Способ получения производных инденопиримидинов Советский патент 1989 года по МПК C07D239/70 

1

Изобретение относится к способу получения п роизводных инденопиримиди- ;нов - новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине.

Цель изобретения - способ получения Жовых производных инденопиримиди- нов-малотоксичных соединений,облада- Ю1ЦИХ более высокой способностью подав- :лять действие фермента ароматазы.

ы

: П р и м е р 1. 8-Хлор-5-(4-хлор- фенил) -5Н-индено D ,2-1)Зпиримидин.

Раствор 4,0 rot. ,о/,бис(4-хлорфе- нил) -5-пиримидинметанола в 25 мл ме- тансульфокислоты перемешивают в атмосфере азота в течение 18 ч. Раствор вливают в раствор бикарбоната натрия :h экстрагируют этилацетатом. Органи- |ческий экстракт промывают насыщенным jbacTBopoM хлористого натрия, высуши- |вают над сульфатом магния и выпарива ;Ют в вакууме. После перекристаллиза- |Ции из смеси этилацетат/изооктан по- Глучают 1,95 г желаемого указанного IB названии продукта, имеющего т,пл. Il58-163 c. Рассчитано, %: С 65;,20, Н 3,22;

:N 8,94.

С,тН,„С1,.К2.

Найдено, % , С 65,03 Н 3,29; N 8,73.

: В примерах 2-6 нижеследующие сое- 1динения получают из соответствующего пиримидинметанола согласно методике, описанной в примере 1. I П р и м е р 2. 5-(4-Хлорфенш1)- |5Н-индено 1,2-d пиpимидин, выход 73%, т.пл. 140-140,5°С.

Рассчитано,%: С 73,25; Н 3,98; N 10,05.

С,Н,, CIN.

Найдено,%: С 73,29; Н 3,72; N 9,87.,,

П р и м е р 3, 8-Х,пЬр-5-фенил-5Ниндено 1 )2-d}пиpимидин, выход 0,3%, т.пл. 13.5,5-137 0.

Рассчитано, %: С 73,25; Н 3,98| N.10,05.

,,C1N.

Найдено, %: С 72,19; Н 3,81; N 9,877

П р и м е р 4. 5-(4- Фторфенил)8- (трифторметил)-5Н-индено 1,2-d пиримидин, выход 0,8%, т.пл., 146 .

Рассчитано,%: С 65,46; Н 3,05; N 8,48.

С ..

Найдено,%: С 65,18; Н 3,11; N8,21. „

П р и м е р 5. 8-Фтор-5 4-(три- фторметил) фенил -5К-индено 1,2-d пиримидин, выход 33%, т.пл. 169... 1704. ,

Рассчитано, %: С 65,46; Н 3,05; N 8,48.

.

Найдено.%: С 65,7-4; Н 3,23; N 8,48.

П р и м е р 6. 8-Фтор-5-(4-фтор- фенил)-5Н-индено 1,2-d пиримидин, выход 77,7%, т.пл. 172-174 с. 5 Рассчитано,%: С 72,85; Н 3,60; N 10,00.

C,,H,,.

Найдено: %: С 73,04; Н 3,87; N 9,96.

10 П р и м е р 7. 5-Фенш1-5-Н-инде-: но 1,2-dЗпиpимидин.

10 г w. ,о;.-дифенил-5-пиримидинмета- нола перемешивают в 50 мл серной кислоты в течение: примерно 18ч. Раст- 15 вор вливают в лед. Полученный твер.ч дый продукт извлекают путем фильтрации. В результате получают 11 г желаемого указанного в названии продукта. После перекристаллизации из прос- 20 того диэтилового эфира получают материал с т.пл. 148-150 С.

Рассчитано,%: С 83,58; Н 4,95; N 11,49.

CnH,N,,.

5 Найдено, %: С 83,33; Н 5,17; N11,11.

В примерах 8-16 нижеследукнцие соединения получают из соответствующего пиримидинметанола согласно методи- 0 ке, описанной в примере 7.

