Изобретение относится к химии фосфо- рорганических соединений с Р-С-связью, а именно к 3.3-ди-трет-бутил-6-метил-5-оксо2,3,4,5-тетрагидро-1.2,4,3-Я -триазафосфо- риний хлориду, формулы
--Н
.-f/Nx
(тре/л.г С iJio) Р N II .cf
HN
т U
/
Y СН;
О
который обладает противовирусной активностью и может найти применение в качестве препарата для экспериментальной терапии рабдовирусной инфекции, а также в качестве модельного вещества для целенаправленного синтеза противовирусных средств.
Целью изобретения является повышение противовирусной активности в отношении вируса везикулярного стоматита.
П р и м е р 1.3,3-Ди-трет-бутил-6-метил5-оксо-2.3.4.5-тетрагидро-1,2.4,3-Я -триаза- фосфориний хлорид.
К раствору 0,01 моль (2,30 г) ди-трет-бу- тил-амино-гидразинофосфоний хлорида в 30. мл бензола или толуола при механическом перемешиваний прибавляют 0,01 моль (0.88 г) пировиноградной кислоты. Реакционную смесь кипятят с насадкой Дина-Старка в течение 1,5 ч (до полного прекращения отделения воды), охлаждают до 5-7°С. выдерживают при этой температуре 5-6 ч, осадок отфильтровывают.
Выход 2.57 г (92%).
Вновь синтезированное соединение - бесцветное кристаллическое вещество, растворимое в воде, низших спиртах, ацетоне, устойчивее в обычных условиях хранения.
П р и м е р 2. Определение токсичности нового химического соединения (XС) прово- дят в культуре фибробластов эмбриона человека (ФЭЧ). Для этого к питательной среде 199 добавляют различные количества химического соединения, начиная с 5000 мкг/мл и менее. Наблюдения за культу- рой ФЭЧ ведут в течение 4 сут с ежеднев- ным просмотром. За максимальную переносимую дозу (МПД) исследуемого ХС принимают его наибольшее количество, которое не вызывает дегенерации клеток культуры ФЭЧ, Рабочая доза (РД) составляет 4/2 МПД.
Результаты определения максимально переносимой дозы (МПД) предлагаемого соединения в сравнении с рибамидилом - эта0
5
0
о 5
0
5 0 5
лоном сравнения, препаратом широкого спектра антивирусного действия представлены в табл. 1.
П р и м е р 3. Определение противовирусной активности к РНК-содержащим вирусам Коксаки А 13 (Floret), Коксаки В 4 (Powert), ECHO 11 (Gregory), везикулярного стоматита (Indiana) и ДНК-содержащему вирусу простого герпеса I типа (Л-2) проводят по методу De Clereg et al.
Тест-вирусами в дозе 1000 ТЦДбо /0,1 мл заражают культуры клеток ФЭЧ и Нер-2 с инкубацией 1 ч при . Непосредственно после адсорбции вирус сливается, клетки промываются средой 199 и в пробирки вносится среда поддержки, содержащая различные концентрации исследуемого препарата. Наблюдение ведут на протяжении 72 ч с ежедневным просмотром. Отсутствие цитопатического действия вируса в опыте при срабатывании его в контроле позволяет считать в данной концентрации препарат активным.
Исследование противогриппозной активности ХС проводят в развивающихся куриных эмбрионах с использованием вируса гриппа А (Аи Ru ЗНЗ № 2).
Проведенные исследования свидетельствуют о том, что предлагаемое соединение имеет МПД в культурах клеток ФЭЧ и Нер-2. равную 250 мкг/мл. В рабочей дозе, равной 125 мкг/мл, соединение задерживает репродукцию вируса везикулярного стоматита. Величина химиотерапевтического индекса (ХТИ) составляет 8.
В качестве эталонасравнения используют рибамидил.
В табл. 2 представлены сравнительные данные оценки противовирусного действия предлагаемого соединения и рибамидила в отношении вируса везикулярногостоматита в культуре ФЭЧ.
Таким образом установлено, что в рабочей дозе 50 мкг/мл (МДП 100 мкг/мл) рибамидил не оказывает влияние на репродукцию вируса везикулярного стоматита.
ЛД50 для 3,3-ди-трет-бутил-6-метил-5оксо-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,4,3- А -триаза- фосфориний хлорида, определяемая путем однократного внутрибрюшинного введения половозрелым беспородным мышам массой 18-20 г. составляет 5000 мг/кг.
Физико-химические свойства 3,3-ди- трет-бутил-б-метил -5-оксо-2.3,4.5-тетрагидро-1.2.4,3- Я -триазафосфориний хлорида: мол,м, 279,775; т.пл. 175°С (разложение); после многократной перекристаллизации
из метанола (разложение); ЯМР р бр.м.д. 70 (в метаноле).
Найдено. %: Р 10,85; С1 12,72; N 14,80.
Вычислено, %; Р 11,07; С112,67; N 15,02, (56) Калнынь В.А. и др. Устойчивость вирусов к химиотерапии. Рига, 1984, с. 40.
Изобретение относится к химии фосфорорга- нических соединений, в чааности в 3,3-ди-трет- 3,3-ди-трет-бутил-6-метил-5-оксо-2,3,4,5-тет4 рагидро-12,4.3- А -триазафосфориний хлориду, который обладает противовирусной активностью и может найти применение в медицине. Цель - получение более активного соединения в отношении вируса везикулярного стоматита. Получение целевого соединения ведут из ди-трет-бутил-амино- гидразинофосфрний хлорида и пировиноградной кислоты в бензоле или толуоле лри кипячении в течение 1,5 ч Выход 92%. Т.ПЯ 180° С (разложение). LD 5000 мг/кг. Предлагаемое соединение полностью подавляет репродукцию вируса везикулярного стоматита в отличие от рибамидила. 2 табл.
Обозначения.
++++Дегенерация 100% клеток
++ Дегенерация 50% клеток
- Отсутствие дегенерации клеток
Обозначения, + Подавление репродукции вируса - Отсутствие подавления репродукции вируса.
Формула изобретения 3.3-Ди-трет-бутил -6-метил-5-оксо-2,3,4 ,5-тетрагидро-1,2,4,3 - А -триазафосфори- ний хлорид формулы
ТГ fTPCT.-CJl,l г
СГ
IIN
.
Таблица 1
Таблица 2
обладающий противовирусной активностью в отношении вируса везикулярного стоматита.
