Способ спектрофотометрического количественного определения но-шпы, выделенной из биологического материала Советский патент 1990 года по МПК G01N33/48 G01N21/78 G01N33/52 

Изобретение относится к фармации, точнее ic химико-токсикологическому анализу, а именно к количественному определению но-шпы, выделенной из биологического материала.

Целью изобретения является повышение специфичности способа.

Способ осуществляют путем последо- в ательного добавления к 10,0 мл спиртового раствора но-шпы, выделенной из биологического материала ,0,1 мл 1%-но- го раствора гидроксида аммония и . 0,1 мл концентрированной соляной кислоты, снятия спектров но-шпы в прото- нированной и непротонированной формах.

При добавлении 0,1 мл 1%-ного пад- роксида натрия но-шпа переходит в непротонированную форму, которая не имеет поглощения при длине волны 360 нм. В этом случае вел1тчина изме- рейнсй относительно растворителя оптической плотности равняется оптической плотности примесей ()- добавлении к 10,0 мл раствора но-шпы 0,1 мл концентрированного раствора соляной кислоты переходит в протонированную форму с максимумом поглощения в области длин волн 350- 360 нм. Измеренная относительно растворителя при дл1ше волны 360 нм оптическая плотность (Д,,.) складываетst

ся из оптической плотности но-шпы (Д| ) и оптической плотности примесей (Д j,). Зная последнюю величину находят оптическую плотность но-шпы

(п ).

.Wел ю

Н 360 360 ДгЗ«о

Оптические плотности спиртовых liacTBopoB примесей при последовательном добавлении 0,1 мл 1%-ного раст- вора аммония гидроксида и 0,1 мл концентрированного раствора соляной кислоты не изменяются.

Количественное содержание но-шпы (Tjf) в исследуемых растворах (в мкг) определяют по стандартному раствору, ёодержащему определенное количество н|о-шпы (Т) по формуле

т Д н ato T ст

J.

нет ate

) нстз«Г оптические плотности спиртовых -растворов но-шпы соответственно в опытной и стандартной пробах при длине волны 360 нм. Под- чйняемость закону Бугера наблюдается в интервале концентрации 5-50 мкг/мл . Пример 1. К 10,0 мл мочи до- б$вляли 0,2 мл О,1000%-ного раствора нб-шпы в 0,01 н.растворе соляной кис- лфты, 2,0 мл 0,1 н.раствора соляной КИСЛОТЫ, 10,0 мл гексана, встряхивали в течение 5 мин, центрифугировал : 5|мин при 2,5 тыс. об/мин. Гексано- взЬо фазу отделяли, водную фазу пвДще- л4чиваИи 1 н.раствором гвдроксвд на- тркя до рН 10-11 по универсальному индикатору, прибавляли 10,0 мл гексана, встряхивали в течение 5 мин, центрифугировали при 2,5 тыс.об/мин. Сг(ой органического растворителя от- де1ляли, добавляли к нему 1 каплю i н. спиртового раствора соляной кислоты, пе ремешивали и испаряли под током во йдуха при 60° С. Сухой остаток раст- воряли в 10,0 мл спирта. Параллельно с опытными пробами проводили холостые пробы с мочой, не содержащей но-шпы. Стандартные пробы готовили путем испарения 0,2 мл О,1000%-ного раствора но-шпы и растворения сухого остатка в-10,О мл спирта. Для сравнения из- вестного способа с предлагаемым сначала измеряли оптические плотности спиртовых растворов при длине волны 30,5 нм с помощью спектрофотометра в односантиметровых кюветах проводили исследования по предлагаемому способу, для этого добавляли ко всему объему спиртового paiSTBopa 0,1 мл раствора гидроксида аммония, перемешивали и измеряли оптическую плотность при длине волны

5

10

0 0 5

360 нм (Д), затем добавляли ко всему объему раствора 0,1 мл концентрированного раствора соляной кислоты и вновь измеряли оптическую плотность при длине волны 360 нм (Д).

Результаты количественного определения но-шпы, вьиеленной из мочи, приведены в табл. 1.

Как видно из табл. 1, известный способ по сравнению с предлагаемые да- . ет завьппенные результаты (в среднем :на 18%) за счет влияния примесей на результаты количественного определе- J5 иия.

Пример 2. К 5,0 г измельченной на мясорубке трупной печени добавляли 0,5 мл О,1000%-ного раствора но-шпы в 0,01 н. растворе соляной кислоты, тщательно перемешивад{1 и оставляли на 2 ч при комнатной температуре. После этого получали щелочные хлороформные .извлечения по методу Васильевой А.А. (объем реактивов уменьшали пропорционально навеске биологического материала). Для подщела- чивания использовали 1 н. раствора гидроксида натрия. К щелочному хлороформному извлечению добавляли 1 кап- JBO 1 н. спиртового раствора соляной кислоты и органический растворитель испаряли под током воздуха при . Сухой остаток растворяли в 10,0 мл спирта. Параллельно с опытными пробами проводили холостые пробы с трупной печенью, не содержащей но-шпы. Стандартные пробы готовились путем испарения 0,1 мл О,1000%-ного раство- ра но-шпы в 0,01 н. растворе соляной кислоты и растворения сухого остат- Ка в 10,0 мл спирта. Далее поступали, к огшсано в примере 1.

Результаты количественного определения но-шпы, выделенной из ткани трупной печени по методу А.А. Васильевой, приведены в табл. 2.

Из табл. 2 видно, что известный способ по сравнению с предлагаемым дает завышенные результаты (в среднем на 65%) за счет влияния примесей.

Формула изобретения

Способ спектрофотометрического количественного определения но-шпы, выделенной и з биологического материала,, включающий УФ-спектрофотометрическое

измерение экстракта биологического, материала с последующим расчетом по калибровочной кривой, отличающийся , что, с целью повышения специфичности способа, измеряют

величину дифференциальной оптической плотности путем регистрации разности абсорбции растворов но-шпы в протонированной и непротонированной формах при длине волны 360 нм.

Таблица 1

Способ относится к медицине, точнее к химико-токсикологическому анализу. Цель - повышение специфичности. Способ осуществляется путем добавления к 10,0 мл спиртового раствора но-шпы 0,1 мл 1% раствора гидроксида аммония / образование непротонированной формы но-шпы/ и измерения величины оптической плотности раствора при длине волны 360 нм, затем к раствору добавляют 0,1 мл концентрированного раствора соляной кислоты/ образование протонированной формы но-шпы/ и повторно измеряют величину оптической плотности раствора при указанной длине волны. Для количественного определения но-шпы, выделенной из биологического материала, используют разность при вычислении оптической плотности непротонированной формы из величины оптической плотности протонированной формы но-шпы при длине волны 360 нм. Табл.1,2.