Штамм бактерий РSеUDомоNаS WIeRINGae продуцент экзоцеллюлярного полисахарида Советский патент 1989 года по МПК C12N1/20 C12N1/20 C12R1/38 

1

Изобретение относится к микробиологии, а именно к диагностике фитопатогенов.

Цель изобретения - получение нового штамма Pseudomonas wieringae, продуцирующего экзоцеллюлярный О-анг- тигенный полисахарид.

Штамм Pseudomonas wieringae 7923 выделен из сахарной свеклы, пораженной сосудисто-паренхиматозным заболеванием. На протяжении всего периода хранения на картофельном агаре при комнатной температуре штамм стабилен по своим основным признакам.

Штамм Pseudomonas wieringae 7923 хранится в коллекции Всесоюзного научно-исследовательского института защиты растений (ВИЗР) под регистрационным номером 2062.

Штамм ВИЗР № 2062 характеризуется следующими культурально-морфологи- ческими признаками.

10

15

20

Клетки прямые, полиморфные, палочки размером 1,0-2,9 х 0,3-0,6 мк, расположенные одиночно, парами, группами, короткими цепочками. По Граму не красятся, подвижные, с полярным расположением жгутиков. Спор не образуют.

Отношение к кислороду: азроб.

На картофельном агаре (КА) колонии диаметром до 6 мм, беловато-серые, блестящие, слабо зернистые, со слегка конусовидно приподнятьи 1 центром и слабо волнистым краем, В проходящем свете колонии полупрозрачные, уплотненный центр постепенно переходит в прозрачный как бы ямчатый край.

При росте на мясопептонном агаре (МПА) и агаризованной среде Хоттин- гера образует колонии диаметром до 4 мм, кремовато-серые, во многом сходные с ростом колоний на КА, отличающиеся менее выражеяной конусе- :

S

(Л

с:

СП

00

видностью центра и более слабой волнистостью края,

В мясопептонном бульоне (МПБ) и на среде Кинг Б растет с образованием желто-зеленого флуоресцирующего пигмента, Образование пигмента отсутствует на среде Кинг А, .

Оптимальная температура роста 26- 28 С.

Штамм ферментирует с образованием кислоты глюкозуi сахарозуi ксилозу, арабинозу, маннозу, маннит, сорбит, инозит, глицерин, Ке использует лактозу, мальтозу, рамнозу, дульцит, адонит, салицин, В качестве источника углерода может использовать также о(.-аланин, аргинин, глютамин, гисти- дкн, яблочную и винную кислоты.

Способен расти на минеральных средах. Не нуждается в витаминах и других дополнительных факторах роста

Штамм не продуцирует оксидазу и аргининдиг идрола зу, Ка талаз о-положителен ,

Лакмусовое молоко не редуцирует, не образует индола и сероводорода. Нитраты не редуцирует. Молоко послойно пептонизирует, желатин разжижГает,

При искусственном заражении штамм патогенен для огурцов, пшеницы, гороха, фасоли, суданской травы, лука, сои, кормовых бобов, столовой и кормовой свеклы, зеленых плодов груш. Бактерии вызывают реакцию сверхчувствительности на табаке.

Штамм хорошо сохраняется на КА и MIA под слоем вазелинового масла и без такового при комнатной температуре , а также в лиофильно высушенном состоянии.

Пример 1, Получение и характеристика ЭОПС,

Для получения экзоцеллюлярного 0-антигенного полисахарида (ЭОПС) штамм ВИЗР Pseudornonas wieringae К 2062 выращивают на КА при 26-28 С

в течение 20 ч, ЭОПС получают из су- пернатанта смыва клеток с твердой питательной среды. Выход ЭОПС составляет 4-5% от сухого веса клеток бактерий,

В ЭОПС обнаружено 56% углеводов, менее 1% белка и отсутствуют примеси нуклеиновых кислот, Углеводньш ком- понент состоит из галактозы, рамно- зы, глюкозамина. Препарат обладает высокой серологической активностью (с гомологичной 0-сывороткой титр в реакциях кольцепреципитации 1 : :100000, гемагглютинации 1:1280 при иммуноэлектрофорезе обладает катод-, ной подвижностью, сыворотка, полученная к экзоцеллюлярному полисахариду, агглютинирует гомологичную культуру в разведении 1:12800 - 1:51200),

Экзоцеллюлярный 0-антигенный полисахарид стабилен при длительном хранении (1 О лет),

ЭОПС используют в качестве антигена для получения сыворотки путем иммунизации им кролей.

Пример 2, Сыворотку, полученную от кролей, иммунизированных ЭОПС, используют в реакции агглютинации на стекле и в пробирках для идентификации фитопатогенов.

Данные идентификации фитопатогенов представлены в таблице.

35

40

Таким образом, сыворотки, полученные при иммунизации кролей экзоцеллю- лярным 0-антигенным полисахаридом ; Pseudomonas wieringae ВИЗР № 2062, являются специфичными для всех фитопатогенов вида Р, Syringae.

Ф о р м у л а

зобретения

45

Штамм бактерий Pseudomonas wieringae ВИЗР № 2062 - продуцент экзоцеллюлярного полисахарида.

итопатогенные псевдоонады 9 серогрупп Р. syringae

Фитопатогенные псевдо монады Р. cichorii, Р. solanacearum, Р. gladioli, Р. fluoro- violaceus

Нефитопатогенные псевдомонады 15 видов

Бактерии рода Erwinia, Bacillus, Xanthomonas, Cpryne- bacterlum, Klebsiella

277

97,8

70

10 (относятся к условно

патогенным)

101

Изобретение относится к микробиологии, а именно к диагностике фитопатогенов. Целью изобретения является получение нового штамма P.wi eringae, продуцирующего экзоцеллю- лярный 0-антигенный полисахариц. Штамм Pseudomonas wieringae депонирован в коллекции Всесоюзного научно- исследовательского института защиты растений (ВИЗР) под номером 2062. Использование экзоцеллюлярного полисахарида позволяет получать диагностические сыворотки ко всем 9 серогруп- пам Р. Syringae. 1 табл.

Составитель А.Федоров Редактор И. Киштулинец Техред М.ХоданичКорректор С.Шекмар

Заказ 7411/30

Тираж 500

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

-. - - - - - - - - - - - - -- - - .-. - - - - - - - - - - - .- - ---.-.- - - -- -----™---

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Подписное