Способ получения стероидов или их фармацевтически приемлемых солей Советский патент 1990 года по МПК C07J1/00 

Изобретение относятся к способу получения стероидов, а именно 6-заме- щенных андроста-1,4-диен-3,17 дионов, являющихся ингибиторами ароматазы, точнее изобретение касается способа получения стероидов Формулы

и

ГЦ /IJ

т

где R - группа -N3 или группа -NHe, или их Фармацевтически приемлемых солей, обладающих ценными фармакологи - ческими свойствами.

Цель изобретения - получение производных стероидов, обладающих преимуществами в фармакологическом отношении перед известными структурными аналогами подобного действия.

Солями согласно изобретению являются соли соединений формулы (I) , в которой R представляет собой группу -N, как определено выше, с фармацевтически приемлемыми кислотами, такиЗЭ

сл

зэ

см

ми,, как неорганические (соляная, серная или фосфорная), органические (лимонная, фумаровая, малеиновая, яблочная, аскорбиновая, янтарная, винная, бензойная, уксусная, фенилуксус- ная, циклогексйлуксусная, 3-циклогек- силпролионовая, ме апсульфоновая,этан- сулъйоновая, бенчосульфоновая, р-толуолсульфоновая, р-нитробензолсулъйю- }Q ют, перемешивая при этой температуре новая),

Четвертичные аммониевые соли и гидроокиси соединений Формулы (ij,

где R - М ч , охватываются изобрете- 15

(ЗН, S), 4,31 ОН, ddd), 6,44 (1HS dd), 6,26 (1Н, dd), 7,02 (1Н, d) .

Пример 3. К раствору тансульсЬонилоксиандроста-1, 4-диен- 3,17-диона (3,0 г) в 150 мл диметил- формамида добавляют 0,67 г азида натрия, растворенного в 8,5 мл воды; смесь нагревают до 100°С и выдержива Ч

R,

90 мин.

При внешнем охлаждении всю смесь выливают в 600 мл -воды и экстрагируют четырьмя порциями (J50 мл) этил- ацетата. Объединенные экстракты промывают насыщенным раствором хлористого натрия для удаления остатка диме- тилформамида и высушивают над безводным сульфатом натрия. Затем растворитель удаляют в вакууме и получают сырой продукт, которьй очищают хроматографией на AloOj, (нейтральной активности) , используя в качестве элюента смесь этилацетат:н-гексан 40:60. Получают 1,95 г чистого боС-азодоанд- роста-1,4-3,17-диона; т.пл. 167- 169°С; М„- 92,81 (с 1 , СНС13).

нием и представляют собой, например, четвертичный алкйл (метил, этил).

Следующие примеры иллюстрируют изобретение,

Пример 1. Раствор 10 г анд- роста-1,4-диен-З,17-диона в 95 мл че- тыреххлористого углерода кипятят с 6,4 г N-бромсукцинимида и 0,4 г перекиси бензолила в течение 75 мин. После фильтрации сукцинимида фильтрат охлаждают во льду до завершения кристаллизации. Затем смесь фильтруют и сушат, получая 998 г сырого 6-бром(ЗН, S), 4,31 ОН, ddd), 6,44 (1HS dd), 6,26 (1Н, dd), 7,02 (1Н, d) .

Пример 3. К раствору тансульсЬонилоксиандроста-1, 4-диен- 3,17-диона (3,0 г) в 150 мл диметил- формамида добавляют 0,67 г азида натрия, растворенного в 8,5 мл воды; смесь нагревают до 100°С и выдерживают, перемешивая при этой температуре

90 мин.

При внешнем охлаждении всю смесь выливают в 600 мл -воды и экстрагируют четырьмя порциями (J50 мл) этил- ацетата. Объединенные экстракты промывают насыщенным раствором хлористого натрия для удаления остатка диме- тилформамида и высушивают над безводным сульфатом натрия. Затем растворитель удаляют в вакууме и получают сырой продукт, которьй очищают хроматографией на AloOj, (нейтральной активности) , используя в качестве элюента смесь этилацетат:н-гексан 40:60. Получают 1,95 г чистого боС-азодоанд- роста-1,4-3,17-диона; т.пл. 167- 169°С; М„- 92,81 (с 1 , СНС13).

