Способ определения изоиммунологической совместимости крови донора и реципиента Советский патент 1990 года по МПК G01N33/48 G01N33/53 

Изобретение относится к медицние, D частности к гемотрансфуэиологян и касается способа определения изоим мунопогической совместимости крови донора и реципиента.

Цель изобретения - предотвращение посттрпнсфуэионных реакций.

Конкретный пример осуществления способа.

Для операций на сердце с искусственным кровообращением донорскук кровь подбирали следующим .образом.

У больного (реципиента) перед операцией определяли группу по системе АВО и резусную принадлежность крови. То же проделывали с кровью каждого донора. Для выявления сенсибилизации организма больного с появлением ре- зусных (неполных) и других антител, если 1Г анамнезе имелись указания на ранее перенесенные гемотрансфузии, то за неделю до операции проводили тестирование по Кумбсу. Непосредственно перед операцией определяли ин- дивидуальную совместимость крови каждого донора в отдельности с кровью реципиента по антителам системы АВО; а также M,N. Эту пробу став1ши на плоскости при комнатной темпера- туре в солевой среде, за агглютииа- Цией следили в течение 5 мин. При этом на стекле сначала смешивали эритроциты каждого донора в отдельности с сывороткой крови больного, затем эритроциты больного с сывороткой крови каядого донора. Появление агглютинатов зритроцитой в обесцвеченной жидкости означает несовместимость крови данного донора с кровью больного. Далее определяли совместимость крови доноров с кровью реципиента по резус-фактору, причем это .делали с помощью 2 проб, а именно с помощью применения желатины (в , пробирках) и с помощыа примене1тя непрямой пробы Кумбса. Пробы с желатиной ставили в термостат в агглю- тинационных пробирках (по числу дойо роп) при f 6-fi8°С на 10 мин. Появление в пробирках плавающих хлопьев озяачалр несовместимость. Для постановки непрямой пробы Кумбсд сначала трижды отмывали эритроциты каждого донора в центрифужных пробирках, затем отмытые эритроциты инкубировали с сывороткой реципиента в термоста- те при 37 С в течение А5 мин, после .чего инкубированные эритроциты вновь

Q ,

0

подвергали трехкратному отмыванию и к отмЫтым эритроцитам добавляли сыворотку для пробы Кумбса, представляющую собой кроличью антисыворотку к глобулинам человека. Если при размазывании на стекле образовывались агглютинаты эритроцитов, то кровь , такой пробы признавалась несовместимой по системе резус- и другой специфичности.

Дополнительно определяли совместимость ка |одого донора в отдельности с реципиентом по плазменно-белковым антигенным системам, используя с этой целью реакцию связывания комплемента (РСК). Техника поставноки РСК в предлагаемом нами способе за- ключалось в следующем.

В сухие центрифужные пробирки набирали по 8-10 г-т крови реципиента и каждого донора в отдельности. Пробы крови центрифугировали 10 мин до образования прозрачной плазмы. Нз каждой пробирки в видапевские пробирки переносили по 0,1 мл плазмы и добавлялк по 0,4 мл физиологического раствора. В эти же пробирки добавляли по 0,5 мл разбавленной физиологическим раствором (1:5) плазмы реципиента. К набору видалевских . пробирок (по числу доноров) в штатив добавляли еще одну пробирку для конт роля положительной реакции связывания комплемента, в которой в таких же объемах соединяли плазму одного из доноров с сывороткой для реакции Кумбса. Штатив со всеми пробирками ставили в холодильник на 18 ч для инкубации. Параплельно го- - товили 3%-ную взвесь бараньих эритроцитов в физиологическом растворе, для чего у животного, путем венопунк- ции забирали 5 мл крови в центрифужную пробирку. Кровь центрифугировали в течение 5 мин, образовавшуюся сверху плазму сливали, а эритроциты на дне пробирки подвергали трехкратному отмьгоанию физиологическим раствором. Для этого пробирку доверху наполняли физиологическим раствором, центрифугировали и раствор сверху сливали, оставляя на дне пробирки эритроциты. В заключение для получения 3%-ной взнеси эритроцитов в чистую пробирку переносили 2 капли Эритроцитов и 10 капель физиологического раствора.

Далее следовал основной этап постановки РСК. Из холодильника иэвле- калм штатив с набором пробирок со смешанной плазмой реципиента и каждого донора в отдельности. В каждую из этих пробирок добавляли по 0,5 мл взнеси эритроцитов барана. В контролной пробирке содержалось по 0,5 мл плазмы одного из доноров, сыворотка для реакции Кумбса и взвесь эритроцитов барана. Штатив с этими пробирками ставили в термостат для инкубации в течение 60 мин при 37 С, после чего пробирки извлекали и оценивали результаты реакции связывания комплемента. Реакцию признавали положительной, если эритроциты барана осе/1И на дно пробирок и не подверглись гемолизу; если же произошел их гемолиз то РСК считали отрицательной. Гемолиз эритроцитов может быть полный (лаковая кровь) или частичный. В последнем случае степень ге-- молиза оцениваемся знаками плюс (от одного до пяти). При положительной РСК кровь данного донора несовместима с кровью реципиента, при отрицательной реакции связывания комплемента - совместима с кровью реципиента, и может быть перелита ему. Следует подчеркнуть, что данное тестирование определяет совмест11мость лишь по белково-плазменным антигенным системам, по скольку при этом можно судить, что при смеитвании плазмы донора и реципиента произошло (положи- тель ная РСК) или не произошло взаимодействие между антигенами и антителами совпадающей иммунологической специфичности, содержащимися в указанных плазмах. Если взаимодействие происходит, то образуются комплексы антиген-антител и на -поверхности

o

5

0

племента. В отсутствие свободного комплемента в.среде гемолиз эритроцитов барана не может произойти.

.На 500 кардиох1фургических опера- ций, вьтолненньтх в условиях искусственного кровообращения (-разновидность массивной гемотрансфузии) с общепринятым агглютинац ионным тестированием совместимости крови доноров и реципиентов по эритроцитным антигенным системам АВО, резус и др. т.е. без применения РСК постстранс- фузионные осложнения типа синдрома гомологичной крови встречались в 2,5% случаев. В сопоставляемой се- . рии операций в числе 85, в которых для искусственного кровообращения в изоиммунологическом подборе совместимой донорской крови применялись те же методики агглютинационного тестирования и дополнительно для совместимости по плазменно-белковым ан- тигенным системам применялись реакции связывания комплемента, ни в одном случае пострансфузионных осложнений типа синдрома гомологичной крови не наблюдалось (0%).

5

30 Формул.а изобретения

Способ определения изошо гунологй- ческой совместимости кропи донора н реципиента путем проведения агглкг- . тинационных реакций -по зритроцитар- но-антигенным системам, отличающийся тем, что, с целью предотвращения посттрансфузионных реакций при массивных гемотрансфу- зиях, дополнительно определяют совместимость по белково-плазменным антигенным системам с применением реакции связывания комплемента в смешан ных образцах плазм крови реципиента

5

0

Изобретение относится к медицине, точнее к гемотрансфуэиологии касается способа определения изоим- мунологической совместимости крови донора и реципиента. Цель изобретения - предотвращение посттрансфузион- ных реакций. Дпя этого проводят реакции агглютинации по зритрацитарно- антигенным системам, определяют совместимость по бепково-плазменным аи- тигенньм системам, применяя реакции связывания комплемента в .смешанньк образцах плазм крови реципиента и донора. Оsg