Способ получения липоксигеназы Советский патент 1989 года по МПК C12N9/02 C12N9/02 C12R1/465 

1

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения липоксигенозы, способной трансформировать жирные кислоты различной насьпценности.

1зобретение может быть применено в микробиологии, фармакологии, медицине, и медицинской промышленности.

. Цель изобретения - повышение активности целевого продукта и ускоре- нне процесса.

Изобретение заключается в использовании в качестве продуцента липок- сигеназы штамма Streptomyces spheroides ВКПМ8-573, известного ранее как продуцента протерлитических ферментов, рН среды в процессе культивирования поддерживают равным 8,0, оптимальным для биосинтеза фермента.

Пример 1. Штамм S.spheroi- das ВКПМЗ-573 (а.с. № 1010127) культивируют на среде следующего состава, мас.%: NaNOj 0,1 ; MgSO 7НдО 0,01 ; KKjFO 0,1; соевое масло 55 при рН-8,0 (доведение рН осуществляют 10 Н NaOH, чтобы не вводить новых ионов). Длительность культивирования составляет 3 сут. (72 ч). Полученные данные сведены в таблицу

Активность липоксигеназы определяют при помощи электрода Кларка ло поглощению кислорода, а в качестве субстрата используют линолевую и арахидоновую кислоты.

4; м IND ел

Пример 2о Актиномицет S.sphe roides S-573 выращивают на скошенной агаризованной среде, содержащей, г/л: кукурузньш экстракт 10; крахмал растворимый 10; аммоний сернокис льй 3; натрий хлористый 3; кальций углекисльй 2; агар 20; рН 8 при 28°С в течение 7 дней.

Посевным материалом служит суснен ЗИЛспор культуры S.spheroides ВКМП5-573. В 1 мл суспензии должно содержаться около 2 млрд«спор (определяется по стандарту мутности) Посевной материал вносят в количестве 1% синтетической среды известного состава, содержащий, г/л: глюкоза 4.0; калий фосфорнокислый (однозаме- щенный) 2; магний сернокислый 5,7; аммоний сернокислый 1,25, рН 8, ос-. тальное вода.

Выращивают на качалках 80- 200 об/мин в колбах емкостью 750 мл со 100 мл среды в каждой в течение

48 ч при 28 С.

Мицелий отделяют от культуральной жидкости при помощи центрифугирования в течение 10 мин о При 4000 оборотов в минуту. Отделенный мицелий промывают трижды физиологическим раствором; Далее мицелий разрушают ультразвуком в течение 5 мин при интенсивном охлаждении и центрифугирую в течение 20 мин, при 18 тыс. оборотов в минуту. Полученный суперна-

тант обладает активностью 3,0 ед/г - биомассы

За единицу активности принято количество фермента, необходимого для поглощения 1 ммоль кислорода при трансформации субстрата в течение минуты при 30 С. I ..

Таким образом, способность к синтезу липоксигеназы у предлагаемого штамма вьш1е, чем у известного, что делает штамм Str.spheroides перспективным для применения в микробиологической и медицинской промышленности для получения активной дипоксиге-. назы.

Предлагаемое изобретение также может быть использовано в биохимии, физиологии животных и фармакологии.

Формула и-зобретения

Способ получения липоксигеназы, предусматривающий культивирование продуцента на питательной среде .до достижения максимального уровня активности, отделение мицелия и разрушение его, отличающийся тем, что, с целью повьтения активности целевого продукта и ускорения процесса, в качестве продуцента используют штамм Streptomyces spheroides ВКПМ8-573, а культивирование ведут на питательной среде с рН 8,0

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения липоксигеназы, способной трансформировать жирные кислоты различной насыщенности. Перспективно применение продуктов реакции таких ферментов при предупреждении и лечении тромбоэмболических и геморрагических состояний человека, животных. Целью изобретения является повышение активности целевого продукта и ускорение процесса. Цель достигается направленным отбором штамма STR.SPHEROIDES ВКПМS-573 (М8-2) ПО ПРИЗНАКУ УВЕЛИЧЕННОГО СИНТЕЗА ЛИПОКСИГЕНАЗЫ. ШТАММ STR.SPHEROIDES М8-2 НА ИЗВЕСТНОЙ СИНТЕТИЧЕСКОЙ СРЕДЕ ПРОСТОГО СОСТАВА К 48 Ч КУЛЬТИВИРОВАНИЯ НА СРЕДЕ С РН 8,0 СТАБИЛЬНО ОБРАЗУЕТ ВЫСОКОАКТИВНУЮ ЛИПОКСИГЕНАЗУ В КОЛИЧЕСТВЕ 3,0 ЕД/Г БИОМАССЫ. 1 ТАБЛ.