Способ получения замещенных андроста-1,4-диен-3,17-дионов Советский патент 1988 года по МПК C07J1/00 

СП

Изобретение относится к способу получения новых замещенных андроста- -1,4-диен-З,17-дионов, а именно 6-алкилиденандроста-1,4-диен-З,17- -дионов общей формулы (I):

-СНз//

Ж:й

(I)

сы.

где R - водород или С,-С4 алкил.

Предлагаемые соединения проявляют сильное ингибирующее действие на ароматазу в лабораторных условиях и обладают исключительно высокой эффективностью действия в живом организме благодаря своей более высокой метаболической стабильности по срав- нению с известными соединениями ана-i логичной структуры,,

Пример 1.0,30 г б-метилен- андроста-4-ен-3,17-диона и 0,57 г дихлорцианобензохинона (ДДХ) подвер- гают дефлегмации в 20 мл безводного диоксана в течение примерно 15-ч, Для того чтобы удалить ДДХ, суспензи фильтpyю через окись алюминия. После выпаривания растворителя остаток растворяют в этилацетате, органический слой промывают водой, сушат над сульфатом натрия и растворитель удаляют под вакуумом. Неочищенньй продукт подвергают хроматографии на силикагеле, используя смесь гексан/ этил ацетат 40% с тем, чтобы получит в результате 0,25 г чистого 6-мети- ленандроста-1,4-диен-З,17-диона, температура т.пл. 188-191°С, Д макс. 247 Mf( 13,750).

Найдено, %: С 81,01; Н 8,05.

CjaHi+ a ,

Вычислено, %: С 81,04; Н 8,16.

В соответствии с описанной процедурой были получены следующие соединения .

1 -Метил-6-метиленандроста-1 -4- -диен-3,17-дион, т.пл. 178-180 С.

Найдено, %: С 81,18; Н 8,37.

Вычислено, %: С 81,25; Н 8,44. 1-Этил-6-метиленандроста-1,4- -диен-3,17-диен.

5

0 5

0 g 0

0

Найдено, %: С 81,32; Н 8,62.

.

Вычислено, %: С 81,44; Н 8,70.

4-Метил-6-метиленандроста-1,4- диен-3,27-дион.

Найдено, %: С 81,15; Н 8,32.

Вычислено, %: С 81,25; Н 8,44,

Пример 2. Смесь 6-метилен- андроста-4-ен-З,17-диона (0,50 г), двуокиси селена (0,50 г) и трет-бу- тилового спирта (200 мл) нагревают до температуры дефлегмации в атмосфере азота в течение примерно 30 ч. Охлажденный раствор фильтруют, а затем выпаривают до сухого состояния при пониженном давлении. Остаток переносят в этил ацетат (100 мл), обрабатывают древесным углем и промывают последовательно водой, раствором сульфида аммония, холодным 17% раствором гидрата аммония, холодной разбавленной хлористоводородной кислотой , водой, сушат с сульфатом натрия и наконец выпаривают до сухого состояния. Неочищенный продукт подвергают хроматографии в соответствии с описанием приведенным в примере 1, в результате чего получают 0,20 г чистого 6-метиленандроста-1,4-диeн- -3,17-диoнa, температура т.пл. 188igi c.

Следуя той же процедуре получали следукадие соединения.

1-Метил-б метиленандроста-1,4- -диен-3,17-дион.

Найдено, %: С 81,16; Н 8,37.

Вычислено, %: С 81,25; Н 8,44.

1-этил-6-метиленандроста-1,4- -диeн-3 , 1 7-дион .

Найдено, %: С 81,32; Н 8,62.

Вычислено, %: С 81,44; Н 8,70.

4-Метил-6-метиленандроста-1,4- -диен-3,17-дион.

Найдено, %: С 81,15; Н 8,32.

С З, 2. 6 i

Вычислено, %: С 81,25; Н 8,44.

