Способ получения производных гризеоловой кислоты Советский патент 1989 года по МПК C07D473/30 A61K31/7076 A61P25/28 C07D493/04 

сыщенноро водного раствора бикарбоната натрия, а затем лиофилизируют. Остаток растворяют в воде, и раствор доводят до значения рН 1 с помощью 1 н. соляной кислоты.

Предлагаемый раствор подвергают колоночной хроматографии в обратной фазе с использованием колонки Rp-8, элюируемой смесью 2% мае/объем аце- тонитрила, 0,3% мае/объем водной уксусной кислоты и 97,7% воды,- элюат лиофилизируют, давая 10 мг целевого соединения.

Спектр ультрафиолетового поглоще- ния (вода)/г-„.,, им (f): 258 (14600)

тлРчС

Спектр ядерно-магнитного резонанса (1:1 по объему смесь fljO и гекса- дейтериррванного диметилсульфокси- да) сГ млн.дол.; 4,56 (1Н, дублет, J 6,9 Гц), 4,71 (1Н, синглет), 4,98 (1Н, синглет), 5,62 (1Н, дублет, J 6,9 Гц), 6,60 (1Н, синглет), 8,14 (1Н, синглет), 8,30 (1Н, синглет) ,.

Пример 2.4 ,7 -Ангидро-5 - -«(-бром-4 -«(-оксигризеоловая кислота 2,27 г гризеоловой кислоты растворяют в 60 МП 2 н. водной гидроокиси натрия и при охлаждении льдом по каплям на протяжении 5 мин добавляют 112 мл насыщенного водного раствора брома. Смесь перемешивают 30 мин и в конце данного периода времени рН доводят до 12-13, избыток брома разлагают добавлением 25 мл 5 М водного раствора кислого сульфата натрия. Смесь доводят до значения рН 2,3 с помощью концентрированной соляной кислоты и оставляют стоять в течение ночи в холодильнике. Кристаллы, выпавшие в осадок, отфильтро- вьгоают, получают 1,6 г целевого соединения в виде желтьсх игл.

Спектр ультрафиолетового поглоще- ния (вода) им (): 257,5 (15500).

Спектр ядерно-магнитного резонанса (гексадейтерированный диметилсуль фоксид) сГ млн.дол.: 4,73 (1Н, дуб- лет, J 6,6 Гц), 4,93 (1Н, синглет) 5,27 (1Н, синлет), 5,98 (1Н, дублет, J 6,6 Гц), 6,72 (1Н, синглет), 8,21 (1Н, синглет), 8,39 (1Н, синг- .лет).

Пример 3. 4„ ,7 -Ангйдро-5 -а(-иод-4 -о(-оксигризеоловая кислота. 10 г гризеоловой кислоты растворяют в 264 мл 2 н. водной гидроокиси

натрия и при охлаждении льдом по каплям добавляют раствор, содержащий 0,5 моль иода в метаноле. После до- бавления примерно 2/3 раствора иода начинают выпадать в осадок кристаллы рН доводят до 12-13. Спустя 3,5 ч добавляют 700 мл цоды, а затем 27,5 г кислого сульфита натрия, и раствор доводят до значейия рН 2,3 с помощью насыщенного водного раствора бикарбоната натрия. Реакционную смесь оставляют на ночь при 5 с,

Кристаллы, выпавшие в осадок, отфильтровывают, промывают водой, а затем гексаном, сушат, получают 13,0 г целевого соединения.

Спектр ультрафиолетового поглощения (вода) . нм (6): 258 (12300)

Спектр ядерно-магнитного резонанса (гексадейтерированный диметил- сульфоксид) d млн.дол.S 4,77 (1Н, дублет, J 6,9 Гц), 4,96 (1Н, синглет), 5,11 (1Н, синглет), 6,07 (1Н, дублет, J 6,9 Гц), 6,73 (1Н, синглет), 8,23 (1Н, синглет), 8,40 (1Н, синглет).

