Способ получения производных 4-замещенного андростендиона, или их фармацевтически приемлемых солей Советский патент 1990 года по МПК C07J1/00 

Ч)

ХрУNH,

Изобретение относится к производным стероидов, в частности к получению производных 4-замещенного андростендиона ф-лы @ где ( @ ) означает, что (X) и (Y) независимо означают ординарную связь или двойную связь

или их формацевтически приемлемых солей, обладающих ценными фармакологическими свойствами. Цель - разработка способа получения более активных соединений указанного класса. Получение ведут восстановлением соответствующего 4-азидоандростендиона, получая соединение ф-лы 1 и, если необходимо, соединение ф-лы I, где (X) - ординарная связь, а (Y) - двойная связь, подвергают восстановлению, получая соответствующее соединение ф-лы I, где (X) и (Y) - оба ординарная связь, и, если необходимо, соединение ф-лы I, где (X) - ординарная связь, подвергают окислению, получая соответствующее соединение ф-лы I, где (X) двойная связь, если необходимо, полученные соединения ф-лы I подвергают солеобразованию. 1 табл.

Изобретение относится к способу получения новых производных 4-замещенного андростендиона, формулы

О

где - - - и (X) и (Y) независимо означают ординарную или двойную связь, или их приемлемых для фармацевтики солей, обладающих ценными фармакологическими свойствами.

Цель изобретения - получение новых производных андростендиона, обладающих преимуществами в сравнении с известными, например А -тесголо- лактоном..

3

с

Пример 1. 4-Азидоандрост-4- ен-3,1 7-дион (Формула (II), где (X)1 (Y) - ординарная связь).

К перемешиваемому раствору, сое- тоящему из J,0 г 4-метансульфоцилок- сиандрост-4-ен-З,17-диона в 5 мл диметилформамида, добавляют 220 мг растертого в порошок азида натрия, растворенного в 3 мл воды. Получив- Иуюся смесь нагревают при 60°С в те- .чение 1 ч, охлаждают, приливают к 250 мл холодной воды, и экстрагируют ртилацетатом ( мл). Перемешанные Экстракты промывают насыщенным вод- раствором NaCl, сушат над Подвергают вакуум-вьшарке, чтобы поручить остаток, который очищают экспресс-хроматографией на нейтральном А120$. Элюирование смесью н-гексан: Простой диэтиловый эфир дает 0,52 г соединения, т.пл. 142-14J3 С.

УФ (95% EtOH),VMaKC 284 нм, 8 « 9,844.

ИК (Nujol): Хмакс - 2100, 1730, 4670, 1590 см-1 .

ЯМР (CDC13 + DM CO), 8 : 0,91 (ЗН s) s 1,21 (ЗН, s), 3,10 (lH,s) .

Пример 2. 4-Азидоандрост- -4-ен-3,17 дион (формула (II), где (X) (Y) - ординарная связь).

К переметиваемоу раствору из 1,5 |4,5-эпоксиандроста-3,17 диона в 26 м диметилсульфоксида и 0,35 мл концентрированной серной кислоты добавляют 5,2 г порошкообразного азида натрия. Смесь нагревают при 40°С в течение 40 мин, охлаждают, приливают к 250 мл ледяной воды и экстрагируют этилаце- татом ( мл). Перемешанные экст- ракты обрабатывают. Получают 115 г соединения, т.пл. 142-143°С.

Пример 3. 4-Азидоандрост-4- -ен-3,17-дион (формула (II), где (X) (Y) - ординарная связь).

К перемешиваемому раствору из 1,1 бромоандрост-4-ен-З,17-диона в 57,4 мп диметилформамида добавляют 0,250 г азида натрия. Получающуюся смесь нагревают при 30-35°С в течение 72 ч, охлаждают и обрабатывают. Получают 0,467 г соединения, т.пл. (МеОН) 143-144°С (разл.).

W - +237° (С 1, СНС1,). УФ (95% ШШ) : мо,кс 284 нм, .Ј 10,495,1

Пример 4. 4-Азидоандрост- -1,4,6-триен-З,17-дион (формула (II

,

0

5

где R - N,, R 1 R Н, (X) (X) - двойная связь).

К перемешиваемому раствору из 0,5 г 6-бром- 7-ацетоксиандрост-1 ,4- -диен-3,17-диона в 30 мл диметилформамида и 1,2 мл воды добавляют 0,11 г азида натрия. Реакционную смесь нагревают при 100°С в течение 45 мин, охлаждают, приливают к 500 мл ледяной воды и экстрагируют этилацетатом. Перемешанные экстракты промывают водой, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают в вакууме, чтобы получить остаток, который очищают с помощью капиллярной хроматографии на силикагеле. Элюирование смесью н-гексан: этилацетат в соотношении 30-70 дает 0,28 г соединения, т.пл. J23-125°C (разл.). ЕеОу +155° (С 0,5,СНС1Э).

