Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к биологически активным химическим соединениям, конкретно к иммобилизо- ванным протеазам, которые могут быть использованы в производстве биопрепаратов, добавок к синтетическим моющим средствам, парфюмерии, ветеринарии, медицине и т.д.
Цель изобретения - повьшение качества иммобилизованного протосубти- лина.
Способ заключается g иммобилизации протосубтилина на полиэтиленоксиде с мол. массой 600-2000 кВ при соотношении носителя и фермента 1:7,5 - 1:8,5 Смесь носителя и фермента в водном растворе подвергают обработке у-лучам в-дозе 2,3-2,7 мрад.
Связанные между протосубтилином и полимерным носителем осуществляется радиохимическим воздействием в растворе. Это позволяет получать конечный продукт в виде водного раствора иммобилизованных протеаз, обладающих высокой протеолитической активностью (по казеину) до 100 ПЕ/мл, высокой термостабильностью в присутствии субстрата, способных гидроли- зовать субстрат в широком дипазоне рН, проявляя при этом высокую активность. Неспецифическое комплексо- образование между полиэтиленоксидом I и протосубтилином в водном растворе способствует иммобилизации в результате сбл ижёния реагирующих молекул в момент радиохимического взаимодействия.
Пример1.5г протосубтилина растворяют в 95 мл 0,05 М боратного буфера рН 8,4 при в течение ,30 мин. Нерастворившийся осадок отделяют центрифугированием при 7100 g в течение 30 мин. К 8 мл супернатанта добавляют 42,5 мл 10,0%-ного водного раствора полиэтиленоксида 1500. Соот ношение (весовое) протосубтилин:поли™ этиленоксид 1:8,5. Смесь фермента с носителем облучают тормозным 1е;-из- .лучением в дозе 2,5 мрад.
При этом получается продукт со следующими свойствами.
Протеолитическая активность 93,0 ПЕ/мл,
Термостабильность.
37 45 50 60 70 80
Активность, %: 34 46 71 100 49 8
5 0
5 о
5
5
0
5
Зависимость активности от рН субстрата (1% сывороточного альбумина): рН 6,0 8,2 8-,6 11,0
Активность, %: 47 66 68 100
Продукт растворим. Выход 98,OJt1,0%.
П р и м е р 2. Готовят раствор протосубтилина по методике, описанной в примере 1. К 8 мл раствора протосубтилина (супернатанта) добавляют 37,5 мл 10,0%-ного раствора полиэтиленоксида 1500. Массовое соотношение протосубтилин:полиэтиленоксид 1:7,5. Смесь облучают тормозным -излучением в дозе 2,5 мрад.
Свойства получаемого продукта.
Протолитическая активность 105,0 ПЕ/мл.
Термостабильность.
t, C::37 45 50 60 70 80
Активность, %: 34 46 71 100 49 8
Зависимость активности от рН субстрата (1% сывороточного альбумина):
рН: 6,0 .8,2 8,6 11,0
Активность, %: 47 66 78 100
Продукт растворим. Выход 98,0.± ±1,0%.
П р и м 8 р 3. Готовят раствор протосубтилина по методике, описанной в примере 1. К 8 мл раствора протосубтилина (супернатанта) добавляют 40,0 мл 10,0%-ного раствора полиэтиленоксида 1500. Смесь облучают тормозным )| -излучением в дозе 2,3 мрад.
Свойства получаемого продукта.
Протеолитическая активность 120,0 ПЕ/мл.
Термостабильность,
t,C; 37 45 50 60 70 80 Активность,%: 40 49 70 100 48 8
Зависимость активности от рН субстрата (1% сывороточного альбумина): рН: 6,0 8,2 8,6 11,0
Активность, %t 50 65 71 100
.
Продукт водорастворим. Выход 98,0± i1,0%.
Пр имер4. Готовят раствор протосубтилина по методике, описанной в примере 1. К 8 мл раствора протосубтилина (супернатанта) добавляют 40,0 МП 10,0%-ного раствора полиэтиленоксида 1500,
10
20
Смесь облучают тормозным If-излучением в-дозе 2,7 мрад.
Свойства полученного продукта. Протеолитическая активность 80 ПЕ/мл.
Термостабильность.
t, C: 37 45 50 60 70 80
, Активность.%: 40 47 67 100 50 10
Зависимость активности от рН субстрата (1 % сывороточного альбумина).
рН 6,0 8,2 8,6 11,0 15
Активность,%: 53 69 70 100 Продукт водорастворим. Выход 98,0±
ti,o%.
П р и м е р 5. Готовят раствор про- тосубтилина по методике, описанной примере 1. К 8 мл раствора прото- убтилина (супернатанта) добавляют 40,0 мл 10,0%-ного раствора полиэтиеноксида 600. Смесь облучают тормозным J-излучением в дозе 2,5 мрад.
Свойства получаемого продукта.