Пример 4. Дибензиларил 4 ,7 -ангидро-5 -«(-бром-4- -оксигри- зёолат .

рН суспензии 3,3 г 4 57 -ангидро- -5 -|,-бром-4 -5 -оксигризеоловой кислоты (полученной, как описано в примере 2) в 100 мл ацетона и 20 мл воды доводят до , а затем добавляют раствор дифенилдиазометана в ацетоне Смесь перемешивают при комнатной температуре. Ацетон отгоняют и остаток растворяют в этилацетате и насыщенном водном растворе бикарбоната натрия. Органическую фазу отделяют, промывают водой, и сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель отгоняют. Остаток растворяют в небольшом количестве ацетона, и раство добавляют к гексану при перемешивании, получают порошок. Порошок отфильтровывают и перекристаллизовыва- ют из смеси бензол/метанол. Выход 3,75 г целевого соединения.

Спектр ультрафиолетового поглощения (метакол) нм (): 256,8 (16000).

Спектр ядерно-магнитного резонанса (1:1 по объему смесь и гек- садейтерированного диметилсульфокси- да) ( млн.дол.: 4,83 (1Н, дублет, J 6,6 Гц), 5,66 (1Н, синглет), 5,79 (1Н, синглет), 6,26 (1Н, дуб 14684226

лет, J 6,6 Гц), 6,84 (1Н, синглет), дублет, J 6,6 Гц), 5,28 (1Н, синг- 8,24 (1Н, синглет), 8,41 (1Н, синглет) .

5. ,1 Диб е н 3 гидрил

20

4 , 7 -ангидро-4 -о -окси-5 -о{-иодгри- зеолат.

Повторяют в основном те же процедуры, что описаны в примере 4, но с использованием 505 мг 4,7 -ангидро- -4 -« -гидро-5 - -иодгризеоловой кислоты.

Получают 805 мг целевого соединения.

Спектр ультрафиолетового поглоще- 5 ния (метанол) Л нм (6): 257 (16500).

Спектр ядерно-магнитного резонанса (1:1 по объему смесь и гекса- дейтерированного диметилсульфоксида) tfмлн.дол.: 4,79 (1Н, дублет, J 6,6 Гц), 5,50 (1Н, синглет), 5,59 (1Н, синглет), 6,24 (1Н, дублет, J 6,6 Гц), 6,77 (1Н, синглет), 8,24 (1Н, синглет), 8,34 (1Н, синглет) .

Пример 6. Диметил 4,7- -ангидро-5 -t -6poM-4 - -оксигризео- лат.

3,1 г 1 метил-3-п-толилтриазен, а затем 10 мл воды добавляют к суспензии 1 г 4, 7 -aнгидpo-5 -в -бpoм- -4 -о -оксигризеоловой кислоты (полученной, как описано в примере 2) в 40 мл тетрагидрофурана. Суспензия растворяется примерно через 10 мин. Спустя 3 ч добавляют 1,1 г п-толуол- сульфокислоты и процесс идет при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь затем оставляют на ночь при . Растворитель отгоняют и остаток растворяют в этилацета- те и воде. Органическую фазу отделяют, промывают водой и сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель отгоняют. Полученные- кристаллы отфильтровывают. Выход 0,46 г целевого соединения.

Маточную жидкость концентрируют, растворяют в небольшом количестве ацетона и выливают в гексан при перемешивании. Получают 0,24 г соединения в форме порошка.

Спектр ультрафиолетового поглощения (метанол)/, нм ( )г 257 (14200).

Спектр ядерно-магнитного резонанса (гексадейтерированный диметил- сульфокскд) сГ млн.дол.; 4,83 (1Н,

лет), 5,49 (1Н, синглет), 6,15 (1Н, дублет, J 6,6 Гц), 6,79 (1Н, синглет), 8,21 (.1Н, синглет), 8,39 (1Н, синглет).