Пример., 8. 5-(2,4-Дихлор- фенил)-5Н-икдено D,2-dlпиpимидин, выход 80%, т.пл. 107-108°С.

П р и м е р 9, 5-(3-Фторфенил)- 5 -5Н-индено 1,2-djпиримидин, выход 21%, т.пл. 121°С„ Спектр протонного ЯМР соответствует структуре желаемого продукта.

Пример 10. 5-(2,5-Дихлорфе- 0 нил)-5Н-индено D,2-d пиримидин, т.пл. ..

Рассчитано, %: С 65,20; Н 3,22| N 8,94.

с,7Н,оСин.

5 Найде.чо, %: С 65,31; Н 3,22: N 9,07.

Пример 11. 5-(3,4-Дих.аорфе- нил)-5Н-индено 1,2-d пиримидин. :ьгход 42%, т.пл.

0 Рассчитано,%: С 65,20; Н 3,22; N 8,94, ,

C,,H,Cl2N

Найдено,%: С 65,29; Н 3,25; N 8,66.

5Пример 12. 5-(4-Хлорфенил)7-метокси-5Н-индено 1,2-d пиpимидин, выход 58%, т.пл. .

Рассчитано,%: С 70,02; Н 4,24;

N 9,07.

C,sH,,ClN40.

Найдено, %: С 69,85; Н 4,50;

N 8,84.

Пример 13. 5-(4-Фторфенил)-7- s метокси-5Н-индено l ,2-d пиримидин,

выход 74%.

Рассчитано, %: С 73,96; Н 4,48; N 9,38.

Найдено, % N 9,51.

С 73,70; Н 4,44;

.14701856

жащие 0,1 мкМол 4-андростен-З,17-дио- на , 100000 dpm 1 ,2/ H/ aндpocтeндиo- нa, микросомы и систему генерирования NAD PH. Концентрация испытываемых ингибиторов составляла от 5 до 10000 нМол. В данном испытании ароматизация андростендиона приводит в результате к образованию , 10 который вьщеляют путем экстракции образцов хлороформом и обработки водной фазы древесным углем для удаления свободного стероида. Подсчет осуществлялся с помощью сцинтилляционного

Пример 14. 5-(2-Фторфенил)-

5.Н-инденоГ1,2-с1 пиримидин, выход 67%,J5 спектрометра, процент ингибирования

, « , «г- . i/Nr«i TT T Toiuf П-ПЯПМР.НИЯ ПйННЫХ

т.пл. 124-125 С.

Рассчитано,%: С 77,83; Н 4,23; N 10,68.

С „ Н „ FN 2..

Найдено,%: С 77,95; Н 4,32; N 10,82.

Пример 15. 5-(4-Фторфенил)- 5Н-индено 1,2-d пиримидин, выход 87%, т.пл. 128 С. Спектр протонного ЯМР соответствует структуре желаемого продукта.

П р и м е р 16. 5-(3-Хлорфенил)- 8-метокси-ЗН-индено 1,2-d пиримидин, выход 2,6%, т.пл. 147°С.

Рассчитано, %: С 70,02; Н 4,24; N 9,07.

.

Найдено,%: С 69,74; Н 3,95; N 8,85.

Проведены биологические испытания производных инденопиримидинов, полученных описываемым способом.

Соединения, отвечакщие настоящему изобретению, используются для предупреждения или для лечения зависящих от зкстрогена заболеваний, включающих рак молочной железы, млекопитающих животных, благодаря их способности ингибировать ферментную арома- тозу. Было показано, что данные соединения имеют значительно меньщую вероятность индуцирования увеличения печеночнйх микросомных ферментов, таких как цитохром Р-450. Способность

определяют путем сравнения данных результатов с образцами, инкубируемыми без ингибитора. Силу действия оп- . ределяют исходя из концентрации инги- 20 битора (нМол), необходимой для 50%-ного ингибирования ферментной активности (ЕСуд), когда концентрация субстрата (андростендиона) составляла О,1 мкМол.