Протеолитическая активность 5,0 ПЕ/мл. . Термостабильность.
t,C: 37 45 50 60 70 80 Активность,%: 38 51 70 100 45 11
Зависимость активности от рН субтрата (1% сывороточного альбумина):
рН- 6,0 8,2 8,6 11,0 Активность,%: 51 70 78 100
Продукт водорастворим. Выход 8,011,0%.
25
30
35
40
П р и м е р 6. Готовят раствор протосубтилйна Г10Х по методике, описанной в примере 1. К 8 мл раство- 45 дозой 2,3-2,7 мрад.
Способ получения 35 протосубтилйна, вкл действие раствора ф рата с органическим личающийся лью повьшения качес дукта, в качестве н полиэтиленоксид с м 2000 kD, уста навлив носитель-фермент 1: следующим облучение
10
4425484
ра протосубтилйна (супернатанта) до- бавляют 40,0 мл 10,0%-ного раствора полиэтиленоксида 2000. Смесь облучают тормозным Х -излучением в дозе 2,5 мрад.
Свойства полученного продукта.
Протеолитическая активность 110,0 ПЕ/мл.
Термостабильность.
. Ч, 45 50 60 70 80 Активность,%.: 41 60 71 100 60 15
Зависимость активности от-рН субстрата (1% с шороточного альбумина): рН 6,0 8,2 8,6 11,0
Активность,%: 56 80 81 100
Продукт водорастворим. Выход 98,О± ±1,0%.
Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет получать иммобштизованныи протосубтилин с улучшенными качественными характеристиками, а именно с высокой протеоло- гической. активностью, с повышенной термостабильностью в присутствии субстрата и с расширенным рН-оптимумом активности.
Формула изобретения
дозой 2,3-2,7 мрад.
Способ получения иммобилизованного протосубтилйна, включающий взаимодействие раствора ферментного препарата с органическим носителем, о V.- личающийся тем, что, с целью повьшения качества целевого продукта, в качестве носителя используют полиэтиленоксид с мол.массой 600... 2000 kD, уста навливают соотношение носитель-фермент 1:7,5 - 1:8,5 с по- . следующим облучением смеси V-лучами
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДОРАСТВОРИМОГО ИММОБИЛИЗОВАННОГО ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА ПРОТЕАЗ | 2004 |
|
RU2270861C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДОРАСТВОРИМОГО ИММОБИЛИЗОВАННОГО ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА | 1998 |
|
RU2137835C1 |
| ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ОБЛАДАЮЩАЯ ТРОМБОЛИТИЧЕСКИМИ, ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ И ЦИТОПРОТЕКТИВНЫМИ СВОЙСТВАМИ | 2001 |
|
RU2213557C2 |
| СПОСОБ ОБРАБОТКИ КОЖЕВЕННОГО СЫРЬЯ И СЫРЬЕВЫХ ОТХОДОВ | 1992 |
|
RU2030455C1 |
| ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ОБЛАДАЮЩАЯ ПРОЛОНГИРОВАННЫМ ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНЫМ ДЕЙСТВИЕМ | 1999 |
|
RU2169565C1 |
| СПОСОБ ИММОБИЛИЗАЦИИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО ВЕЩЕСТВА (БАВ) НА НОСИТЕЛЬ (ВАРИАНТЫ) И КОНЪЮГАТ БАВ-НОСИТЕЛЬ, ПОЛУЧЕННЫЙ ДАННЫМИ СПОСОБАМИ | 2008 |
|
RU2409669C9 |
| Субстанция протеолитического фермента на основе Протосубтилина ГЗХ, иммобилизованного на хитозане, и композиция для лечения гнойно-некротических ран | 2016 |
|
RU2630668C1 |
| Способ получения иммобилизованной лакказы | 1980 |
|
SU883172A1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЫСОКОПОРИСТОЙ ПЕНОПОЛИУРЕТАНОВОЙ КОМПОЗИЦИИ С ИММОБИЛИЗОВАННЫМ ТРИПСИНОМ | 1992 |
|
RU2026685C1 |
| Способ получения конъюгированного энтеротоксина ЕSснеRIснIа coLI | 1989 |
|
SU1750690A1 |
Изобретение относится к химико- фармацевтической промышленности, а именно к биологически активным соединениям, конкретно к иммобилизованным протеазам, которые могут быть использованы в производстве биопрепаратов, добавок к синтетическим моющим средствам, парфюмерии, ветеринарии, медицине. Цель изобретения - повышение качества целевого продукта. Способ заключается в иммобилизации протосубтилина на органическом носителе. В качестве носителя используют полиэтиленоксид с мол.м. 600-2000 ки- лодальтон при соотношении носителя и фермента 1:7,5-1:8,5. Смесь носителя и фермента в водном растворе подвергают обработке у-лучами дозой 2,3- 2,7 мрад. Полученный npenapat обладает повьппенной активностью и термостабильностью и, кроме того, активен в более широком диапазоне рН. 5S (Л 4 4 rs: ел 4 00
