Способ получения 6-дезамино-6-гризеоловой кислоты Советский патент 1989 года по МПК C07D473/30 C07D493/04 

I

Изобретение относится к способу получения 6-дезамино-6-гризеоловой кислоты - нового биологически активного соединения, которое может найти применение в медицине.

.Цель изобретения - способ получения нового биологически активного соединения, практически нетоксичного и обладающего более высокой активностью в отношении способности ингиби- ровать действие фосфодиэстеразы циклического аденозинмонофосфата.

Пример 1. 6 Дезаминр-6-окси- гризеоловая кислота.

5,81 г гризеоловой кислоты растворяют при нагревании в 80%-ном (мае./об.) водном растворе уксусной

кислоты, после чего раствор охлаждают до комнатной температуры. Затем добавляют 960 г нитрита натрия. Воздух в сосуде, содержащем указанный раствор, заменяют азотом, сосуд плотно закупоривают и оставляют стоять в течение 16 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении, получая остаток, к которому добавляют этанол, и затем отгоняют, этот процесс повторяют до полного исчезновения запаха уксусной кислоты. Остаток растворяют в 50 мл воды, рН раствора доводят, до 1,0 концентрированной соляной кислоты при охлаждении льдом. Раствор оставляют на 16 ч в холодильнике, а затем осадок собирают фильтрацией и

ю

промывают небольшим количеством поды Осадок затем перекристаллизовывают из водного ацетона, что дает 1,66 г целевого соединения. При конденсировании маточной жидкости получают 2,20 г неочищенных кристаллов. Эти неочищенные кристаллы затем перекристаллизовывают из водного ацетона, чт дает дополнительно 1,2 г целевого соединения (выход 54%)о

Спектр ультрафиолетового поглощения () ,нм (6): 247(11800) 270 (3700). ,

Спектр НМР (гексадейтерированный диметилсульфоксид) S , млн д.; 4,50- (Ш, синглет); 4,57 (IK, дублет, I 6,0 Гц)| 5,12 (IH, дублет, I 3,0 Гц); 5,88 (1Н, дублет дублетов, I 3,0 и 6,0 Гц); 6,50 (1К, синглет); 8,17 (ГН,, синглет); 8,38 (IHj синглет).

С 43,29| Н 3,

,26|

%: С 43,19г Н 3,455

Найдено, % N 14,42,

1/2 lUO Вычислено,

N 14,39.

Пример 2, В соответствии с примером 1, используя вместо уксусной фосфорную кислоту, осуществ- ляют процесс при 40°С в течение 10ч и получают указанное в примере 1 соединение о

Пример 3, По методике примера 1 осуществляют процесс при О С- в течение 50 ч, получают целевое соединение .

Проведены биологические испытания 6-деэамино-6-гризеоловой кисло. ты.

Токсичность.

Подвергают испытанию гризеоловую кислоту и 6-дезамино-6-гризеоловую кислоту. Подопытные животные - самц крыс штамма Фишер (группы по пять

крыс для каждого опыта).

Испытуемые соединения назначалис в виде с циничных суточных доз 500 или 100 мг/кг на протяжении четырех дней испытания.

При дозе 50 мг/кг предлагаемое соединение показало смертность 0/5 конце испытания (т.е. из 5 крыс в . каждой подопытной группе ни одна не умерла), при дозе 100 мг/кг смерт- ность, вызванная гризеоловой кислотой, была 3/5 (0/5 в первые два дня и 3/5 после 3 дней), при дозе 200 мг/кг - 4/5, Показатели смертно

30

40

-д

сти при дозе 00 и 200 мг/кг были 0/5 к концу испытания, т.е. смертность отсутствовала. Эти результаты показывают, что предлагаемое соединение практически нетоксично,

Фосфодиэстеразная (РВЕ) ингибитор- ная активность.

Соединение по изобретению испыты- 0 вают вместе с теофиллином, взятым для сравнения.

Испытание осуществляют при использовании метода Пихардил Чанга. В качестве источника сАМР PDE использо- 5 вался неочищенный энзиматический раствор, взятый из мозга крыс.