Пример 4.К перемешиваемому

Изобретение относится к получению стероидов ф-лы I @ , где R - группа - N₃ или группа -NH₂ или их фармацевтически приемлемых солей, обладающих фармакологическими свойствами. Цель - выявление новых стероидов, обладающих указанными свойствами. Получение ведут реакцией соединения ф-лы I, где R - галоген или C₁-C₂-алкилсульфонилокси с соединением ф-лы M-N₃, где M - катион щелочного металла, получая соединение ф-лы I, где R - группа-N₃

и если необходимо восстанавливают соединение ф-лы I, где R-группа - N₃, получая соединение ф-лы I, где R-группа - NH₂, и, если необходимо, переводят соединение ф-лы I в его фармацевтически приемлемую соль. 1 табл.

андроста-I,4-диен 3,17 диона, пригод- 30 Раствору 6с -азидоандроста-1 ,4-диен- ного для следующей стадии. Образец для анализа кристаллизуют из смеси диэтиловый эфир /н-гексан; т.пл. 188- 190°С| (oOif + 116; У.Ф. (95% Et ОН)

Я (Чакс 250 НМ. 35

Пример 2. К раствору 6 Ъ-бром- андроста-1,4-диен-З,17-диона (5,0 г) в 250 мл диметилформамида добавляют

3,- 7-диона (0,6 г) в тетрагидрофу- ране (3 мл) добавляют трифенилфосфин (0,79 г).

После окончания выделения азота реакционную смесь разбавляют водой (1 мл) и кипятят 24 ч. Охлажденную реакционную смесь выливают в 1 н. водный раствор соляной кислоты (50 мл) и промывают метиленхлоридом

1,15 г порошкообразного азида натрия,

растворенного в 4 мл воды, смесь на- 0 Р водного слоя доводят до 10 добав-.

лением водного раствора NaOH и тщательно экстрагируют метиленхлоридом. Органическую фазу высушивают над CaClo. и выпаривают в вакууме, полу- 45 чая желтую пену (0,44 г), которую экстрагируют диэтиловым эсЬиром (30 мл) и обрабатывают газообразным НС1.

Образующийся осадок отфильтровыгревают до 100°С и выдерживают, перемешивая, при этой температуре в течение 120 мин. Затем всю смесь выливают в 1 л воды и экстрагируют четырьмя порциями (200 мл) этилацетата. Объединенные экстракты промывают насыщенным водным раствором хлористого натрия и сушат. Растворитель удаляют в вакууме, получая сьфой продукт,которьй очищают хроматографией на гп вают, высушивают и разделяют на час(нейтральной активности), применяя в качестве элюента смесь этилацетат/н- гексан 40;60, Получают 3,4 г чистого 6оЈ азидоандроста ,4-диен-З, 1 7-диона Образец для анализа кристаллизуют из

т.пл. 168-170 С. в . 93,2° (с 1, CHClj ); УФ (95% Et ОН) Я макс 244; Ј 17,420; ЯмР (CDC13) 3 : 0,98 (ЗН, S), 1,3

метанола;

(ЮГ +

55

ти между метиленхлоридом и 2 н. водным раствором NaOH.

Органический слой отделяют, высушивают над CaClij и -выпаривают в вакууме, получая 6 -аминоандроста-1,4- диен-З, 17-диона (0,40 г); т.пл. 186- 19ГС; ЯмР (CDCJj,) S : 0,93 (ЗН, S) , 1S25 (ЗН, S), 3,71 (1Н, ddd), 6,27 OH, dd), 6,39 (IH, dd), 7,01 (IH.d)

Раствору 6с -азидоандроста-1 ,4-диен-

3,- 7-диона (0,6 г) в тетрагидрофу- ране (3 мл) добавляют трифенилфосфин (0,79 г).