ИК (Nujol): MqKC 2120, 1740, 1650, 1630, 1605, 1575 см-1.

ЯМР(СВС1,),5 :0,92 (3H,s), 1,18 (3H,s); 6,22 (lH,dd)i 6,26 (lH,d)J 6,66 (lH,dd); 7,29(lH,d).

Поступая аналогичным образом получают соединение и из 6Й, 7р6-дибром- tандрост-1,4-диен-З,17-диона.

. Пример 5. 4 Азидоандрост-1,4- диен-3,17-дион (формула .(II), где R N4, R, R Н, (X) - двойная связь, (Y) - ординарная связь).

Соединение получают из 4-метан- сульфонил-оксиандрост-1,4-диен-З,17- -диона и азида натрия по процедуре примера 1.

По другому варианту соединение получают из 4,5-эпоксиандрост-1-ен- -3,17-диона и азида натрия, следуя примеру 4, т.пл.144-146°С (разл.).

УФ (95% EtIH): Макс 239 нм, Ј 15,945, Ънаи 303 нм, б . 4,490.

ИК (Nujol):#MaKc 2110, 1730, 1650, 1630, 1595 .

ЯМР (CDC13X : 0,93 (ЗН, s); 1,25 (3H,s); 3S15 (lH,m); 6,27 (1H,d); 7,08 (lH,d).

Пример 6. 4-Аминоандрост- -4-ен-3,17-дион (формала (I), где (X) (Y) - ординарная связь).

К суспензии, состоящей из 3,83 г ,4-азидоандрост-4-ен-3,17-диона в 600 мл свежедистиллированного безводного метанола, добавляют 9 мл пропан-1,3-дитиола и 12 мл триэтил- амина. Получившуюся желтую смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 7 ч. приливают в воду, повышают рН до 2, добавляя 1 н, водный раствор НС1, промывают простым диэтиловым эфиром. Водную фазу нейтрализуют 2 н.водным раствором NaOH, получившийся осадок отфильтровывают, сушат и кристаллизуют из этилацетата. Получают 2,60 г соединения, т.пл.186-188°С.

tcGj +1670 (С 1, СНСЬ).

УФ (95% EtOH):,, 294 нм, е 7,354. ,

ЯМР (CDC1,),Ј : 0,93 (3H,s)J 1,20 (2H,s); 290 (2H,m).

Используя методику примера 6 получены следующие соединения:

4-аминоандрост 4,6-диен-З, 1 7-дион- (1 ,R NHi} R,, (X) - ординар- ная связь, (Y) - двойная связь), в виде твердого вещества желтого цвета т.пл. 148-150°С (разл.).

Мв + 199, Г (С 1, СНС13).

УФ (95% EtOH): макс 347 нм, 6 12,395.

ЯМР (CDC1,), : 0,87 (3H,s); 1,00 (3H,s); 4,46 (2H,ds), 6,01 (IH.dd); 6,40 (IH.dd);

4-амин6андрост-1,4-диен 3, 1 7-дион с т.пл. 162-9°С.

ИК (КВг) 3460,3370, 1735, 1665, 1620, 1580 см-1 .

УФ (95% 3tOH) : 1макс 226, Ј 15,509, 332, 3,293.

ЯМР (CDC1,), 8 : 0,94 (ЗН,с); 1,23 (ЗН,с);3,65 (2Н,с) 6,32 (lH,d)i ,7,10 (IH.d);

4-аминоандрост-1,4,6-триен-З,17- цион с т.пл.206-8°С.

Ж (KBr):0MqitC 3460, 3380, 1730, 1645, 1620, 1560 .

ЯМР (CDClj),S: 1,00 (ЗН,с), 1,19 (ЗН.с); 4,00 (ЗН,с) 5,93 (1Н,дд); 6,33 (1Н,д); 6,52 (1Н,дд); 7,10 (1Н,

,Д),

Пример 7. 4-Аминоандрост-4- -ен-3,17-дион (формула (I), где (Х) (Y) - простая связь).

К перемешанному раствору 0,45 г 4-аминоандрост-4,6-диен-З,17-пиона в 20 мл простого диэтилового эфира и 40 мл жидкого аммиака небольшими порциями добавляют 0,28 г металлического лития. Полученную реакционную смесь голубого цвета перемешивают дополнительно в течение 30 мин, гасят абсолютным этиловым спиртом до исчезновения голубого цвета и дают достичь комнатной температуры. Полученный оЬадок растворяют в воде, экстрагируют простым днэтиловым эфиром и очищают. Получают 0,280 г соединения, имеющего т.пл.185-187°С.