25 Ниже представлены значения ЕС о некоторых соединений формулы .(I). |(ингибирование ароматазы, определяеКонцентрация соединения (нМол)-неингибировать ароматазу была продемон- обходима для 50%-ного ингибирования

стрирована путем использования модификации выделенной яичниковой микросомы крысы согласно методу Броди. В данной испытательной системе яичниковые миюросомы получены от крыс, подвергнутых обработке гонадостропн- ном сыворотки беременной конематки. Подвергаемые испытанию соединения вводят в реакционные ампулы, содерактивности ароматазы, когда концентрация субстрата составляет 0,1 мкМол.

Благодаря способности соединений, отвечающих предлагаемому способу, ин- 55 гибировать ферментную ароматазу они способны ингибировать синтез экстро- гентов в организме мпекопитакщих животных, и ввиду этого эти соединения находят полезное применение для леспектрометра, процент ингибирования

i/Nr«i TT T Toiuf П-ПЯПМР.НИЯ ПйННЫХ

определяют путем сравнения данных результатов с образцами, инкубируемыми без ингибитора. Силу действия оп- ределяют исходя из концентрации инги- битора (нМол), необходимой для 50%-ного ингибирования ферментной активности (ЕСуд), когда концентрация субстрата (андростендиона) составляла О,1 мкМол.

Ниже представлены значения ЕС о некоторых соединений формулы .(I). |(ингибирование ароматазы, определяеКонцентрация соединения (нМол)-необходима для 50%-ного ингибирования

активности ароматазы, когда концентрация субстрата составляет 0,1 мкМол.

Благодаря способности соединений, отвечающих предлагаемому способу, ин- гибировать ферментную ароматазу они способны ингибировать синтез экстро- гентов в организме мпекопитакщих животных, и ввиду этого эти соединения находят полезное применение для лечения зависящих от экстрогена заболеваний, таких как рак молочной железы

Активность данных соединений в условиях ин виво продемонстрирована на нижеследующих испытательных системах.

Ингибирование синтеза зкстрогена у крыс.

Несозревших самок крыс Вистар I(весом 45-55 г) разделяют на контроль ные и испытываемые группы, по 2-8 кры- ;сы в каждой группе. Испытываемые сое- :динения вводят в течение семи дней Iежедневно в кукурузном масле, ввод Осуществляют с помощью желудочного ;зонда через нос. Контрольные живот- 1Йые получают кукурузное масло, не со- I держащее испытываемого соединения. I Начиная с четвертого дня испытания всех животных подвергают обработке испытываемым соединением и в половину {контрольных животных вводят путем подкожной инъекции 1,0 мг тестостерон пропионата в кукурузном масле. В орга низМ остальных контрольных животных вводят лишь эквивалентный объем Iкукурузного масла. На -седьмой день Iиспытания в организм тех крыс, кото- |рых подвергают обработке тестостерон- гЬропионатом, вводят путем подкожной Гинъекции 100 мк Ci (Н/ -тестостерона Iв 50 мкл смеси солевой раствор - эта- нол в соотношении 3:1.

Спустя два часа животных умерщвля- путем обезглавливания. Извлекают |матку, очищают .от посторонней соеди- |Нительной ткани и взвешивают. Под-.... |Вергнутые обработке кукурузным маслом |животные имеют небольшой вес матки и проявляют себя как нестимулированные или отрицательные контрольные животные. В контрольной группе живот- , ных, подвергнутых обработке тесто- стеронпропионатом, экстрогены, обра- зующиеся за счет ароматизации, стимулируют матку, что приводит в результате к увеличению ее веса. Соединения, ингибирукщие ароматизацию, приводят в результате к значительно более низкому, весу матки, чем у группы контрольных крыс, подвергнутых обработке тестостероном.

