Способ определения тиамина в биологических жидкостях Советский патент 1989 года по МПК G01N33/48 

1

Изобретение относится к медидане, а именно к биохимии, в частности к способам определения тиамина в биологических жидкостях и тканях.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа за счет удаления не прореагировавшего феррицианида перекисью водорода, а также добавлением в контроль феррицианида, предварительно инактивиро- ванного добавлением перекиси водорода.

Пример 1. Определение тиамина в крови.

В две пробирки вносят по 0,5 мл крови, добавляют 3 мл 0,25 НС1 и кипятят 15 мин на водяной бане,, затем добавляют по каплям 20% NagCOg до рН 5,2. В одну пробирку добавляют 1 мл дистиллированной воды (для анализа на свободный тиамин), а во вто- рую пробирку 1 мл 1%-ной суспензии

препарата кислой фосфатазы и инкубируют 15 мин при 3 7 °С с последующим кипячением в течение 10 мин. на водяной бане (для .анализа на общий тиамин) . В обе пробы добавляют по 0,5 мл 20%-ной ТХУ, кипятят 3 мин и центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин, над- осадочную жидкость встряхивают с 5 мл изобутилового спирта и эмульсию центрифугируют при 1000 об/мин в течение, 1 мин. Для определения тиамина флоу- риметрическим способом отбирают водную фазу и обрабатывают окислительной смесью для превращения тиамина в тиохром. С этой целью из каждой пробы 1,5 мл водного слоя, полученного после центрифугирования, .вносят в пробирку, содержащую 2 мп окислителя (1 часть 30% NaOH и 1 часть 1%-ного феррицианида калия), перемешивают, а затем добавляют 2 капли 3%-ной перекиси водорода для разруСО

ел

i .3.14

1шения непрореагировавшего феррициани да. В качестве контроля в каждом случае использу1от 1-,5 мл водного слоя, который смешивают с 2 .мл окислительной смеси, предварительно ин- актиэированной путем добавления в нее 2 капель 3%-ной перекиси водорода. Опытные и контрольные пробы встряхивают с 2,5 мл изобутилового спирта и центрифугируют 1 мин при 1000 об/мин. Отбирают 2 мл изобута- нола и флуориметрируют при длине волиы возбуждения 37t) нм и длине .волцы испускания 420 нм.

С

(43 - 40) X 10 мкг 90-30

- 0,5 мкг %

концентрация свободного тиамина в крови составляет 0,5 мкг %. Расчеты содержания общего тиамина производят по аналогичной формуле, при этом для приводимого примера а равняется 85, б - равняется 40 ед. по шкале прибора.

(85 - 40) X 10 мкг %

15

90 - 7,5 мкг %.

30

Изобретение относится к медицине, в частности к способам определения тиамина в биологических жидкостях. Целью изобретения является повышение чувствительности и точности способа, а также его упрощение. Сущность способа состоит в том, что инкубирование проводят в течение 15- 20 мин, водный слой отделяют центрифугированием при 1000 об/мин, в контроль добавляют феррицианид, предварительно инактивированный ,, а экстракцию изобутанолом проводят при соотношении раствор - изобутанол 1:0,7.

Расчеты содержания тиамина в крови производят по следующей формуле:

„ (а - б) X С.,.

а, - б

де С - а - б CCT а,б,концентрация .тгиамина в крови в мкг %; показания опытной пробы (43 ед. по шкале прибора); показания контрольной пробы (40 ед. по шкале прибора) ,

концентрация тиамина в стан- дартной пробе (10 мкг %)} показания стандартной прет- бы (90 ед. по шкапе прибора) ,

показания контроля к стандарту (30 ед. по шкале прибора) .

Для конкретных значений, приведенных в скобках, расчет имеет сле- ДУЮ1ЦИЙ вид:

20

Общая концентрация тиамина составляет 7,5 мкг %.

Формула изобретения

Способ определения тиамина в биологических жидкостях путем добавления к исследуемой пробе соляной кислоты, кипячения, нейтрализации, обработки кислой фосфатазой, инкубации, осаждения ТХУ, добавления изобутанола к надосадочной жидкости, феррицианида в качестве окисли30

теля, экстракции изобутанолом с последующим флуориметрированием в сравнении С контрольной пробой, о т л и- .чающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, проводят повторную экстракцию изобу- 35 танолом,. при этом предварительно непрореагировавший феррицианид удаляют обработкой смеси перекисью водорода, а в контрольную пробу дополнительно добавляют феррицианид, ин40

активированный перекисью водорода.