Пример 8. 4-Аминоандрост- -1,4,6-триен-З,17-дион (формула (I), где (X) (Y) двойная связь) .

Раствор 0,400 г 4-аминоандрост- -4,6-диен-З,17-диона в 25 мл обезвоженного бензола обрабатывают 0,400 г1

2,З-дихлор-5,6-дициано-1,4-бензохи- | ноина и нагревают при температуре дефлегмации. Реакционной смеси дают

5 отстояться при 80 С в течение 20 ч. затем охлаждают до комнатной температуры, Фильтруют и твердую Фракцию промывают этилацетатом.

Отобранные органические фазы про0 мывают 5%-ным раствором NaHCOj, насыщенным водным раствором NaCl и затем растворитель удаляют при пониженном давлении. Сырой продукт очи- щают хроматографически на силикагеле,

5

используя смесь этилацетата: метанол (95:5), чтобы получить 0,180 г чистого соединения.

ЯМР (CDC1,),Ј : 1,00 (ЗН,С); 1,19 (ЗН,С); 4,00 (ЗН,С); 5,93 (1Н,дд); 0 6,33 (1Н,д); 7,10(1Н,д).

ИК (KBr):V,v,ouc 3460, 3380, 1730, 1645, 1620, 1560 см-1.

Пример 9. 4-Аминоандрост- -4,6-диен-З,17-дионгидрохлорид (Фор- 5 мула (1),где (X) - простая связь, (Y) - двойная связь, как гидрохло- рид) .

Раствор 0,5 г 4-аминоандрост-4,6- -диен-3,17-диона в 20 мл этанола об- 0 вабатывают 16,7 мл 01 н. водным раствором НС1.Затем желтый раствор обрабатывают 0,02 г углерода, фильтруют и спирт дистиллируют при пониженном давлении. Получившийся водный 5 раствор лиофилизуют, чтобы получить 0,54 г сухого соединения в виде порошка слегка желтоватого цвета.

По аналогичной проиедуре начиная с других 4-аминовых соединений (приме- 0 Ры 7 и 8) получают соответствующие гидрохлориды.

Пример 10. Таблетки, каждая весом 0,150 г, содержащая 25 мг активных веществ, выпускают со следующим составом (для 10000 таблеток),г:

4-Аминоандрост-4,6-диен-3,17-дион250

Лактоза800

Кукурузный крахмал 415

5

Тальковый порошок 30 Стеарат магния5

Смешивают 4-аминоандрост-4,6-диен- -3,17-дион, лактозу и половину кукурузного крахмала. Смесь затем пропускают через сито с размером 0,5 мм меш. Кукурузный крахмал (10 г) суспендируют в теплой воде (90 г), получившуюся пасту используют для гра- , нулирования порошка. Гранулят с унта т, 1 пропускают через сито с размером 1,4 мм меш, затем добавляют оставшееся количество крахмала, талька и стеарата магния, тшательно перемешивают и превраптают в таблетки.

Пример 11. Готовят капсулы каждая весом 0,200 г, содержашие 20 мг активного вешеетва. Состав- 500 капсул, г: 4-Ацетиламино- андрост-4,6-диен- -3,17-дион10

Лактоза80

Кукурузный крахмал 5 Стеарат магния 5 Эти формы выпуска помещают в твердые желатиновые капсулы, состоящие из двух частей, доза в каждой капсуле составляет 0,200 г.

Соединения изобретения представ- ляют собой ингибиторы биотрансформации эндогенных андрогенов, т.е. стероидные ингибиторы ароматазы.

Ароматаза (эстрогенная синтета- эа) - фермент, отвечающий за последнюю ступень биосинтеза эстрогенов, превращение андрогенов в эстрогены, Например андростендиона и тестосье- рона в эстрон и эстрадиол соответственно. Ароматаза - микросоматиче- екий комплекс Фермента Р450, который действует на андрогенный субстрат. Поскольку продукты действия ароматазы, т.е. эстрогены, ответствены за рост опухолей, вызываемых действием гормонов , то соединения - ингибиторы ароматазы изобретения можного использовать для лечений этих опухолей, Учи50

тывая сказанное соединение изобретения можно использовать в качестве ильтернативы удалению эндокринных желез, например овариэктомии, гипо- сЬизэктомии или андренаэлектомии при лечении уже развившихся опухолей, ин- ее Аудируемых гормонами, например, молочной железы, поджелудочной железы, рака эндометрия и яичников, в особенности рака молочной железы. Ингибито15741788

ры ароматазы Формулы (I) можно такяе использовать для контроля репродуктив- ности. Снижение уровней экстрогенов in vivo приводит к подавлению гонадной активности и недостаточному развитию матки, ингибиторы ароматазы могут одновременно быть ингибиторами имплантации. Другая область