Пример 3. Раствор диметил-г лития меди получают в атмосфере азота при помощи добавления 1,6 М раствора в простом эфире метил лития в шлам иодида одновалентной меди в безводном простом эфире при . Раствор перемешивают при 0°С в тече- / ние 20 мин, а затем в течение 20 мин

14

добавляют 5с|(-андрост-1 -ен-3,17-лион в безводном тетрагидрофуране и перемешивают еще в течение 30 мин. Смес сливают в насыщенный водный раствор хлорида аммония, затем добавляют бензол и полученную в результате смесь быстро фильтруют через 1 иатомо вую землю. Органический слой промывают водным раствором хлорида аммо- НИН, водой, сушат над сульфатом магния и выпаривают до сухого состояния. Остаток подвергают хроматографии на силикагеле, используя смесь гексан-этил ацетат 10-20%, в резуль- тате чего получают 1р-метил-5(/-анд- роста-3,17-дион.

ИК (КВг): 1710 см- (3-оксо); 1740 (17-оксо).

В раствор 1 метил-5(/-андроста- -3,17-диона (3,025 г 10 ммоль) в ледяной уксусной кислоте (100 мл) по каплям при 20-25 С при энергично перемешивании добавляют раствор брома (1,60 г, 10 ммоль) в ледяной ук- сусной кислоте (30 мл), содержащей одну каплю 47% раствора НВг. Бром расходуется в течение 20 мин.

-Полученньм раствор сливают в воду и полученный в результате оса- док собирают, тщательно промывают водой и сушат под вакуумом, в результате чего получают 3,82 г (100%) неочищенного 4-бром-1 метил-5-of- -андроста-3,17-диона.

ИК (КВг): 1740 см (3-оксо,17- -оксо).

Раствор неочищенного соединения брома, полученного в соответствии с описанием, в диметилформамиде (100 мл) перемешивают с высушенным хлоридом лития (7 г) при 140-150 С После охлаждения раствор сливают в воду и полученный в результате маслянистый продукт экстрагируют с ис- .пользованием простого эфира. Орга- гический слой промывают 10%-ным раствором хлористоводородной кислоты и водой, сушат, а затем выпаривают под вакуумом. Остаток подвергают хроматографии на силикагеле, используя смесь гексан-этил ацетат 10-30%, в результате чего получают 2,4 г (80%) 1-fi-мeтил-aндpocт-4-eн-3,17- диона. .

ИК (КВг): 1620 (4); 1660 (3- ОКСО); 1735 (17-оксо).

Смесь ацетата натрия (1 г), абсолютного хлороформа (30 мл), форм

7

альдегида-диэтилацеталя (30 мл, 0,24 моль), фосфорил хлорида (3,8 мл 0,04 моль) и 1 9-метил-андрост-4-ен- -3,17-диона (0,811 г, 2,7 моль) перемешивают при температуре дефлегмации в течение примерно 7 ч, т.е. до тех пор, пока не исчезнет исходный материал. Суспензии дают возможность охладиться и при энергичном перемешивании по каплям добавляют на сьш1енный раствор карбоната натрия до тех пор, пока рН водного слоя не станет щелочным (примерно 1 ч). Органический слой отделяют, нейтрализуют водой и сушат при помощи сульфата натрия. После концентрации при пониженном давлении маслянистый остаток подвергают хроматографии на силика- геле, используя смесь гексан-этил ацетат в качестве элюента. Таким образом получают чистый 1/5-метил-6- -метиленандрост-4-ен-З,17-дион с 60% выходом (0,195 г).

ИК (КВг): 3100 (6 CHj); 1735 (17-оксо); 1680 (3-оксо); 1630, 1660 см- ( й- и 6 CHj).

Пример 4. Раствор андрост- -4-ен-З,17-ДИона в трет-бутаноле нагревают до кипения и в кипящий раствор добавляют трет-бутилат калия в трет-бутаноле. Затем медленно добавляют метил хлорид в трет-бута- ноле. Раствор охлаждают, подкисляют концентрированной хлористоводородной кислотой и разбавляют водой. Избыток трет-бутанола удаляют под вакуумом и водный слой экстрагируют этил ацетатом. Соединенные экст{)акты промывают водой, сушат над сульфатом магния и выпаривают под вакуумом. Остаток подвергают хроматографии на силикагеле и элюируют смесью гек- сан-этилацетат. Элюент выпаривают и остаток кристаллизуют из простого эфира, в результате чего получают 4-метиландрост-4-ен-3,17-дион.

