Способ определения карбарила в растительном материале Советский патент 1989 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к биохимии растений, в частности к определению остаточных токсических веществ, после обработки растений пестицидами.

Целью изобретения является увеличение точности способа.

Цель достигается тем, что проводят трехкратную экстракцию биомате.риала метанолом в течение 2-3 ч и после фильтрации, упаривание раствора проводят гидролиз 20%-ным раствором едкого натрия в течение не менее 30 мин. Гидролизат подвергают перегонке с водяным паром, в нем измеряют спектро- фотометрическим методом количество (/.-нафтола и по- его содержанию определяют суммарный остаток связанного и свободного карбарила в образце.

Для осуществления способа проводят измельчение растительного биоматериала (образец хорошо измельчают или гомогенизируют), экстракцию биоматериала (трехкратная.экстракция 80%-ным метанолом на водяной бане с обратным холодильником в течение 2-3 ч); фильтрацию экстракта (на воронке Бюхнера под вакуумом); остаток на фильтре промывают двумя порциями 80%-ного метанола по 15-20 мл; концентрирование под вакуумом (на вакуумно-ротацион- ном испарителе до определенного объема); гидролиз как свободЕюго карбаг рила,,так и конюгированных форм продуктов его биотрансформации (к экстракту добавляют NaOH до получения 20%-ного раствора щелочи); перегонку с водяным паром (гидролизат подкисляют концентрированным раствором НС1 до рН 6 и перегоняют с водяным паром до определенного объема); окончание процесса перегонки проверяет с помощью 0,2%-ного раствора соли (прочньй

сл

с

сл

с о

со

со

crimiii Б или прочньп к 1асиый Г Г) ; анализ полученного раствора на спектрофотометре (3 мл раствора анализируют на спекч рофотометре СФ 26 или другого с типа при длине волны 329 им в кварцевой кювете); построение калибровочной кривой (перед анализом сублимируют нафтол, г отовят растворы точной концентрации, строят калибровочную кри- 10 вую) ; определение количества с/- нафто- ла в образце (по полученному результату спектрофотометра нахрдят количество по калибровочной кривой, в мг/кг свежего биоматериала); по су1цествующе-15 му количеству с -нафтола определяют остаточное количество связанного и свободного карбарила.

Пример 1. Готовят экстракт биоматериала - пробу биоматериала в 20

количестве 50 г, состоящего из листье и корней заранее обработанного карбарилом кукурузы, подвергают измельчению и переносят в литровую круг лодонную колбу со шлифом, добавляют 200 МП метанола и подвергают зкстракцию на водяной бане .с обратным холодильником в течение 2 ч. После фильтрации экстракцию повторяют, еще дважды. Остаток биоматериала на фильтрате промывают двумя порциями 3,0%- ного метанола по 15 кл,

О полноте экстракции продуктов биотрансформации из биоматериала и о . возможных потерях судят по уровню радиоактивности экстракта.,

В табл. I даны результаты обработки биоматериала различными растворителями.

Таблица 1

Изобретение относится к биохимии растений и может быть использовано для определения карбарила (севина) в растительном материале. Цель - повышение точности способа. Цель достигается тем, что после экстракции остатков карбарила из растительного материала проводят гидролиз раствором едкого натра, гидролизат подвергают перегонке с водяным паром, в нем измеряют спектрофотометрическим методом количество α - нафтола, а по его содержанию определяют общее количество связанного и свободного остаточного карбарила. 3 табл.

Повторность экстракции

Извлечение С-карбарила, %, растворителями

При трехкратной экстракции 80%-ным этанолом или метанолом извлекается 35 96-97% усвоенного растением С-карбарила,

Полученный экстракт упаривают на вакуумно-ротационном испарителе до 400 мл, добавляют 100 г NaOH для гид-40 ролиза, К колбе присоединяют обратный холодильник и проводят гидролиз на водяной бане 30 мин,

В табл. 2 приведены результаты проведения гидролиза в различных ус- 45 ловиях.

Полный щелочной гидролиз как неизмененного карбзрила, так и конъюгатов с эндогенными веществами клетки достигается при 20%-ным едким нат-дд ром в течение 30 мин. Гидролизат подкисляют концентрированным НС1 до рП б,0. ,

Из гидролизата о -нафтол перегоняют с водяным паром. Перегонку продолжают55 до получения 2 л.раствора. После этого наличие о(--нафтола контролируют с помощью 0,2%-ного раствора соли прочного синего Б, При отсутствии характерной цветной реакции перегонку прекращают; с(-нафтол (в мг/л) .определяют на спектрофотометре СФ-26 при А 329 нм в кварцевой кювете. Количество о -нафтола в анализируемом свежем растительном материале определяют при помощи калибровочной кривой. По установленному количеству о(-нафтола определяют остаточное общее колич:ест- во связанного и свободного пестицида - карбарила в мг вещества на кг сырой биомассы.

Степень определения - 92%, чувствительность метода - 10 мг/мл.

Таблица 2

515009

3 Т1рн1 едено содержлние оскарбарнла в рач.гсичиых ра

Таблица 3

Из полученных данных видно, что в обработанных С-карбарилом в различМ

0

5

0

ных растениях остатки пестиц1 Да п ос- нотзиом (90%) содержатся в связанном состоянии с эндогенными пер;ествами. Неизненньп карбарил содержится лшпь в неболычои количестве (10%),

Формула изобретения

Снособ определения карбарила в растительном материале нутем его измельчения, экстракции органическим растворителем, очистки экстракта с последующим измерением оптической плотности и расчетом концентрации по калибровочной кривой, отличающийся тем, что, с целью новыиения точности способа, экстракцию проводят 80%-ным спиртом,.затем обрабатывают экстракт 20%-ным едким натром в течение не менее 30 мин, очистку проводят путем перегонки полученной смеси с водяным паром при рН 6,0, а оптическую плотность измеряют при 329 им.