Способ получения антибиотика СР-63517,используемого в качестве кормовой добавки для крупного рогатого скота и свиней Советский патент 1988 года по МПК C12P1/00 

4

со

tc

Изобретение относится к способу получения нового кислотного полициклического эфирного антибиотика СР-63517. Целью изобретения ется повьшение эффективности способа. Способ заключается в следующем: проводят культивирование Streptomyces endus, subsp, iaureus ATCC-39574 на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и неорганические соли, при 24-26 С с последующим вьщелением антибиотика в виде катионнрй соли общей формулы. СО

CM

Изобретение относится к способу получения нового антибиотика, обозначенного как СР-63517, который был выделен при ферментации нового штамма рода Streptomyces, выделенного из образца почвы, отобранного в префектуре Окаяма в Японии, и которому присвоен кодовый номер № 497-34. Этот

СОоН Me Me

39 38 37

где Me

СН

аЕго катионные-соли активны против различных микроорганизмов и эффектив- щ при борьбе с кокцидозом, энтери- .Том, дизентерией у свиней и тейлерио- ioM, а также эффективны для ускоре- Йия роста у. свиней и жвачньк живот- 1х, а также для повьшения эффектив- ости усвоения пищи свиньями и ро- Ытым скотом.

I Штамм Streptomyces endus, subsp, tireuB депонирован в Американской кол |1екции типовых культур (АТОС) под Номером 39574..

Культуру инкубируют при 28 с и по40

45

|1ученные результаты проверяют в различные моменты времени, но обычно спустя 14 дней. Окраску описывают в обычной терминологии, но точные цвета определяют путем сравнения с хветными пластинами Color Harmony ;Manual четвертого издания. Для идентифйКй1ири используют дуюпще среды.

Экстракт трицтон-дрожжевого буль она ISP 1-я среда).

Агар на экстракте дрожжей-экстрак- те солода (ISP 2-я среда,Difco).

Агар на отваре из овсяной муки (USP Зя среда Difco).„

Агар на смеси неорганические соли- крахмал (ISP 4гя среда, Difco).

Агар на смеси глицерин-аспаратин (ISP, 5-я среда, Difco).

50

новый антибиотик относится к кислотным полициклическим эфирным (ионо- форным) антибиотикам.

Целью изобретения является новый антибиотик, обладающий высокой эффективностью в качестве кормовой добавки для крупного рогатого скота и свиней и имеет химическую формулу.

7

ОМе

. 30 гСН20Н

п

5

0

5

0

Агар на смеси пептон-дрожжевой экстракт-железо (ISP 6-я среда, Difco).

Сахарозный агар S.A. Waksman. ilJhe Actinomycetes, Vol 2 среда №1, с,328, 1961 .

Глюкозо-аспарагиновый агар, там же среда № 2, с. 328.

Агар Беннета, там же, среда № 30, с. 331 .

Агар Эмерсона, там же, среда № 28, с. 331 .

Питательный агар, там же, среда № 14, с. 330.

Тирозиновый агар Гордона и Смита - R. Е. Gordon and М.М. Cmith, J. Bact 69, с. 147-150 (1955).

Казеиновый агар, там же.

Агар кальций малата - З.Д. Wark- sman, Bact. Rev. 21, 1-29 (1957),

Желатин - R, Е, Gordon and I.M. Mihm, j. Bact 73, с. 15-27

51957).

I

Крахмал, там же.

Органический питательный бульон, там же.

Декстрозный питательный бульон - S.A. Waksman The Actinomycetes, vol2, среда № 1, с. 328, 1961, с добавлением 30 г сахарозы вместо 3 г декстрозы и без агара.

Агар на картофеле и моркови - М.Р. Lecheyalier, J. ЬаЪ. and Clinical Med. 71, с.934-944 (1968), но,

3

используют только 30 г картофеля, 2,5 г моркови и 20 г агара.

2%-ный агар на водопроводной воде

Снятое молоко - Difсо.

Продукты переработки целлюлозы:

а) H.L. Jensen. Proc. Lenn. See N.S.W. 55, 231-248 (1930).