Яичники крыс, подвергнутых обра- . ботке / {{/-тестостероном, извлекают, очищают от посторонней ткани и гомо- генизируют в 2,5 мл 1,0 м1 1ол буферного раствора фосфата к.алия содержащего 3,0 мМол MgCl 6HjO, 320 мМол

д s 0 5 о

s

0

0

сахарозы и 0,25 % тритона Х-100 (полиэтиле нгликоль-п ар а-изооктилфенил о-, вый простой эфир. Ром и Хаас) при величине рН 6,5. Яичниковые стероиды экстрагируют 1,5 мп смеси толуол/ /этанол в соотношении 9:1, к которой добавляют 25-100 мкг (каждого) наме- ченногр экстрадиола, эстриола и эст- рона и примерно 1000 dpm/ эстра- диола. Образцы подвергают вихревому перемешиванию,, центрифугируют со скоростью 500 об/мин в течение 10 мин, а органическую фазу переносят в коническую ампулу. Остаточный продукт подвергают дополнительно двум экстракциям аналогичным образом. Объединенные органические экстракты выпаривают для последующей тонкослойной хроматографии.

Яичниковые белки осаждают путем добавления 5,0 мл этанола в остальную водную фазу. После инкубирования в течение ночи при температуре образцы центрифугируют со скоростью 1500 об/1-шн в течение 1.0 мин.. Поверхностный слой удаляют и твердый оса док растворяют в 0,3 нормальном гидрате окиси кал:ия.

Определение белка осуществляют согласно методу Брэдфорда, , Органический остаток от каждой /указанной экстракции снова растворяют в смеси дихлорметан/метанол в соотношении, 9: 1 . Раствор каждого образца подвергают разделению на сили. кагелевых пластинах методом тонко-, слойной хроматографии с использова- нием флюоресцентного индикатора. Пластинки проявляют первый раз смесью дихлорметан/этилацетат/метанол/уксусная кислота в Соотношении 160:38: :1,5:0 5 5 в области в пределах 3 см. сверху-пластинки. После сушки воздухом пластинки проявляют второй раз смесью дихлорметан/метанол/гидрат окиси аммония в соотношении 1.30s 19; 1,, Пластинки высушивают воздухо.ч к наблюдают в поляризованном з льтрафио- летовом свете 254 нм.

Просматриваемые визуально пятна отмечают и на пластинки наносят путем распьшения примулин (0,001% в смеси ацетон вода в соотношении 4:1), что позволяет идентифицировать дополнительные стероиды в ультрафиолетовом свете 365 нм. Пятна соскребают с пластины с помощью пипетки Пастера, заполненной стеклянной ватой, уста

новленной на вакуумной линии. Стерон ды элюируют непосредственно в сцин- тилляционные ампулы путем ввода 0,2 мл дихпорметана с последукидими двумя промывками каждый раз по 2, 2,0 мл метанола. Органический растворитель выпаривают, и в сцинтилляцион |ные ампулы вводят 10,0 мл сцинтип- ляционной жидкости. Образцы аналиэи- руют методом жидкостной сцинтилляци онной спектрометрии и вносят поправки на основе восстановления С-сте1 и- ода..

В табл. 1 приведены данные веса матки, выраженные как соответствующие веса матки обработанных лекарством (Д.Т)., нестимулированных, получивших кукурузное масло, контрольных (ис), и стимулированных, получив ших кукурузное масло, контрольных (SC) животных, которые рассчитаны по формуле: % 100 (DT - UC)/(SC- ис). Данные экстрогенов выражены в процентах, определяемых для обрабо- танных тестостероном контрольных животных.

Ингибирование опухоли молочной железы, вызванной диметилбензантраценом (ДМБА).

I Индуцируют опухоль молочной железы у самок крыс Spraque Dawley 50-60- дневного возраста путем ввода через, зонд, вставленный в нос, 20 мг 7,12- диметилбенз(а) антрацена (ДМБА). Примерно через шесть недель после ввода ДМБА проводят пальпацию молочных же- лез с недельными интервалами для обiнаружения появления опухолей. После появления одной или нескольких опухо- лей, которце удалось измерить, животных отбирают на экспериментирование. Была сделана попытка равномерно распределить животных в обрабатываемых и контрольных группах по размеру опу- холей, так что не начинают проводить эксперименты ни с одной из групп, у которой средний размер опухоли значи- тельно бы превышал средний размер другой какой-либо группы. Каждая i контрольная и испытываемая группа включала по 5-8 крыс. Каждое испытываемое соединение вводят в кукурузном масле раз в день. Каждый эксперимент включает группу контрольных крыс7 имекщих опухоли, в организм которых Вводят контрольное масло, как носитель, через зонд, вставленный в нос. Опухоли измеряют в начале эксперимен