ИК (КВг): 1735 (17-оксо), 1660 (3-оксо), 1620 см- (it).

В качестве альтернативы смесь андрост-4-ен-З,17-диона, тиофенола, 40%-ного водного раствора формальдегида, триэтиламина и этанола нагревают до температуры дифлегмации в течение примерно 48 ч. Охлажденный раствор сливают в водный раствор гидрата окиси натрия, а продукт лируют при ПОМ01ДИ экстрагирования простым эфиром. Эфирные экстракты

5

промывают водой и сушат над сульфатом магния. Полученный в результате остаток растирают с гексаном с тем, чтобы удалить любые побочные продукты конденсации, образовавшиеся из тиофенола и формальдегида. 4-Фенил- тиометиландрост-4-ен-З,17-дион, полученный таким образом, подвергают десульфуризации при помощи растворения в ацетоне и добавления в суспензию Никеля Ренея в кипящем ацетоне. Смесь подвергают дефлегмации в течение примерно 5 ч при перемешивании. Горячий раствор фильтруют и катализатор промывают кипящим этанолом и водой. Соединенные фильтры подвергают концентрированию под вакуумом, при этом продукт отделяют в зиде твердой массы. В результате рекристаллизации из смеси ацетон- гексан получают 4-метилен-дроЬт-4- -ен-3,17-дион.

Смесь ацетата натрия (1 г), абсолютного хлорофорка (30-мл), диэти ацеталь формальдегида (30 мл, 0,24 моль), фосфорил хлорида (3,8м 0,04 моль) и 4-метил-андрост-4-ен- ,17-диона (0,81 г 2,7 ммоль} подвергают дефлегмации в течение приме

но 7 ч, т.е. до того момента, пока не прореагирует весь исходный материал. Суспензии давали возможность охладиться и при энергичном перемеши

5

0

5

0

Кукурузный крахмал 415 Порошкообразный тальк30

Стеарат магния5

Перемешивают 6-метиленадроста-1,4- -диен-3,17-дион, лактозу и половину количества кукурузного крахмала, затем смесь просеивают через сито с размером отверстий 0,5 мм. Кукурузный крахмал (10 г) суспендируют в теплую воду (90 мл) и полученную в результате пасту используют для гранулирования порошка. Гранулят сушат, просеивают через сито с размером отверстий 1,4 VIM, затем добавляют остаточное количество крахмала, тальк и стеарат магния, все это тщательно перемешивают и прессуют в таблетки. Пример 6. Капсулы, каждая из которых содержит дозу 0,200 г и 20 мг активного материала, получают следующим образом.

Состав для 500 капсул, г: 6-Метиленандроста-1,4- диeн-3,17-диoн10 Лактоза 80 Кукурузный крахмал 5 Стеарат магния5 Эту композицию помещают в желатиновые капсулы, состоящие из двух половин, каждая капсула содержит дозу в 0,200 г.

Ингибирование -ароматазы при помо

Изобретение относится к производным природных стероидов, в частности к получению замещенных андро- ста-1,4-диен-З,17-дионов формулы I .Сн, ж О СЫгде К ., -И или С |-С -алкшт, которые проявляют сильное ингибирующее действие на ароматозу в лабораторных условиях и высокую активность в живом организме. Цель изобретения - выявление новых более активных соедине НИИ. Получение их ведут дегидрогенизацией соответствунмцего 1,2-дигид- ропроизводного соединения формулы I с помощью агента дегидрогенизации в органическом расгворителе при температуре кипения с обратным холодильником. 1 табл. . (У) С

вании по каплям добавляют насыщенный -jg щи предлагаемых соединений (испытыраствор карбоната натрия до тех пор, пока рН водного слоя не станет щелочным (примерно 1 ч). Органический слой отделяют, нейтрализуют водой , и сушат над сульфатом натрия. В результате концентрирования, при пониженном давлении получают маслянистый остаток, который подвергают хроматографии на силикагеле, -используя смесь гексанэтил ацетат в качестве элюента.