Пример 7. Диметил 4 ,7- -ангидро-4 -Э/-ОКСИ-5 -о(-иодгризеолат.

Повторяют процедуру, описанную в примере 6, но с использованием

2.0г 4 ,7 -ангидро-4 - -окси-5 -о/- -иодгризеоловой кислоты (полученной, как описано в примере 3). Получают

1.1г целевого соединеьшя.

Спектр у;|ьтрафиолетового поглощения (метанол) Mftkc (): 256,2 (15000).

Спектр ядерно-магнитного резонанса (гексадейтерированный диметилсульфоксид) сГ млн.дол.: 4,80 (1Н, дублет, J 6,6 Гц), 5,23 (1Н, синглет), 5,26 (1Н, синглет), 6,20 (1Н, дублет, J 6,6 Гц), 6,79 (1Н, синглет), 8,24 (1Н, синглет), 8,40 (1Н, 25 синглет).

П р и м е р 8. 4,7 -Ангидро-5 - , -о -бром-4 -о(-гидроксигидризеоловая кислота.

2,27 г гризеоловой кислоты раство- 30 ряют в 10 мл 2 н. водной гидроокиси натрия и при охлаладении льдом по каплям добавляют 112 мл нacьш eннoгo водного раствора брома в течение 20 мин. В течение реакции рН реакци- 35 онного раствора поддерживают в пределах 12-13 добавлением 2 н. гидроокиси натрия.

Далее используют дальнейшую процедуру примера 2, получают названное 40 со еди не ние.

Пример 9. Диметил 4 ,7 -ан- гидро-5 -с -бром-4 -о -гидроксигризео- ловая кислота.

К суспензии 1 г 4, 7 -ангидро-5 - 45 бром-4 -о(-гидрокси гризеоловой кислоты в 40 мл тетрагидрофурана добавляют 1,55 г 3-метил-1-п-толш1- триазена и затем добавляют 10 мл воды. Полученную смесь перемешивают 5Q до образования чистого (прозрачного) раствора в течение около 10 мин Спустя 3ч добавляют О ,63 г п-толу- олсульфоновой кислоты и смесь перемешивают. По прошествии 2 ч добав- gg ляют 1,55 г З-метил-1-п-толилтриазе- на и 0,2 г п-толуолсульфоновой кислоты и перемешивают в течение 2 ч. Затем раствор отгоняют, остаток разбавляют 20 мл этилацетата и 20 мл

дублет, J 6,6 Гц), 5,28 (1Н, синг-

20

5

лет), 5,49 (1Н, синглет), 6,15 (1Н, дублет, J 6,6 Гц), 6,79 (1Н, синглет), 8,21 (.1Н, синглет), 8,39 (1Н, синглет).

Пример 7. Диметил 4 ,7- -ангидро-4 -Э/-ОКСИ-5 -о(-иодгризеолат.

Повторяют процедуру, описанную в примере 6, но с использованием

2.0г 4 ,7 -ангидро-4 - -окси-5 -о/- -иодгризеоловой кислоты (полученной, как описано в примере 3). Получают

1.1г целевого соединеьшя.

Спектр у;|ьтрафиолетового поглощения (метанол) Mftkc (): 256,2 (15000).

Спектр ядерно-магнитного резонанса (гексадейтерированный диметилсульфоксид) сГ млн.дол.: 4,80 (1Н, дублет, J 6,6 Гц), 5,23 (1Н, синглет), 5,26 (1Н, синглет), 6,20 (1Н, дублет, J 6,6 Гц), 6,79 (1Н, синглет), 8,24 (1Н, синглет), 8,40 (1Н, 25 синглет).

П р и м е р 8. 4,7 -Ангидро-5 - , -о -бром-4 -о(-гидроксигидризеоловая кислота.

