Способ получения производных гризеоловой кислоты Советский патент 1990 года по МПК C07H19/16 C07D493/04 C07D405/06 C07D493/04 C07D473/00 C07D307/77 

Изобретение относится к способу получения производных гризеоловой кислоты - новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине.

Цель изобретения - способ получения новых производньгх гризеоловой кислоты, обладающих низкой токсичностью и более высокой способностью ингибировать активность фосЛо-,

диэсстеразы (PDE) циклического аденозин-монофосфата ().

йГ Дибензгидрип N , N ,0 ,0 -тетрабензоилгризеолат.

7,8 г дибензгидрид гризеолата растворяют в безводном пиримидине. К .этому раствору при охлаждении льдом добавляют 18,5 мл бензоил хлорида. смесь оставляют стоять при комнатной те тературе в течение 16 ч с пре

04

1600632

дохранением ее от влаги. Продукт реакции затем охлаждают льдом и добав- ляют 10 мл воды. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель отгоняют при пони- венном давлении. Остаток растворяют смеси 100 мл этилацетата и 50 мл оды, органический (1лой отделяют, Промывают разбавленн ой соляной кие- ю 4отой, водой, водным раствором би- Карбоната натрия, насышен шш водным раствором хлористого натрия. Органический раствор отделяют, сушат над безводным сульфатом магния. Раство- fs итель отгоняют при пониженном ;авлении, бледно-желтый остаток растворяют в небольшом количестве хлористого метилена, к которому затем Добавляют этанол. Растворитель от- 20 |гоняют при пониженном давлении медленно с использованием аспиратора,, iB остатке - желтоватое порошкообразное вещество. Вещество отфильтровывают, промывают этанолом, сушат. Но- 25 лучают 9,1 г целевого продукта в виде желтоватого порошка (выход 92,5%)J I Пробу для анализа сушат модифика- ;цией с бензолом после очистки хроматографией на колонке с силикагелем, зО дня элюирования используют 10%-ный раствор ацетона в бензоле (по объему).

Спектр ультрафиолетового поглоше- ния (метанол), Д мякс - (22000) . Спектр ЯМ (гексадейтериро- 35 Званный диметилсульфоксид), О , млн, дол.: 5,63 (1Н, дублет, J 3,3 Гц), 6.04 (1Н, дублет, J 6,6 Гц), 6,13 (1Н, синглет),6,63 (1Н, дублет дуб- :летов, J 3,0 и 6,6 Гц), 8,63 (1Н, 40 сингл ет), 8,89 (1Н, синглет).

Соединения по примерам 2-5 получают аналогично примеру 1, причем вы- бирается соответствуюший хлорангид- 45 РИД кислоты или ангидрид кислоты вместо хлористого бензила.

И р и м е р 2. Дибензгидрил N,.N ,О ,0 -тетра п-- толуолгризеолат.

Спектр ультрафиолетового погло- Q щения (метанол), макс Сс) : 247 (49700), 275 плечо (32900). Спектр ЯМР (гексадейтерированкый диметил- . сульфоксид) ,5млн.дол.: 5,63 (1Н, дублет, J 3,0 Гц); 6,00 (1Н, дуб- лет, J 6,0 Гц); 6,13 (1Н, синглет), 6,62 (1Н, дублет,дублетов, J - 3,0 и 6,0 Гц), 8,63. (1Н, синглет), 8,88 (1Н, синглет).

П р ..

м е р 3. Дибензгидрип N, тетра-п-хлорбензош1гризеN олат.

макс , нм (6): 248(56400), 275 плечо (31700). Спектр ЯМР (гекса- дейтерированный диметилсульфоксид) с,.млн.дол.: 5,70 (1Н, дублет, J 3,0 Гц), 6,00 (1Н, дублет, J 6,0 Гц), 6,11 (1Н, синглет); 6,62 (1Н, дублет дублетов, J. 3,0 и 6,ОГц) ;:7,05 (IH, синглет), 8,68 С1Н, синглет); 8,89 (1Н,синглет).

Пример 4. Дибензгидрил N , N,, О -тетра-п-нитробеноилгризеолат.

Спектр ультрафиолетового поглощения (метанол), /«акс s нм (f): 261 (57400). Спектр ЯОТ (гексаДейтериро- ванный диметилсульфоксид), ff , млн. дол.: 5,78 (1Н, дублет, J 3,0 Гц); 6,07 (1Н, дублет, J 6,0 Гц), 6,16 (1Н, синглет), 6,62 (1И, дублет дублетов, J 3,0 и 6,0 Гц), 8,75 (1Н, синглет), 8,97 (Ш, синглет).

