Способ радиоиммунологического определения антигенов Советский патент 1988 года по МПК G01N33/534 

(/;

с

Изобретение относится к медицинской биохимии, а именно к способу иммунологического микроопределения антигенов, и может быть использовано для диагностики различных патологических и физиологических состояний организма человека, а. также в научных исследованиях при определении микроколичеств биологически активных веществ.

Цель изобретения - повышение чувствительности иммунологического определения антигенов.

Пример 1. Построение калибровочной кривой для радиоиммунологического определения раковоэмбрионального антигена (РЭА) по стандартной методике с использованием разделяющей системы на основе иммобилизованных вто- ричных антител в присутствии декстра- на (мол.мас. 70000).

Все определения дублируются .

В пробирки добавляют растворы реагентов:

твин-20-буфер (50 мМ фосфатный буфер, содержащий 0,4% твина-20, 0,6,М NaCl, 0,1 мМ ЭДТА, 0,02% ЫаНз, рН 7,4), содержащий 10% декстрана,

в количестве 0, 1 мл;

растворы стандартов РЭА, приготовленные на нормальной сыворотке человека и содержащие 0,2,5,10,25,80,150 и 350 нг РЭА/мл, в количестве 0,1 мл Х-РЗА, содержащий 10% декстрана, в количестве 0,1 мл;

антисыворотка кролика против РЭА в разведении, необходимом для связы

вания 20-25% вносимого 1-РЭА, содержащая 10% декстрана, в количестве О,1 мл.

В пробирки для определения неспецифического связывания вместо антисыворотки добавляют альбуминовый буфер (50 мМ фосфатный буфер, содер- жащий 0,1% бычьего сывороточного альбумина, 0,15 М NaCl, 0,1 мМ ЭДТА, 0,02% NaNi, рН 7,4).

и пробирки помещают в гамма-счетчик для измерения радиоактивности.

Рассчитывают среднее арифметическое значение (х) количества импульсов в минуту для каждой пары пробирок, а также определяют величину В/Во 100% для каждого стандарта, где В - связанная радиоактивность в пробирках, не содержащих стандарты, имп/мин; БО - связанная радиоактивность в пробирках, содержащих О нг РЭА/мл, имп/мин.

Результаты приведены в таблице.

В линейных координатах строят стандартные кривые, откладывая по оси ординат значение В/Во А 100%, а по оси абсцисс - концентрацию стандартов РЭА в нг/мл. Графическим способом определяют чувствительность анализа (т.е. концентрацию стандарта РЭА, при которой B,). Как следует из таблицы, чувствительность анализа в присутствии декстрана - 2 нг/мл.

Использование предложенного спо

Изобретение отноеится к биохимии, точнее к иммунологическим микроопределениям антигенов, предназначено для диагностики различных патологических и физиологических состояний человека и при определении микроколичеств биологически активных веществ. Цель изобретения - повышение чувствительности иммунологического определения антигенов. Для того инкубирую т антиген со специфическим антителом, один из компонентов радио- активномеченый, инкубацию проводят в присутствии декстрана с мол.мае. 20000-50000 и его конечной концентрацией 3-8%. Затем отделяют радиоактивный комплекс и проводят радиометрию. Все определения для повышения чистоты дублируются. 1 табл. i

Содержимое всех пробирок тщательнодд соба позволяет повысить чувствительперемешивают и пробирки инкубируют 20 ч при комнатной температуре. После инкубации во все пробирки добавляют по 0,1 мл суспензии иммобилизованных вторичных антител. Пробирки встряхи- с вают в течение 1,5 ч при комнатной температуре, после чего центрифугируют 10 мин при 1500 g, осадки промывают 1 раз по 1 мл твин-20-буфера.

ность иммунологического определения антигенов в 2-4 раза по сравнению с известным.

Формула изобретения

Способ радиоиммунологического определения антигенов, включающий инкубацию антигена со специфическими анность иммунологического определения антигенов в 2-4 раза по сравнению с известным.

Формула изобретения

Способ радиоиммунологического определения антигенов, включающий инкубацию антигена со специфическими ан3U255A9

тителами, при этом один из компонен- тельности анализа, кнку6а1шю антигена тов несет радиоактивную метку, отде- со специфическими антителами прово- ление радиоактивного комплекса и его дят в присутствии декстрана с мол. радиометрию, отличающийся , мае. 20000-50000 при его конечной тем, что, с целью повьшения чувстви- концентрации 3-8%.