2,27 г гризеоловой кислоты раство- 30 ряют в 10 мл 2 н. водной гидроокиси натрия и при охлаладении льдом по каплям добавляют 112 мл нacьш eннoгo водного раствора брома в течение 20 мин. В течение реакции рН реакци- 5 онного раствора поддерживают в пределах 12-13 добавлением 2 н. гидроокиси натрия.

Далее используют дальнейшую процедуру примера 2, получают названное 0 со еди не ние.

Пример 9. Диметил 4 ,7 -ан- гидро-5 -с -бром-4 -о -гидроксигризео- ловая кислота.

К суспензии 1 г 4, 7 -ангидро-5 - 5 бром-4 -о(-гидрокси гризеоловой кислоты в 40 мл тетрагидрофурана добавляют 1,55 г 3-метил-1-п-толш1- триазена и затем добавляют 10 мл воды. Полученную смесь перемешивают Q до образования чистого (прозрачного) раствора в течение около 10 мин Спустя 3ч добавляют О ,63 г п-толу- олсульфоновой кислоты и смесь перемешивают. По прошествии 2 ч добав- g ляют 1,55 г З-метил-1-п-толилтриазе- на и 0,2 г п-толуолсульфоновой кислоты и перемешивают в течение 2 ч. Затем раствор отгоняют, остаток разбавляют 20 мл этилацетата и 20 мл

воды, этилацетатный слой отделяют, промывают водой. Водный слой экстрагируют 10 мл этилацетата.

Объединенный этилацетатньй слой сушат над MgSO/, фильтруют и отгоняют растворитель. Осадок фильтруют и получают 0,81 г названного соединения. Маточный раствор подвергают перегонке, остаток разбавляют в 2 мл ацетона, образовавшийся раствор выливают в 300 мл гексана, получен- ньш при jTOM осадок отделяют фильтрацией, получая 0,24 г названного соединения.

Проведены биологические испытания соединений по изобретению.

Фосфодиэстеразная (РДЕ) ингиби- торная активность.

Испытание осуществляют при ис- пользовании в основном метода Пичар- да и Чанга. В качестве источника cMff РДЁ используют неочищенный энзиматический раствор, взятьш из мозга крыс,

В качестве субстрата используют меченый б сАМР. Его применяют в 0,2 М буферном растворе трис-соляной кислоты (рН 8,0 в количестве, достаточном для получения конечной кон- центрации 0,14 мкМ). Трис представляет собой трис-оксиметил-аминоме- тан. Раствор субстрата смешивают с соответствующим количеством испытываемого соединения, растворенного в 2-5 мкл диметилсульфоксида и с 20 мк раствора змеиного яда и 40 мкл неочищенного раствора энзима. Добавляют достаточное количество трис-соля- нокислотного буфера для достижения общего объема 100 мкл. Смеси дают возможность реагировать при 30 С в течение 20 мин. В конце данного периода времени реакционную смесь обрабатывают смолой Амберлит (торговая марка) 1RP-58 и определяют уровень остаточной радиоактивности аденози- на в продукте. Эксперимент осуществляют при ряде уровней концентрации каждого активного соединения и по этим данным вычисляют величины 50%- ного ингибирования (159)

Э сперимент повторяют за исключением того, что вместо сАМР в качест ве субстрата применяют циклический гуанозин-монофосфат (cGMP). Также вычисляют величину 1 против cGMP РДЕ.

Известным соединением, используе- .мым для сравнения, является теофил- лин, который ингибирует как сАМР РДЕ так и cGMP РДЕ и применяется для данной цели как терапевтическое средство. Наименее эффективное из испытанных соединений данного изобретения имеет величин 1 , которая примерно на порядок кратности ниже, чем соответствукщая величина для теофил- лина, в то время как наиболее эффективное из тех соединений изобретения которые были испытаны, имеет величину I - примерно на 3-4 порядка кратности ниже, что указывает на то, что показатели активности соединений изобретения в качестве ингибиторов РДЕ необычайно высокие, Значения 1,- (микромоли) сАМР РДЕ для соединений изобретения, от 0,09 до 35, известное 360,0; сСМР РДЕ для соединений изобретения от 0,05 до 90J известное 196,0. Для гризеоловой кислоты эти величины (УДде) равны: 160 мкМ против сАМР и 630 мкМ против сСМР.