Пример 5. Дибензгидрид N,N,, 0 -тетра-п-анизоилгризео- лат . 1

Спектр ультрафиолетового поглощения (метанол), 1 макс нм (() s 264 (53100), 273 (52400), 275 плечо (35000). Спектр ЯМР (гек.садейтери- рованный диметилсульфоксид), ( , млн.дол.: 5,64 (1Н, дублет, J 3,0 Гц), 5,98 (1Н, дублет, J 6,0 Гц), 6,П (1Н, синглет); 6,6 (1Н, широкий мультиштет), 8,65 (1Н синглет), 8,85 (1Н, синглет).

Проведены биологические испытания соединений, полученных в услови предлагаемого способа. Токсичность ,

Подопытными животными были самцы крыс штамма Фишер. Крыс распределяли по группам по пять крыс для каждого опыта. Введенное в дозе 200 мг/кг испытуемое соединение ( дибензгидрил М,К,,0 -тетрабензоилгризеолат) не проявляло никаких признаков токсичности .

Гризеоловая кислота, введенная в дозе 100 мг/кг, в первые два дня была 0/5, после 3 дней -3/5.

Таким образом, соединения по изобретению менее токсичны, чем гризеоло- вая кислота и могут быть отнесены к категории малотоксичных.

Соединения по изобретению испытывались на фосфодиэстеразную (PDE) ингибиторную активность.

Испытание осушествлялось при использовании в основном методе Ричард В качестве соединения сравнения использован аналог по действию - тео- . мллин. В качестве источника сАМР РД . использовался неочищенный энзиматиче ский раствор, взятый из мозга крыс.

В качестве субстрата использовалс меченый 6 сАМР, он применялся в 0,2 М буферном растворе Трис-соляной кислоты (рН 8,0) в количестве, доста точном для получения конечной конценрации 0,14 мкМ. Трис представляет собой трис-(оксиметил)аминометан. Раствор субстрата смешивался с соответствующим количеством испытуемого соединения, растворенного в 2-5 мкл диметилсульфоксида, и с 20 мкл раствора змеиного яда и 40 мкл неочищенного раствора энзима. Добавлялось достаточное количество Трис-соляно- I кислотного буфера для достижения общего объема 100 мкл. Смеси давали возможность реагировать при в течение 20 мин. В конце данного периода времени реакционная смесь обрабатывалась смолой Амберлит (торговая марка) , и определялся уровень остаточной радиоактивности аденозина в продукте. Эксперимент осуществлялся при ряде уровней концентрации каждого активного соедине- нения, по этим данным вычислялись величины 50% ингибирования (Igo)Эксперимент повторялся за исключением того, что вместе сАМР в качестве субстрата применялся циклический гуанозин-монофосфат .(cGMP) . Также вычислялась величина Isо против cGMP PDE.

Результаты показаны в таблице.

Из таблицы видно, что соединение по изобретению более эффективно чем теофиллин ингибируют сАМР PDE и cGMP PDE.

Проведенные испытания показали, что соединения, полученные в условиях Предлагаемого способа, малотоксичны и обладают более высокой фосфодиэсте- разной ингибиторной активностью чем аналог по Действию - теофиллин.

Формула и.3 обретения

Способ получения производгшх гри- зеоловой кислоты формулы

Rt-N-Ri N

N

где R - бензоил незамещенный или замещенный в п-положении галоидом, метилом, метокси- или нитрогруппой, Р-2 - бензгидрил,

отличающийся тем, что

соединение формулы

45

R20oc- o H

Изобретение касается гетероциклических соединений, в частности способа получения производных гризеоло- вой кислоты общей формулы I, где R - бензоил, незамешенный или замешенный в п-положении галоидом, метилом, метокси- или нитрогруппой; RQ- бенз- гидрид, обладающих биологической активностью, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых более активных и менее токсичных соединений указанного класса. Синтез ведут реакцией соединения формулы 11, где RU бензгидрил, с аци- лирующим агентом ,где X - галоид, R/ - см.выше, в присутствии агента, связываюшего кислоту, такого как пиридин, предпочтительно при комнатной температуре. Новые соединения обладают способностью ингибировать активность фосфодиэстеразы циклического аденозин-монофосфата (Igo 158- 177 мкмоль) и циклического гуанозин- монофосфата (IgQ 153-177 мкмоль) против соответственно 360 и 196 мкмоль для теофиллина. (Л

где Н - бензгидрил,

подвергают взаимодействию с ацилирующим агентом

Rr X

где X - галоид;

R имеют указанные значения в присутствии агента, связываюсего кислоту, такого как пиридин, предпочтительно при комнатной температуре.