Таким образом получают чистый 4-метил-6-метиленандрост-4-ен-3,17- -дион с выходом 60%.

ОК (КВг): 3080 (6-СКб), 1735 (17-оксо), 1665 (3-оксо), 1635, 1595 см- ( д 6 CHj).

Пример 5. Таблетки, каждую весом 0,150 г и содержащую 25 мг активного материала, получают следующим образом.,

Состав (для 10 000 таЪз1еток), г:

6-Метиленандроста-1,4-диен-З,17-дион 250

Лактоза , 800

вапось как in vitro (ароматаза плаценты человека) так и in vivo (активность ароматазы яичников) на крысах.

40 В качестве примера активность

6-метиленандроста-1,4-диен-З,17-дио (внутренний код F СЕ 24304) и 1-ме- тил-6-метиленандроста-1,4-диен-З,17- диона (внутренний код F СЕ 25027)

45 сравнивали с активностью хорошо известных ингибиторов ароматазы: 4-ок- си-андрост-4-ен-З,17-диона (40Н-А), / 1- тестололактона и андроста-1,4- -диен-3,17-диьна.

50 6-Метилен-андрост-4-ен-3,17-дион был предложен в качестве эффективно го промежуточного соединения при получении ценного с терапевтической точки зрения 6о(-метилового стероид55 ного гормона, однако какой-либо тер певтической ценности самого соединения не было отмечено.

А Ингибирование ароматазы в лабораторных условиях in vitro.

и предлагаемых соединений (испытыапось как in vitro (ароматаза лаценты человека) так и in vivo (активность ароматазы яичников) на крысах.

В качестве примера активность

6-метиленандроста-1,4-диен-З,17-диона (внутренний код F СЕ 24304) и 1-ме- тил-6-метиленандроста-1,4-диен-З,17- диона (внутренний код F СЕ 25027)

сравнивали с активностью хорошо известных ингибиторов ароматазы: 4-ок- си-андрост-4-ен-З,17-диона (40Н-А), / 1- тестололактона и андроста-1,4- -диен-3,17-диьна.

6-Метилен-андрост-4-ен-3,17-диона был предложен в качестве эффективного промежуточного соединения при получении ценного с терапевтической точки зрения 6о(-метилового стероидного гормона, однако какой-либо терапевтической ценности самого соединения не было отмечено.

А Ингибирование ароматазы в лабораторных условиях in vitro.

Ферментную систему изолировали из микросомальной фракции ткани человеческой плаценты в соответствии со стандартным приемом. Использовали аналитический метод Томпсона и Сиите- ри.(с тем, чтобы определить скорость ароматизации, в соответствии с которым определяют высвобождение Hjf из А-(1р 2/i - Н) андростен-3,17- ю -диона. Все стадии инкубации осущест- вляли в водяной бане при встряхивании и на воздухе в буфере 10 мм фосфата калия, рН 7,5, который содержал 100 мм КС1, 1 мМ ЭДК и 1 мМ дитио- 15 трейтола.

Эксперименты проводили в 1 мл объема инкубации, содержащем 50 нМ 4-(Н) андростендиона, различные конВ оральных испытаниях in vivo новые соединения были очень эффективными, что являлось следствием

центрации ингибиторов, 100 мМ N АДРН 20 его уникальной стойкости относитель- и 0,05 мг микросомальных протеинов. но апатического обмена веществ в то Через 15 мин инкубации реакцию прекращали при помощи добавления хлороформа (5 мл). После центрифугирования

время, как соединение 4-ОН-А оказывалось неэффективным.

Острая токсичность () предлаОстрая токсичность () предласо скоростью 1500 g в течение 5 мин 25 гаемых соединений, при применении к отдельные порции (0,5 мл) извлекали из водной фазы с целью определения концентрации образовавшейся HjO.

