; . 1. V. .. .; .
, : Изобретение относится к новым хи;Мическим веществам - производным кумарина, обладающим.- антиаллергичес - кой активностью, что позволяет пред:-. положить их использование в медицине.
Цель изобретения - ббнаружеяие.. автиалпергической активности в ряду:- производных кумарина. . .. .
Пример. Карбоксиметипен- амид кумарин- 3-карбоновой кислоты (соединение la). ,
Смесь 2,10 г хлорв1Нггидрида куна- рин-3-карбоновой кислоты, 0,75 г
аминоуксусной кислоты, 50 мл толуола и 5-10 капель пиридииа нагревают при
слабом кипении 1 ч. После охлаждеиия. до комнатной температуры отделяют осадок, промывают небольшим количеством этанола, затем .водОй. Выход 1,78 г (72%). Кристаллизуют извод-. ного диметилформамида (ЛМФА). Т.плё .-.:
Найдено,Х: С 58,30; И 3,64; N 5,б7у
cjiHjO N. ;
. Вычислено,: С 58,24; Н 3.70; .N5,51.
Данные УФ-спектров дак 204, 308 ям.
CD Од
ю
10
П р н м е р ,2, -Пиридипомнд ку марин-3-карбоионой кислоты (соединение- 16)
Смесь 2.10 г хлорангидрида кума- рнн-3-карбоновой кислоты, 0,94 г 4-аминопиридина, 50 кш толуола и 5- 10 капель .пирвдина нагревают в течение 1. ч при 50-60 С. После охлаждения отделяют осадок, промывают не- болыпнм количег.твом этанола, затем водой. Выход 2,15 г (8I%), Кристаллизуют И5 ВОДНОГО ДМФА, т.пл.,.
НайденоДг С 67,80, Н 3,68, N 10,65,.
,05%.
Вычислено,%: С 67,67; Н 3.76: N 10,53,:
. Данные УФ-спектров; 204, 302 нм. . .
Пример 3. (Диэтиламино) этоксикарбонил Лени-пямид кумарин-3- карбоновои кислоты (соединение 1в).
Смесь 2,10 г хлорангндрида кумаг рин-З-кяпбоновой. кислоты, 2,36 г диэтиламинозтилового зфира 4-амино бензойной кислоты, 50 мл толуола и 5-10 капель пиридина нагревают при О-бО С в течение ч. После охлаждения осадок отделяют, неболь-30 шим количеством этанола,, затем водой. Выход 3,.06 г (75%). Кристаллизуют из водного ДМФА , т.пл.238-240°С.
НайденоД; С 67,81; Н 4,19; 6.75, . .
СезН54П5%; . .. .
Вычислено,%; С 67,65t Н 4,08; 6,86.
Данные УФ-спектровг; a 203, 24,, 302 им.
25
20
35
40
;., . П р и м а р 4. (Диэтиланнно) . 31Токсш1;ар брнил фениламчд, 8 метоксн-. румарин-3 карбоновой -кнслоты (соединение г), .
Смесь г хлоранг Здрида 8-ме- токсику арик™3-карбоновой кислоты,, .2,36 г Днэтнлa fкнoэтилoвaгo -эфира 4 аминобензойной кнсло га, 50 мл. луола и 5- О зсгшель пиридина нагрева«т при ЗГЬбО С в течещте 1 ч.. После. р5«1а.ХЦения осадок, промьт- BawT небольшим ко1щчеством этанола. Затем водой. Вдаод 3,07 г (70%), .
1466217
0
0
5
Кристаллиэзпот из водного ДОФА, .т.пл. 255°С.
Найдено.% С 65,58j-H . 5 N 6,22.
,Ng.
Вычислено,%; С 65,75; Н 5,93 N 6,39, . .
Данные У -спектров Я ware 206, 261, .330 нм,
Исследования антиаллергичёского действия соединений 1а-г проводят ыа модели реакции пассивной кожной ана- ° филаксии (РДКА).