После окончания выделения азота реакционную смесь разбавляют водой (1 мл) и кипятят 24 ч. Охлажденную реакционную смесь выливают в 1 н. водный раствор соляной кислоты (50 мл) и промывают метиленхлоридом.

вают, высушивают и разделяют на час

ти между метиленхлоридом и 2 н. водным раствором NaOH.

Органический слой отделяют, высушивают над CaClij и -выпаривают в вакууме, получая 6 -аминоандроста-1,4- диен-З, 17-диона (0,40 г); т.пл. 186- 19ГС; ЯмР (CDCJj,) S : 0,93 (ЗН, S) , 1S25 (ЗН, S), 3,71 (1Н, ddd), 6,27 OH, dd), 6,39 (IH, dd), 7,01 (IH.d).

515

Ж (КВг) см 1 : 3450, 3380, 3000, 2940, 2860, 1730, 1655, 1615, 1600.

Пример 5. Раствор 0,65 г 6оС-аминоандроста-1,4-диен-3,1 7-диона в 30 мл этанола обрабатывают 21,7 мл 0,1 н. водного раствора- НС1. Желтый раствор обесцвечивается, затем его фильтруют и удаляют спирт при пониженном давлении. Образующийся водный раствор лиофилизируют 0,7 г.сухого 6 й-аминоандроста-1,4-диен-3,17-диона гидрохлорида в виде светло-желтого порошка.

ИК (КВг) 3460, 3380, 1730, 1695 .

Соединения по изобретению обладают способностью ингибировать аромата зу.

Ароматаза (эстроген-синтетаза) представляет собой фермент, ответственный за последнюю стадию биосинтеза эстрогенов. Как известно, превращение андрогенов в эстрогены-(например, андростендиона и тестостерона в эстрон и эстрадиол) происходит при посредстве ароматазы микросомного фермента Р450, которая действует на субстрат андрогена.

Продукты действия ароматаэы, т.е. эстрогены, помимо того, что они существенны для репродукции, могут быть также ответственны за рост гормон-зависимых опухолей.

С учетом изложенного ингибиторы ароматазы по изобретению могут найти применение для воздействия на растущие гормон-зависимые опухоли, в особенности опухоли груди, яичника, матки и поджелудочной железы. Благодаря своим свойствам ингибировать аромата- зу соединения могут также найти при менение для лечения гиперплазии простаты, при которой происходит доброкачественный рост предстательной железы. Более того, данные соединения вызывают уменьшение образования эстра- диола и поэтому могут быть полезны при лечении нарушений мужской плодовитости.

Ингибирование ароматазы соединениями по изобретению определялось как in vitro (человеческая плацентальная ароматаза), так и in vivo (активность яичниковой ароматазы) для крыс.

I

Было найдено, что данные соединения являются особенно сильными ингибиторами ароматазы in vivo,

6566

Ингибирование ароматаэы in vitro определялось следующим образом: ферментную систему выделяли из микросомной фракции человеческой плаценталь- ной ткани по стандартной процедуре. Был использован метод Томпсона и Си- тери (Е.А.Томпсон и П.К.Ситери. T.Bi- ol.Chem 249, 5364, 1974), который

позволяет определять скорость ароматизации по измерению освобождения 3 HgO из 4 ijb, андростен-3,17- диона.