Улучшение вязкости крови.

Подопытными животными бьши caMipii крыс Wistar; их разбивают на группы по пять крыс в каждой. Крысы анесте- зируют пентобарбиталом и одновременно вводят им орально испытываемое соединение в дозе, указанной в табл. 1 в виде суспензии в карбокси- метилцеллюлозе. Быстро производят надрез на шее н из яремной вены собирают пробы крови 0,5 мл. Вязкость- данной пробы определяют с помсщью

ротационного вискози 1етра. (

Через 30 мин после орального введения общую сонную артерию перевязывают бипатерально. Через 1 ч после этого (т.е..спустя 90 мин после . орального введения), из яремной вены собирают еще одну пробу крови 0,5 мл и ее вязкость определяют таким же образом.

Вычисляют показатели вязкости крови каждого подопытного животного и ее стандартные отклонения для каждой из четырех скоростей или степеней сдвига (37,5, 75, 150 и 375 с ) ротационного вискозиметра. Значения для каждой группы перед перевязкой и после яеревязкк (т.е. изменение на протяжении периода 60 мин) анализируют по методу статистического т-испытания. Результаты приведены в табл. 1г для каждой скорости сдвига.

когда не отмечалось значительного повышения кровяного давления (Р 0505) между значениями перед перевязкой и после перевязки печатается единственный знак плюс (+). Так, например, если не бьшо значительной разниЩ) в вязкости между показателями до перевязки и после перевязки при любой из четырех скоростей сдвига, результаты будут ++++. Параллелно с этими экспериментами осуществлялся идентичньш эксперимент за исключением того, что подопытным живоным вводят раствор одной карбокси- метилцеллюяозы без активного соединения J результаты данной подопытной группы показали значительное увели 1е ние вязкости крови при каждой из четырех скоростей сдвига.

Как видно из табл. 1, значительное улучшение (т.е. стабилизация) вязкости крови достигалось в случае соединения 5 при всех уровнях доз.

Испытание с сотрясением мозга.

Испытываемое соединение, суспендированное в водном растворе карбок- симетилцеллюлозы, вводят мышам инт- раперитонально. Спустя 30 мин, на голову каждой мьши падала капля весом 16 г с высоты 50 см и для каждой мьши измерялось время, необходимое на восстановление ее защитного рефлекса и самопроизвольной двигатель- ной активности.

В качестве контроля осуществлялся сходный эксперимент с использованием раствора карбоксиметилцеллюлозы без какого-либо активного соединения.

Результаты приведены в табл. 2 в виде среднего времени Чв секундах) плюс - минус статистическая ошибка. В контрольной группе бьшо 20 мышей, и 17 мышей было в группе, которой испытываемое соединение не вводилось

Соединения по изобретению могут использоваться соответственно в качестве терапевтических агентов против различных Циркуляторных цереб- .ральных расстройств, таких как осложнения после апоплексии головного мозга и осложнения или остаточные явления инфаркта головного мозга, и в качестве активаторов метаболизма в мозгу, например, для лечения старческого слабоумия или травматического инфаркта мозга. Соединения изобретения могут вводиться орально или

0

5

0

5

0

5

0

неорально (например, подкожно или внутримышечно путем инъекций).

Определение токсичности соединений по изобретению и гризеоловой кислоты проводилось на крысах-самцах штамма Фишер. Крыс разбивают на группы по пять штук в каждой.

Испытываемые соединения вводят крысам в виде единичных суточных доз: 50, 100 или 200 мг/кг на протяжении 4 дн. испытаний.