Концентрацию каждого соединения, необходимую для уменьшения ингиби- 30 руемой ароматазы на 50% (ИКд,), определяли при помощи построения графика в координатах ингибирования в процентах и log концентрации ингибитора. Относительную активность кгшдого 35 соединения к А ОН-А вычисляли в соответствии с соотношением:

мьш1ам, определенная в результате разового применения возрастающих доз и измеренная к,ч седьмой день пос ле применения, оказалась пренебрежимо малой. Например, значение ЛД для предлагаемых соединений F СЕ 24304 и F СЕ 25027 вьшё, чем 800 мг/кг при оральном применении на мьплах.

Формула изобретени 1. Способ получения замещенных

:андррста-1,4-диен-З,17-дионов общей формулы

ИК. для 4 ОН-А

50

ИКд испытываемого соединения

где R - водород или С -С -алкил, отличающийся тем, что осуществляют дегидрогенизацию соединения общей формулы

О

Б. Ингибирование ароматазы в живом организме (на крысах) (in vivo).

Взрослых самок крысы дважды обра- 45 батывали подкожным способом при помощи 100 м.е. гонаДотропного гормона сыворотки беременных лошадей (ГСБЛ) с интервалом в 4 дня с тем, чтобы увеличить активность ароматазы яич- 50 НИКОВ в соответствии с процедурой, описанно1 А.М.Г.Броди и дро, Stero- ids. . .

Через 3 дня после второй обработки

при помощи ГСБЛ группам по 6 животных 55 где RI имеет указанные значения, в каждой давали стоматическим спосо- с помощью агента дегидрогенизации бом растворитель (0,5% метосел) или в органическом растворителе при тем- ингибитор в концентрации 30 мг/кг. Животных усыпляли спустя 24 ч, микперату1Е е кипения с обратным холодильником .

росомы извлекали из яичников и нх активность ароматазы определяли.с использованием приема, аналогичного тому, что был описан в А.

Инкубацию осуществляли в течение 30 мин в 2 мл объема инкубации, содержащем 0,1 мг микросомальных протеинов, 100 нМ 4-() андростендиона и 100 мМ N АДРН. Ингибирование в процентах активности контролируемой .ароматазы рассчитывали на основе полученных данных согласно таблице.

Новые соединения под кодом F СЕ 24304 и FCE 25027 являются очен сильными ингибиторами ароматазы.

В оральных испытаниях in vivo новые соединения были очень эффективными, что являлось следствием

его уникальной стойкости относитель- но апатического обмена веществ в то

время, как соединение 4-ОН-А оказывалось неэффективным.

Острая токсичность () предлагаемых соединений, при применении к

гаемых соединений, при применении к

мьш1ам, определенная в результате разового применения возрастающих доз и измеренная к,ч седьмой день после применения, оказалась пренебрежимо малой. Например, значение ЛД для предлагаемых соединений F СЕ 24304 и F СЕ 25027 вьшё, чем 800 мг/кг при оральном применении на мьплах.

Формула изобретения. 1. Способ получения замещенных

ндррста-1,4-диен-З,17-дионов общей формулы

СНзР Vjf

где R - водород или С -С -алкил, отличающийся тем, что осуществляют дегидрогенизацию соединения общей формулы

О

где RI имеет указанные значения, с помощью агента дегидрогенизации в органическом растворителе при те

перату1Е е кипения с обратным холодильником .

Соединение

1442077

В лабораторных условиях (in vitro)

ИК нм

Ко

4-Окси-андрост-4-ен-3,17-дион (4-ОН-А)4Д

li -Тестололактон

(тестолактон)

б Метиленандрост-4-ен- -3,17-дион

Андроста-1,4-диен-З,17-дион

6-Мет1шенандрост-1,4- -диeн-3 , 1 7-дион (F СЕ;24304)

1 -Метил-6-метиленандрос

,4-диен-З, 17-дион

(F СЕ 25027)

В живом организме (in vivo)

Ингибирование ароматаэы, %, в дозе 30 мг/кг через рот

(1,00) по определению

Неактивный

(0,005)

Неактивный

(0,59)

Неактивный

1(0,39)

37

(1,13)

81

(1,52)