в) M.Lenine and M.W.Schocnlein КОМПИЛЛЯЦИЯ культуральной среды, среда № 2511, 1930.

Углеводы -IP, 9-я среда, Difсо

Температурньй интервал -IP 2-я среда плюс 50 мл коко сового молока на литр среды.

Морфологические характеристики.

Морфмологические характеристики прослеживают на агаре из овсяной муки после 14 дней инкубирования: масса спор в серых колористических сериях ,спорофоры разветвлены моно- подно; цепи спор спирального малого диаметра (3-4 мкм), слега открытые, от 3 до 7 поворотов на цепь спор, от 10 до 50 спор на цепь cnopj споры коротки палочкообразные, иногда глобулярные, овальные или эллиптические прямые или слегка искривленные, причем некоторые из слегка искривленных с непараллельными концами и образуют пятиугольник 1,0-1,8 0,9-1,2 мкм или 0,9-1,2 мкм диаметром} бородавчатые по данным электронной микроскопии.

Биохимические характеристики.

Меланин не продуцирует, сероводород продуцирует, желатин ожижает, крахмал гидролизует, нитрат восстанавливает до нитрита, хороший рост на бульоне на целлюлозе Левина и Шо- энлейна, но плохой рост на бульоне на целлюлозе Йёнсена нет разложения на обоих бульонах на целлюлозе, коагулирует и просветляет на молоке; усваивает казеин; усваивает малаты, кальций; не усваивает тирозин. Усваивает углеводы: глюкозу, арабинозу, фруктозу, инозитол, маннитол, раффинозу, рамнозу, сахарозу и ксилозу.

Температурная зависимость: 21°С - хороший рост, 28°С - отличный рост , - хороший рост, - умеренный рост.

Новый антибиотик получают ферментацией нового штамма Streptomyces endus. sudsp, aureus ATCC-39574 и экстракцией полного бульона при естественном рН метилизобутилкетоном

316824

и концентрированием растворителя до получения вязкого масла. Это масло суспендируют в гептане и порциями

с обрабатывают на силикагеле. Лепешку сипикагеля элюируют хлороформом, смесью хлороформ (этилацетат, этил- ацетатом и смесь этилацетат) ацетат. После концентрирования из этилацетатO ной фракции получают небольшое количество неочищенного продукта, из которого перекристаллизуют антибиотик СР-63517 в виде смеси солей натрия и калия. Streptomyces. endus.subsp,

5 auceus ATCC-39574 выращивают при

температуре от 24 до в погруженных условиях при перемешивании и аэрации на.среде, состоящей из таких источников углеводов, как сахара,

0 крахмал, глицеринJ таких веществ, содержащих органический азот, как соевая мука, казаминовые кислоты, экстракты дрожжейJ из таких ростовых веществ, как растворимые части зерна,

5 рыбная мука, мука хлопковых семян из минеральных солей, содержащих следовые количества таких элементов, как железо, кобальт, медь, цинк и карбонат кальция или фосфаты в ка0 честве буферирующих агентов. Антибиотик можно вьщелить экстрагируя полный бульон различными органическими растворителями, например, н-бу- танолом, метилизобутилкетоном или

ОС хлороформом. Неочищенные формы антибиотика РС-63517 или высушенный ферментационный бульон, содержащий антибиотик , можно вводить в кормовые ;композиции в нужных концентрациях.

0 I Пример.

Выделение .антибиотика СР-63517 из ферментационного бульона.

Полный бульон из Го сосудов ферментации культруры АТСС-39574 (пол45 ный объем приблизительно 25 л) экстрагируют половиной объема метилизо ; бутилкетона. Полученный экстракт концентрируют в вакууме до получения ко- :ричневого масла (20 г). Этот материал

СП хроматографируют на колонке см з аполненной силикагелем хроматографи ческой степени чистоты в зтилацетате. Колонку проявляют этилацетатом со ско- рортью 10 мл/мин. Отбирают фракции

по 10 мл. Затем эти фракции исследуют с помощью тонкослойной хроматографии на пластинах силикагеля с проявителем этилацетатом. Затем пластины опрыскивают 3%-ным ванилином в этаноСОоН Me Me Пе 39 38 37

35

V V 30 об СН20Н