(О применения соединений изобретения за- лючается в лечении гипертрофии про- статы или гиперплазии, относящейся к избыточному продуцированию эстрогена и к сдвигу отношения эстроген/ан15 дроген ч более высоким показателям. Соединения изобретения, вызывающие уменьшение образования экстрадиола, можно использовать для лечения нарушений фертильности у мужчин (Drugs

2j 2S.263, 1984). Известно, что эстрадиол может регулировать сперматогенез, а также может непрямо подавлять сперматогенез, препятствуя клеткам Лейдига продуцировать тестостерон в

25 большом количестве, реагируя на действие ЛГ. Соответственно уменьшенное образование эстрадиола, достигнутое путем соединений изобретения, приводит как к увеличению количества

30 сперматозоидов, так и повышению Фертильности у больных, страдающих бесплодием из-за олигозооспермии. Степень подавления ароматазы соединениями изобретения определяют, например,

зс как in vitro (ароматаза плаценты человека) , следуя следующему способу испытаний,,

При подавлении ароматазы Фермент- . ную систему выделяют из микросома40 тической Фракиии ткани плаценты человека в соответствии со стандартным способом. Использовали статью Thompson и Siiter (Thompson E.A. и Siiter P.К., I.Biol. Chem., 249, 5364,

45 1974), где определяют степень ароматизации, как установлено при высвобождении из , 2fb- 3Н)андро- стен-3,17-диона. Все случаи инкубирования в перемешиваемой водяной бане при 37°С в воздушной атмосфере в буферном растворе 10 N фосфата калия при рН 7,5, в котором 100 мМ КС1 ЭДА и 1 мМ дитиотреитола. Эти эксперименты проводят в инкубационном объеме в 1 мл, содержащем 50 нМ 4-(Н) андростендиона, ингибиторы в различных концентрациях, 100 мМ НАДО и 0,05 мг микросоматических белков. После инкубирования в течение 15 мин реакцию

прекращают путем добавления хлороформа (5 мл). После центрифугирования при 1500 об. в течение 5 мин удаляют аликвоты (0,5 мл) из водной Фазы для того, чтобы определить количество образовавшегося Р20. Концентрацию каждого соединения, необходимого для снижения уровня контрольной арома- тазы на 50% (ИК50), определяют по графику процента подавления от 1 до концентрации ингибитора. Так, в частности, четыре соединения по изобретению испытаны под кодовыми номерами FGE 24210, FGE 24566, FGE 24661 и FGF 24928 по описанной выше процедуре с известным ингибитором ароматазы Д - тестололактоном (Cancer Research Suppe, 42, 3327S - 3333S, 1982).

Результаты ингибирования аромата- зы плаценты человека in vitro приведены в таблице.

ИК50 (относительная активность in vitro)}нМ

& -Тестололактон 4-Аминоандрост-4,6-дие -3,17-дион (FGE 24210) 4-Аминоандрост-4-ен- -3,17-дион (FGE 24566) 4-Аминоандрост-1,4-дие -3,17-дион (FGE 24661) 4-Аминоандрост-1,4,6- -триен-3,17-дион (FGE 24928)

Данные, приведенные в таблице, указывают на то, что соединения изобретения являются очень сильными ингибиторами ароматазы in vitro. Ho- (вые соединения, как установили, приблизительно в 55 раз действуют сильнее, чем Л1 -тестололактон.

Учитывая высокий терапевтический показатель этих соединений, они достаточно безопасны для использования в медицине. Например, острая токсичность (ЛД5б) соединений изобретения для мыши, определенная одним введением увеличивающихся доз и измерен- ная на седьмой день после пероралъ - |Ного введения, как оказывается, весьма незначительная

В испытуемых дозах соединения по изобретению не проявляют признаков токсичности и их можно отнести к категории малотоксичньгх.

Формула изобретения

Способ получения производных 4-замешенного андростендиона общей

формулы

о

где символ - - - указывает на то,что (X) и (Y) независимо означают ординарную связь или двойную связь, или их фармацевтически приемлемых солей, отличающийся тем, что соединение формулы

О

(II)

- э

где (X) и TY) имеют указанные значения,

подвергают восстановлению, получая соединение формулы I и, если необходимо , соединение формулы (I), где (X) - ординарная связь, a (Y) - двойная связь, подвергают восстановлению, получая соответствующее соединение Формулы (I), где (X) и (Y) - оба ординарная связь, и, если необходимо, соединение формулы (I), где (X) - ординарная связь, подвергают окислению, получая соответствующее соединение Формулы (I), где (X) - двойная связь, если необходимо, полученные соединения формулы (I), подвергают солеобразованию.