с ю

ff 20 25

30

лп j

35

50

5

тов, и обычно их площадь составляет примерно 15-100 мм. Площадь каждой опухоли рассчитывают, умножая самый короткий и самый длинный диаметры опухоли. Обработку животных и измерение опухолей продолжают в течение 4-6 недель, и определяют конечную площадь опухолей. Изменение средней площади опухоли измеряют при вводе каждого соединения (и у контрольных животных) при каждой дозе.

Анализируют среднее изйеяение опухоли, иепользуя t-испытание Дан . нетта (Dunnett st-test).

Результаты зтих испытаний приведены в табл. 2.

На примере 8-хлор-5-(4-хлординнл)- 5Н-индено 1,2-d1 пиримидина показано, что в дозе 50 мг/кг соединения по изобретению не вызьгаают в течение трех недель каких-либо признаков токсичности. Так как такая концентрация в несколько раз больше концентрации при которой соединения по изобретению не эффективны для уменьшения размера опухоли, соединения по изобретению имеют большую границу безопасности между эффективной дозой против рака и самой низкой токсичной дозой. Таким образом производные инденопирим мидинов, полученные в условиях описываемого способа, могут быть отнесены к категории малотоксичных.

Ниже приведены примеры рецептур. Пример 1. Приготавливают . твердые желатиновые капсулы, используя нижеследующие ингредиенты, мг/на капсулу:

8-Хлор-5-(4-хлорфенил)- 5Н-индено- 1,2-d пиримидин250Высушенный крахмал 200 Стеарат магния10 Всего 460 Указанные ингредиенты смешивают и вводят в твердые желатиновые капсулы в количестве 460 мг.

Пример 2. Капсулы, каждая содержащая по 20 мг медикамента, приготавливают следующим образом, мг/на капсулу:

8-ФТОР-5- 4-(трифторметил)фенилЗ-5Н-индено

fl ,2-ё пиримидин20

Крахмал89

Микрокристалллическая

целлюлоза89

Стеарат магния2

Всего200

Активный ингредиент, целлюлозу, крахмал и стеарат магния перемешива- ют пропускают через стандартное аме риЛанское сито 45 меш (0,35 мм) и вводят в твердые желатиновые капсулы в количестве 200 мг. jn р и м е р 3. Капсулы, ка.ждая сс ;ср™ал;аг1 100 мг активного ингреди- eHi a, приготавливают следующим об- , мг/на капсулу;

; 5-Фенил-5И-индено 1 ,2-d пиримидин100

;Полиоксиэтиленсорбитан- ;моноолеат, мкг50

; Порошок крахмала250

Указанные ингредиенты тщательно пе)ремешива.ют и смесь вводят в твер- дьф желатиновые капсулы,.

При м- в р 4. Таблетки, каждая с Ь одержанием 10 мг активного ингре- , приготавливают следзтощйм об- раЬом, мг/на таблетку;

I 8 -Хлор-5-(4-хлорфенил) ; 5Н-индено D,2-ё пиримидин- { 5-ол 10

Крахмал ,45

Микрокристаллическая целлюлоза35

Поливинилпирролидон (в виде 10%-ного водного )4

Натрийкарбоксиметилкрахмал 4,5 Стеарат магния 0,5

Тальк1

Всего-100

Активный ингредиент 5 крахмал и ... це1плюлозу пропускают через стандартное американское сито 45 меш (0,35 мм и тщательно перемешивают. -Раствор поливинилпирролидона перемешивают с образующимися порошками, которые затем пропускают через сита (стандартное американское) 45 меш (0,35 мм Об разующиеся гранулы высушивают при 50 -60 С и пропускают через стандарт- HQie американское сито 18 меш (1,00 мм

атём натрийкарбоксиметилкрахмал, Iсгеарат маг-ния.и тальк, пропущенные

американское сито № 60 меш .(0,25 мм), вводят в гранулы., которые по1сле перемешивания прессуют и табле тирующей машине с образованием таблеток, весом кажд.ая 100 мг.