Сьгаоротку, содержащую специфические гомопйтотропные антитела, полу- чают ни третьей неделе после сенсибилизации мьппей линии СВА овальбуми- , 0 ° (t мкг) с гидроокисью алюминия (2,5 мг/мьппь). Полученную МЫШИ-- ную сыворотку в разведении 1:30 (после определения титра гомоцито- тропных антител в РПКА) вводят внут- рикожно в тесть выстриженных участков КОХИ спины белых беспородных крыс (240-260 г) в.количестве ,. 30 мкл. Через 48 ч крысам внутривенно вводят разрешающую дозу овальбу- мина ( 1 мг/кг) в I мл 0,5%-ного раствора синлки Аванса, Спустя 30 мин крыс под эфирным наркозом декапити- руют, кожу выворачивают, прокрашенные участки вырезают и экстрагируют крас- .ку формамидом при 37°С в течение 4 сут. Количество красителя в экстравазате определяют спектрофотомет- рически при 600 им по калибровочному графику. .
Вещества 1а-г вводят внзгтрибрю- пшнно в виде суспензий, приготовленных с добавлением.одной капли тви- Ha-80j в дозе 50 иг/кг за 1,5 ч до разрешающей дозы овальбумина.
В качестве объекта сравнения используют антиаллергнческнй препарат кромолинат .натр11я (интал) аналог . по действию, обладающий антианафилак. тическим действием; Кромолияат нат- . рия вводят в дозе 50 мг/кг за 1,5 ч до введения; антигена. Контрольным крысам внутрибрюшинно. вводят физиояо- 1Ьмеский раствор с таким же количеством твнИа-80, Процент ингибирова- Н1Ш РИКА вычисляк1Т по формуле
5
0
синька в 1 час-тках крыс,получавших 100 :s нccлeдye шe соединенид/сшшка 8 участках
кош коятрольньйс крыс, ккг
. , Результаты опытов, статистически образованы и приведены в табл.1.
Влияние соединений 1а-г на гетеро логичнук пассивную кожную анафилак- , сию у морских свинок, опосредованную Ig G-антитеЛами кролика.
Сьгеоротку, содержащую специфические IgGr антитела (Получают через 7внутрибрюпшино вводят по 1 мл суспензии исследуемых веществ, приготов-. ленных с добавлением 1 капли тви-. на-80, в дозе 50 мг/кг.
В качестве объекта сравнения используют кромолинат натрия, которьтй вводят в такой же дозе и тем же - путем.. Контрольным крысам внутри11 У I СР1 - я- - -
кие 1.Й .--с:::- i . , боющинно вводят физиологический дней после Л-кратной сенси или- X Ю бР- д б лением такого же колиI J iljnOJTl Г .
задии кролика смеськ, состоящей из 10 мг овальбумииа растворенного в 0,5 мл физиологического раствора - и 0,5 мл полного адъюванта Фрейда,, вводимой виутримьшечно 1 раз в, неделю.. .
Полученную сыворотку кролика в , разведении 1:16 вводят внутрикожно в шесть выстриже ннъгх участков кожи спины морских свинок (270-300 г) в количестве 30 мкл..Через.3 ч морским, свинкам внутривенно вводят 1 мл 0,5%-ного раствора синьки Эванса, содержащий 5 мг овальбумина. Спустя 30 мин животных под наркозом эфира декапитируют, кожу выворачивают, прокрашенные участки вырезают и краску экстрагируют формамидом при в течении 4 сут. Количество-- красителя в экстравазате определяют спектрофотометрически при 600 им.
Соединения 1а-г кромолинат натчества твина-80.
Процент ингибирования кожной ре акции, вызванной введением экзоген- 15 ного гистамииа или вещества 48/80,
вычисляют по указанной формуле. Ре- ; зультаты опытов статистически обработаны и приведены в табл.3 и 4,
Определение острой токсичности 20 и расчеты U(so осуществляют по методу Кербера. Келым мышам массой 8- 20 г внутрибрюшинно вводят 0,5 г суспензии исследуемых веществ, приготовленных -с добавлением небольшого 25 количества твина-80. На каждую дозу в опыте берут 6 мыгаей. Получают следующие значения 1лД 50 (мг/кг) : Та 1960; 1 б 840; I в Я530; 1 г 1510.