Для соединения по изобретению показатели смертности при дозах 50, 100 и 200 мг/кг - О/5 к концу испытания, т.е. смертность отсутствовала (из 5 крыс в каждой подопытной группе ни одна не умерла).

Смертность, вызванная гризеоловой кислотой в дозе 100 шт/кг, была 3/5, в дозе 200 мг/кг - 4/5.

Таким образом, соединения по изобретению могут быть отнесены к практически нетоксичным.

Проведенные испытания показали, что соединения по изобретению практи- ,чески нетоксичны, обладают более высокой ингибиторной активностью в отношении сАМР РДЕ и cGMP РРЕ в сравнении с гризеоловой кислотой и тёо- филлина.

Кроме того, описываемый процесс получения соединений по изобретению представляет собой уникальнзпо внутримолекулярную дополнительную перегруппировку при реакции гидроксильной группы в 4 -положении гризеоловой кислоты с двойной связью между 4 и 5 положе ниями.

Формула изобретения

Способ получения производных гризеоловой кислоты общей формулы

ОН

R - водород, или С -С -алкил,

бензгидрил, - галоген, ичающийся тем, что соZ

л

единение формулы

ноос, ноос

подвергают взаимодействию с галогеном в водно-щелочном растворе при рН 12-13 с получением соединения формулы

ноос Ноос-

где Z имеет указанные значения, и, при необходимости, полученный продукт подвергают этерификации этерифицирующим агентом, таким как 1- -метил-3-п-толилтриазен или дифенил- диазометан, предпочтительно в инертном растворителе, таком как тетра- гидрофуран или воДный ацетон, при

комнатной температуре в течение 1-24 ч.

Таблица 1

Изобретение относится к гетероциклическим соединениям, в частности к получению производных гризеоловой кислоты формулы 1 Изобретение относится к способу получения новых производных гризеоловой кислоты - биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине. Цель изобретения - новый способ получен ия новых производных гризеоловой кислоты, обладающих ингибиторным действием в отношении сАМР РДЕ и более низкой токсичностью. где R - Н, или алкил , бензгид- рил, Z - галоген которые могут найти применение в медицине. Цель - получение новых соединений новым способом. Ползшёние их ведут взарпчодей- ствием гризеоловой кислоты с галогеном в водно-щелочном растворе rrpja рН 12-13. При необходимости полученный продукт подвергают этерификаций этерифицирующим агентом, таким как 1-метил-З-п-толилтриазен или дифе- ншздиазометан, предпочтительно в инертном растворителе - тетрагидро- фуране или водном ацетоне, при комнатной температуре в течение 1-24 ч. 2 табл. Пример 1. 4 , 7 -Ангидро-5 - - -хлор-4 -(-оксигризеоловая кислота. 50 мг гризеоловой кислоты растворяют в 2 н. водной гидроокиси натрия, и раствор охлаяздают льдом. Добавляют 50 мл насыщенного водного раствора хлора при охлаждении льдом и перемешивании на протяжении 3 ч. В конце данного периода времени растворитель отгоняют и ocj aTOK доводят |ДО значения рН 12-13 с помощью наСО 4: а: 00 4 Ю to ы

Испытуемое соединениеДоза, мг/кг

10 Г 30 j 50 I 100

Дибензгидрил-4 ,7 -ангидро-5 - бром-4 -°(-оксигризеолат+ +++ +++ +++

Таблица2 Испытуемое соединение Доза, Время на восстановление, с

мг/кг - - ----- -|- -- ----«- -« -- - ----

Защитньй рефлекс Самопроизвольная двигательная активность

Отсутствует контроль - 71,4+29,3 , 185,9+51,1 Дибензгидрил 4,7 -ан-.

гидро-5 -с(-бром-4 -о(-оксигризеолат10 20,9+2,972,8+15,7

(Р 0,05)