П р и м е р 5. Приготавливают ре- це|птуру таблеток, используя указан- нМе ниже ингредиенты, мг/на таблетку

(4-Фторфенил)-5Н- индено-- 1,2- пиримидин-5- . илДацетамид250

Микрокристаллическая целлюлоза400

Плавленная двуокись кремния10

Стеариновая кислота . 5 Всего665

Данные компоненты перемешивают и прессуют в форме таблеток весом каждая 665 мг.

П р и м е р 6. Свечи, содержащие каждая по 25 мг активного ингредиента, -приготавливают следующим образом мг/на свечу: . , 5,8-Дифтор-5-(2-хлор- 4-фторфенил)-5Н-индено ,2-d пиридин25

Глидериды насыщенных жирных кислот до 2000 Активный ингредиент пропускают через стандартное американское сито 60 меш (0,25 мм) и суспендируют в глицеридах насыщенных жирных кислот, предварительно расплавленных, исполь зуя для этого минимально необходимое количество тепла. Затем смесь вливают в форму для свечи, обеспечивающую номинальную массу свечи 2 г, и охлаждают,

Пример. Суспензии, содержащие (каждая).по 5 мг медикамента на 5 миллилитровую дозу, приготавливают следующим образом (на 5 мл суспензии) :

5-(4-Трифторметил- фенил)-8-(трифторметил 5К-индено 1, пиримидин, мг

Натрийкарбоксиметил-. целлюлоза, мг Сироп, мл Раствор бензойной кислоты, мл

Ароматизирующее средство Желаемое

колкче-

Окрашивающее средство

ство

Желаемое количествоДо 5

Очищенная вода, мп

Данный медикамент пропускают че« рез американское стандартное сито 45 меш (0,35 мм) и смешивают с нат- рийкарбоксиметилцеллюлозой и сиропом до образования однородной пастообразной массы.

Раствор бензойной кислоты, арома- тиэирунлдее средство и окрашивающее средство разбавляют некоторым количеством воды и вводят с перемешива- .нием в эту массу. Затем добавляют воду в количестве, достаточном для получения необходимого объема.

П р яме р 8. Приготавливают - раствор аэрозоля, содержащий следующие компоненты, мас.%:

5-(4-Хлорфенил)-8-ме- X токси-5Н-индено 1,2-4

пиримидин-5-ол о 25 Этанол29 75

Растворитель 22 (хлордифторметан) 70 Активное соединение смешивают с этанолом, и смесь вводят в порцию растворителя, охлаждают до температу ры -30 С и переносят в наполняющее устройство. Затем в емкость из нержа веющей стали вводят необходимое количество этого препарата и дополнительно разводят остальной порцией раство рителя.. К емкости подсоединяют клапанное устройство.

Проведенные испытания показали, что производные инденопирамидина, полученные в условиях описываемого способа, малотоксичны, значительно активнее тормозят новообразования молочнЫх железах, чем аминоглютет- мид (2-12 раз), значите льно уменьают размер новообразований в дозе

-.2

1470185

14

10-30 мг/кг, в то время как аминоглю- тетимид в дозе 90 мг/кг незначительно уменьшает размер новообразований.

Формулаизобретения

, с

Способ получения производных ин- денопиримидинов общей формулы II

- 1

1

где R водород, хлор, фтор, метокси

или трифторметил;

20 ( - водород, хлор, фтор или трифторметил;

R - водород.или хлор, отличающийся тем, что

ег.,о6-дифенил-5-пиримидинметанол общей формулы

г он /л

kr-s:/ I

25

30

к

где k,R и Rj имеют указанные зна- 35 чения, подвергают дегидратации.

Таблица 1

мг/кг X 7 дней; ; (DT - UC)/(SC-UC); + Значительно отлично от контрольного, ,Q5,

мг/кг, вводимая ежедневно через зонД, вставленный

в нос; + Статистически от контрольного, ,05,

Таблица2