5Все образцы выдерживали во встряхиваемой водяной бане при на воздухе в 10 мМ калийно-фосфатного буфера, рН 7,5, который содержал 100 мМ КС1, 1 мМ этилендиаминтетра0 уксусной кислоты и 1 мМ дитиотрей- тола. Эксперименты проводили в 1 мл инкубационного объема, содержащего 50 нМ 4- Н/андростендиола, различные концентрации ингибиторов, 100 мкМ ни5 котинамидадениндинуклеотилфосфата и QJ05 мг микросомных протеинов. После 15 мин инкубации реакцию останавливали путем добавления хлороформа. После центрифугирования при 1500 g в тече™

0 ние 5 мин аликвотную долю (0,5 мл) удаляли из водном фазы для определения образующейся Uij0; Концентрация каждого соединения, требующаяся для снижения действия ароматазы на 50Я (ТС , определялась путем записи процента ингибирования при логарифме соответствующей концентрации ингибитора. Относительная эффективность каждого соединения к 40Н-А вычислялась

л по уравнению:

Относительная эффективность

J3H-A

ТС so испытуемого соединения Ингибирование ароматазы in vivo

5 определяли на крысах по следующей процедуре: взрослым женским особям крыс дважды вводили подкожно 100 иммунизирующих единиц сыворотки гон- адотропина (РМ SG) из беременных ко0 был с интервалом в 4 дня для того, чтобы повысить яичниковую ароматаз- ную активность согласно процедуре Броди (А.М.Х Броди и др. Steroids, 38, 693, 1981), Через три дня после

г второго введения РМ SG группам из 6 животных каждая орально давали индифферентное вещество (0,5% метоцел) или ингибитор в дозе, указанной в следующей таблице. Спустя 24 ч животных убивали, из яичников выделяли микросомы. Их ароматазнуго активность определяли по методу, подобному описанному для оценки активности in vit то.

Инкубирование проводили в течение 30 мин в 1 мл инкубационного объема, содержащего О,1 мг микросомных протеинов, 100 нМ 4-(Н) андростендиона в 100 мкМ никотинамид-аденин-динук- леотидфосфата. Вычисляли процент ин- гибирования контрольной активности ароматаэы.

Даже если in vitro соединения по изобретению могут быть только эквивалентными или менее эффективными, чем известные соединения, тем не менее они являются более эффективными ингибиторами ароматазы in vivo.

В таблице указаны примеры активности in vivo соединений по изобретению б -азидоандроста-1,4-диен-З,17- диона (код FCE 24403} и 6#-аминоанд- роста-3,4-диен-З,J7-диойа (код FCE 24968) в. сравнении с хорошо известными ингибиторами ароматазы 4-оксианд- роста-4-ен-З,17-дионом (4-ОН-А), Dr-гомо-Л 7а-оксаандроста-1 ,4-диен- 3,17-дионом (тестолактоном) и андрос та-1 ,4-диен-З, 7-идионом.

Хотя соединения FCE 24403 и FCE 24968 менее активны in vitro, чем, например 4-ОН-А, они весьма эффективны при применении in vivo орально в дозе, например, JO мг/кг, вследствие необычной устойчивости к печеночному метаболизу, тогда как 4-ОН-А неэффективен даже в дозе в 30 раз большей (100 мг/кг), при этом они обладают низкой токсичностью.

Основным недостатком при терапевтическом использовании 4-ОН-А в качестве противоопухолевого агента для женщин является необходимость парэн- терального применения, так как соединение сильно связывается после оральИнгибирование яичниковой ароматазы крыс in vivo

ного применения (Р.С.Кумбес и др. Lancet II, 1237, 1984),

Применение ингибиторов ароматазы, описанных выше, позволит значительно улучшить оральную терапию эстрогенза- висимых болезней.

Формула изобретения

Способ получения стероидов o6nieft формулы I

где R - группа -N3, или группа -NHZ, или их фармацевтически приемлемых солей, отличающийся тем, что соединение формулы II

25

9

- 30

где L - галоген или С -Се алкилсульфонилокси группа,

подвергают взаимодействую с соедине- нием Формулы III

М - N5,

где М - катион щелочного металла, получая таким образом соединение Формулы I, где R - группа -N5, и, если необходимо, восстанавливают соединение формулы I, где R - группа , получая таким образом соединение формулы I, где R - группа -NHU, и, если необходимо, переводят соединение формулы I в его фармацевтически приемлемую соль.

p 0,05j р -с 0,01; Н.З не значительно (по сравнению с группой, образованной индифферентным веществом)