В качестве субстрата использовался меченый С сАИР, который применялся в 0,2 М буферном растворе 0 трис-соляной кислоты (рН 8,0) в количестве, достаточном для получения конечной концентрации 0,14 мкМ (трис представляет собой трис-(оксиметил) аминонетан). Раствор субстрата сме- 25 шивался с соответствующим количеством испытуемого соединения, растворенного в 2-5 мкл диметилсульфоксида, с 20 мкл раствора змеиного яда и - . 40 мкл неочищенного раствора энзима. Добавлялось достаточное количество трис-солянокислотного буфера для достижения общего объема 100 мкл. Смесь реагировала при 30°С в течение 20мин, В конце данного периода времени реакционная смесь обрабатывалась смолой Амберлит (торговая марка) 1ГР-59, и определялся уровень остаточной радиоактивности аденозина в продукте. Эксперимент осуществлялся при ряде уровней концентрации каждого активного соединения, и по этим данным вычислялись величины 50%-ного ингибирования

dso).

Эксперимент повторялся за исключением того, что вместе сАМР в качестве субстрата применялся циклический гуанозинмонофосфат (cGMP). Также;вычислялась величина I Q против сМР PDE

Величина ингибирования действия фосфодиэстеразы циклического адено--.- зинмонофосфата дана в таблице.

5

Известным соединением, используемым для сравнения, является теофел- лин, который ингибирует как cAffP PDE так и cGtff PDE и применяется для данной цели как терапевтическое средст- 30, Наименее эффективное из испытанных соединений по изобретению имеет величину Ijp , которая примерно на порядок ниже, чем соответствующая ве личина для теофеллина, в то время как наиболее эффективное из трех соединений имеет величину примерно на 3-4 порядка ниже, что указывает на то, что показатели активности со- единений по изоб.ретениго в качестве ингибиторов PDE высокие.

Предлагаемое соединение может использоваться в качестве терапевтических агентоЕ против различных цир- куляторпых церебральных расстройств.} таких как осложнения после апоплексии головного мозга и осложнения или остаточные явления инфаркта головного мозга, и в качестве активаторов метаболизма в мозгу, например, для лечения старческого слабо. мия или травматического инфаркта мозга. Соединение может вводиться орально или неорально (капрюмер, подкожно или внутркг- ЬШ1ечно путем инъекций).

Проведенные испытания показали, что получаемая описанным способом 6 дезамино-6-гризеоловая кис.пота - практически нетоксичное соединение; при этом оно обладает более высокой способностью в oTHODjeHHH ингибирова

21Ь

ПИЯ действия фосфоди:5стера- ;-1 1ик;.1н- ческого адеисзинмопофосфата с

5

Ф о р -i у л а и э о б р

Способ получен ..; 6-дезамин -гризеоловой кислоты

4 --:-- v

1 /

Ь1 N

ноос / N { М

ноос-{ он он

о т л и ч а ю щ и и с я тем,, гризёоловлто кислоту формулы

по.двергают Бзаимодействио с нптp. натрия Е кислотнь х условиях при температуре от О С до комнатной .в течение 16-50 ч

Изобретение касается гетероциклических веществ, в частности получения 6-дезамино-6--гризеоловой кислоты, обладающей способностью ингкбировать действие фосфодиэстеразы циклического аденозин-монофосфата. Цель - создание нового более активного и малотоксичного вещества .указанного класса. Синтез ведут реакцией NaNOj с гризеоло- вой кислотой в кислой среде при температуре от О С до комнатной Б течение ,.о т 16-50 ч. 54%, брутто ф-ла С, H.j N.j 0g 1/ Н О. Новое вещество практически нетоксично и может в лучшей степени, чем те.офеллин, снижать циркуляторные церебральные рас- тройства, применяться для лечения осложнений после апоплексии головного мозга и в качестве активаторов метаболизма в мозгу для лечен я старческого слабоумия, I табл.

Редактор В, Петраш

Техред Л«Сердюкова

Заказ 1218/58 Тираж 352 . Подписное

ВИИИШ-i Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-ЗЗ Раушская наб., д. 4/5

Корректор ВвРомзненко