Способ определения фагоцитарной активности нейтрофилов Советский патент 1989 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в клинической иммунологии для определения иммунного статуса организма при первичном иммунологическим исследовании больших контингентов.

Цель изобретения - повышение точности, упрощение и ускорение способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Цельную кровь центрифугируют, отделяют плазму, а к оставшимся клеткам добавляют суспензию равного количества убитой 0,6. культуры пекарских дрожжей производственной расы 75 Томская, инкубируют 15 мин при комнатной температуре, добавляют гемолитическую жидкость следующего сое-, тава: водный раствор 0,083%-ного хлорида аммония и 0,004%-ной 2-замещен - ной натриевой соли этилендиаминтетра-г уксусной кислоты (трилона Б) с доведением рН до 7,2-7,4, центрифугируют, готовят мазки, которые фиксируют, окрашивают и фагоцитирующие клетки подг считьгоают известным способом.

Пример 1. Для анализа берут 0,3 мл гепаринизованной крови (20 ед. гепарина на 1 мл крови)., центрифугируют при 200g в течение 5 мин, получившуюся плазму осторожно . .отбрасьшают в чистую пробирку для дальнейшего использования (например, для определения содержания иммуноглобулина ). Оставшийся осадок осторожно, тщательно взбалтывают, часть клток удаляют, чтобы в пробирке осталось 0,1 мл клеточной взвеси. К оставшейся клеточной взвеси добавляют 0,1 мл дрожжевых частиц в концентрации 0,6 % и выдерживают при комнатной температуре в течение 15 мин. По истечении срока инкубации клеток с дрожжами добавляют гемолитическую жидкость в обтземе 5,0 мл с целью ли- зирования эритроцитов. После наступления лизиса добавляют равный объем среды 199, центрифугируют при 200g, надосадочную жидкость сливают, а из осадка готовят мазки, которые высушивают, фиксируют метиловым спиртом и окрашивают метиловым зеленым, пирониномо В мазках подсчитывается процент фагоцитирующих нейтрофилов. Общее время постановки реакции 1 ч.

Пример 2., Донор В, 31 лет. Диагноз: практически здоров. Гепари- лизированную кровь-в количестве 0,2 мл разделяют на 2 равные части, к каж- дои из которых добавляют равное количество (0,1 мл) пекарских дрожжей в концентрации 0,6 %. Контакт при комнатной температуре, продолжительность которого для 1-й пробирки равнялась 3 мин, дли 2-й пробирки продолжительность контакта бьта 15 мин. Фагоцитоз в первом случае бьш равен 31 %, а во втором - 72 %.

Пример 3. Донор Д, 36 лет. Диагноз: практически здоров. .Гепа- ринизированную кровь, взятую в том же объеме, смешали с равным объемом дрожжей в концентрации 0,6 %„ Контакт на столе при комнатной температуре для 1-й пробирки райнялся .30 мин, для 2-й 2-15 мино Количество фагоцитирующих клеток для 1-й пробирки равнялось 100 %, а во второй - 69 .%.

Сравнение результатов определения фагоцитарной активности нейтрофилов по предложенному и известному способам представлено в таблице.

Как видно из таблицы, % фагоцитирующих нейтрофилов в обоих случаях

0

5

почти одинаковый Однако время, затраченное для постановки реакции, сократилось в 2 раза.

Предложенный способ определения фагоцитоза дрожжей по сравнению с известньмй позволяет быстро, без потери клеток исследовать фагоцитарную активность нейтрофилов. Сохранение количества клеток в первоначальном объеме дает возможность уменьшить исходный объем крови до 0,3 мл. Это позволяет использовать для анализа капиллярную кровь из пальца, что значительно облегчает и упрощает забор крови для исследования и дает возможность применить этот способ в детской практике. Кроме того, предлагаемый способ обеспечивает получение плазмы, которая может быть в дальнейшем использована для других тестов первичного иммунологического обследования (определения иммуноглобулинов). Пебольшой объем крови, не- 5 обходимый для исследования, быстрота и простота выполнения предложенного способа позволяет применять его в целях проведения перйичного иммунологического исследования в широком масштабе.

0

0

Формула изобре

тения

Способ определения фагоцитарной активности нейтрофилов, включающий добавление к клеткам цельной кро равного количества убитой нагреванием культуры пекарских дрожжей, инкубирование, приготовление мазков, их фиксацию, окраску и последующий подсчет фагоцитирующих клеток, отличающийся тем, что, с целью повьппенйя точности и упрощения способа, цельную кровь центрифугируют, отделяют плазму а к оставшимся клеткам добавляют пекарские дрожжи производственной расы 7, Томская, а инкубирование проводят в течение 4-29 мин при комнатной температуре, далее проводят лизис эритроцитов с доведением рН смеси до ,4.

Известный

Предлагаемый

56(12-74)

53(16-68)

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для определения иммунного статуса человека. .Цель изобретения - повышение точности и упрощение способа. Способ определения фагоцитоза дрожжей заключается в том, что цельную кровь центрифугируют, отделяют плазму и к оставшимся клеткам добавляют суспензию убитой 0,6%-ной культуры пекарских дрожжей (производственная раса 7, Томская), инкубируют 15 мин при комнатной температуре, добавляют гемолитическую жидкость, готовят мазки, их фиксируют, окрашивают и фагоцитирующие клетки подсчитьшают. Гемолитическая жидкость имеет следующий состав: водный раствор 0,083%-ного хлорида аммония и о , 004%-ной 2-замещен-1 ной натриевой соли этилендиаминтётра- уксусной кислоты (трилон Б) с доведением рН до 7,2-7,4. Предложенный способ позволяет увеличить число обследований, прост и может быть использован в полевых условиях, i табл. с W