешности по сравнению с активностью исходной культуры, а в некоторых случаях на 1,1,0-106,3% превышает контрольную активность.

Однако активность кислотообразования молочнокислых палочек на много ниже активности кокков и состав.- ляет 87,1-91,3% от активности исходной культуры. Изучение активности в ходе хранения после 6 мес, 1 г. и 2 лет показывает, что активность кислотообразования резко падает как стрептококков , так и палочек при хранении в лиофилизированном виде с известной средой (табл.2) и после 2 лет хранения составляет 61,2-71,4% от активности исходной культуры.

Как видно из табл. 2,активность кислотообразования большинства штаммов как стрептококков, так и палочек превьшает активность исходной культуры .

Активность некоторых штаммов, например Streptococcus kactis Cg составляет 102,5-П0,0% от исходной активности, Str. cactis Се - 100,0- 113,5% от исходной активности, Jjactoba cillus plantanam Lj - 102,2-106,7% от исходной активности культуры.

Применение предлагаемой защитной среды для хранения молочнокислых бактерий обеспечивает возможность сохранить активность кислотообразования в лиофилизированном виде до 2 лет, а в некоторых случаях даже увеличивает активность до 104,8% от исходной культуры.

При применении известной, среды после хранения молочнокислых бактерий в лиофилизированном виде активность кислотообразования после 2 лет

падает до 71,4% от исходной культуры.

Защитная среда для длительного рсранения молочнокислых бактерий пред- |нйзначена для хранения проиэводствен- |{о--|(еи1Ш}с штаммов молочнокислых бакте- Ьий, а также при производстве бактериальных препаратов.

Формула изобретения

I Защитная среда для хранения молоч- Ьокислых бактерий содержащая осно- ру - обезжиренное молоко, -источник 1азота, отличающаяся тем, что с целыо обеспечения сохранения активности кислотообразования молочнокислых бактерий при хранении в лиофнлизированном виде и удешевления среды, она дополнительно содержит кормовой витамин B,j и кальций углекислый, а в качестве источника азота и одновременно минеральных веществ - водный экстракт травяной муки с содержанием сухих веществ 6,9-9,7%, общего азота 0,47-0,67% от сухого вещества и золы 0,93-1,31 от сухого вещества при следующем соотношении исходных компонентов, г/л:

5

Водный экстракт травяной муки Кормовой витамин В

t

Кальций углекислый

130,0-170,6

1,5- 2,5 1,5- 2,5

Обезжиренное молоко Остальное

1Л чО

in

о

vO

N O

O

vt vO

vO

T

vO

in

vO

r

o

«k

о-

vOr

vO

Nt

vr -

vO r

«N

vO

Изобретение относится к микоби- ологической промышленности, а именно к разработке защитной среды для сохранения активности кислотообразо- вания молочнокислых бактерий, и может быть использовано при производстве бактериальных препаратов. Изобретение обеспечивает сохранение активности кислотообразования молочнокислых бактерий в лиофшгазированном виде (до 2-х лет) и удешевление среды. Защитная среда для хранения молочнокислых бактерий содержит водный экстракт травяной муки, кормовой витамин , кальций углекислый и обезжиренное молоко. 2 табл. § сл

CM

in

о 00

-

r

xO 00

vO

00

in

со

in

ОЧ

го

о

«M H

00

оо

ц

+1

CTi

00

О

о

о о

о о

ш

«

см м 00

00

00

л

eg

v

оо

fl

о

го

О

и «

m

и о о и о

4J

р

и

4J

со

tn -

o -

r -

о -

- о -

- CO

r r

in r

r

r

CM

00

о 00

CTi

r.

CO 00

r

r

m

in r

о

00

-

o

in

CO

CO

r r

in r

CM

r

r 00

О

o

vO

00

ГО CO

00

in

CO

00 00

- о

го

о

О

о

о

о

го

«хз о

со

см

00-

ON О

СМ

Ш ON

- О

го

о

оо

ON

N О

ON

t CM VI ON ON

-

СМ

VI

VO О

см м г ON

CS

I

см

ш 00

ш

см +1

ON

г

со

о -

смсм

и«

оо00

со

$J

CJN

см1

I

сосм

и+

.vOчГ

ONо

О О

О

о

О О

о о

о о

о о

о о

о о

о о

о о

1

CJN

СМ

-со

см н ft

vO vX} ON O

CM

«I vO

ON

in

k CM

о

ОС

CM -vt

о оо

ON

« CM

«I

vD 00

CM - 00

CM 4-1 vO ON

CM 4-1 OO

ON

CN

О О

U

О

to U

и

лв

и

cT

и

:: si

и

P

CTN

CM

CM

и

(U

(d u-i

V4

Й

V

I

м

I к

4J W

«1 ОТ