Результаты показывают, что соеди- 30 нения 1а-г обладают выраженным.антиаллергическим действием, превышающим активность антиаллергического препарата - кромолината натрия в 1,5-2 раза. В отличие от последнего
рия вводят аналогично. Контрольным
животным внутрибрюиинно вводят Физио- „нгибируют реакцию
логический раствор. Процент ингибиро- 35 кожной анафилаксии, опо- вания РПКА у морских средованную как IsE-антителамн (у
ляют по указанной формуле. Результа-- i « j о
ты опытов статистически обработаны И приведены в табл.2. г
Влияние соединений 1я-г на проявления местной реакции, вызванной
внутрикожным введением гистамина |ши
либератора гистамнна - вещества .
48/80.
В шесть выстриженных участков
кожи спины беспородных елых крыс
(230-250 г) вводят по 30 мкл физно :Г Г™.Äñ .., ПР«„,.0«.. .V-.P«Ka ри,™ 1 ва 48/80, Сразу после этого внутри- SO
веняо вводят I мл 0,5Х-ного раствора синьки Эванса. Через 5 мйи У Дв- капитированннх под эфирным наркозом крыс интенсивность местной сосудистой реакгдаи оценивают по количват- gS ву красителя в зкстраназетве опредв- по описанной методике о . За IjS ч до внутрикожных ияьек-. ций гмстамина или веясства 48/оО
annyrj ixt -О
крыс) так и 1вС-антителами (у морй- ких свинок), снижают кожные реакции, 40 вызываемые .введением гистамина и либератора гистамина - вещества
48/80.
Соединения Га-г могут найти приме нение в медицине в качестве антиал- 45 лергических препаратов.
Ф о р м у л af и 3 о б р е т е и и.
.где Rf г HI Ra - группа;
-I.
R,- Н и Rj- К-группа; R,-H
внутрибрюпшино вводят по 1 мл суспензии исследуемых веществ, приготов-. ленных с добавлением 1 капли тви-. на-80, в дозе 50 мг/кг.
В качестве объекта сравнения используют кромолинат натрия, которьтй вводят в такой же дозе и тем же - путем.. Контрольным крысам внутри11 У I СР1 - я- - -
, боющинно вводят физиологический д б лением такого же количества твина-80.
Процент ингибирования кожной ре акции, вызванной введением экзоген- ного гистамииа или вещества 48/80,
вычисляют по указанной формуле. Ре- зультаты опытов статистически обработаны и приведены в табл.3 и 4,
Определение острой токсичности и расчеты U(so осуществляют по методу Кербера. Келым мышам массой 8- 20 г внутрибрюшинно вводят 0,5 г суспензии исследуемых веществ, приготовленных -с добавлением небольшого количества твина-80. На каждую дозу в опыте берут 6 мыгаей. Получают следующие значения 1лД 50 (мг/кг) : Та 1960; 1 б 840; I в Я530; 1 г 1510.
Результаты показывают, что соеди- нения 1а-г обладают выраженным.антиаллергическим действием, превышающим активность антиаллергического препарата - кромолината натрия в 1,5-2 раза. В отличие от последнего
„нгибируют реакцию
кожной анафилаксии, опо- средованную как IsE-антителамн (у
i « j о
annyrj ixt -О
крыс) так и 1вС-антителами (у морй- ких свинок), снижают кожные реакции, вызываемые .введением гистамина и либератора гистамина - вещества
48/80.
Соединения Га-г могут найти применение в медицине в качестве антиал- лергических препаратов.
Ф о р м у л af и 3 о б р е т е и и.я
.где Rf г HI Ra - группа;
-I.
R,- Н и Rj- К-группа; R,-H
и Rf
СООСгН ЖС Н Ч труп- - СООСгН К()2.,руп„«, ебладяк,щие
-антиалпергической активностью.
rta или -ОСН. и Ro
Т а б л и ц а 1
Влияние исследуемых веществ на проявление РПКА у крыс, опосредованной IgE-антителами
Т а б л н ц а 2
Влияние соедниений 1а-г на проявления РПКА у морских свинок, опосредованной IgG-антителаьш
Таблица
Влияние соединений 1а-г на интенсивность местной сосудистой реакции,вызванной внут- рикожным введёиией гистамина
Влияние соединений 1а-г на интенсивность местной реакции, вызванной внутрикожным введение вещества 48/80«
Таблица4
