Метил-2-О-бензоил-3-фтор-3-дезокси-Д-рибофуранозиды в качестве промежуточных продуктов в синтезе биологически активных 3 @ -фтор-3 @ -дезоксирибонуклеозидов Советский патент 1989 года по МПК C07H15/18 C07H19/67 C07H19/167 

дия на угле и перемешивают смесь в атмосфере водорода 72 ч. Катализатор отфильтровывают, промывают 50 мл спирта, спиртовый раствор упаривают, остаток кристаллизуют из эфира. Получают 1,2 | г (97,2%) соединения (1а), т.пл. 10 -105 С.

Спектр ПНР (CDClj),,/ , ч. на млн: 8,Й-7,А (м., 5Н, ароматика); 5,33 (g., 1Н, Н-1, j ,,j 4,5 Гц); 5,19 (м., 1Н, H-3)i 5, (м., 1Н, H-2)i «,9 (м., 1Н, ); 3,91 (м., 1Н, Н-5) 3,88 (g.g., 1Н, H-5)i 3,50 (с., ЗН, ОНе)..

Найдено,: С Н 5,9; F7,06.

С„Н„О Е

Вычислено,%: С 58,77} Н 5,59,- F 7,02.

Пример 2. Метил-2-О-бензоил- -3-фтор-3-дезокси-/ь-В-рибофураноза (16).

. Из 1,36 г (3,77 ммоль) метил-5 0- -бензил-2-0-бензоил-3-фтор З-дезокси- -)ь-В-рибофуранозы и 1,2 г 20|-ного палладия на угле аналогично описанному в примере 1 получают 1,0 г (98%) соединения (16) в виде сиропа.

Спектр ПМР (СВС1з),сГ, ч.на млн. 8,12-7,2 (м., 5Н, ароматика),- 5,36 (м., 1Н, Н-3); 5,35 (м., 1Н, Н-2)-, «, +9 (м., 1Н, ); 3,86 (м., 1Н, H-5)i 3, (g.g., 1Н, Н-5 );3,50, (с., ЗН, ОМе).

Найдено, %: С 57,80; И 5,65; F 6,98.

С ,Н ,

Вычислено,%: С 57,77; Н 5,59-, F 7,02.

Пример 3. Метил-2,5-ди-0-бен зоил-3-фтор-3 дезокси-о -В-рибофура- ноза (IB).

К раствору 1,3 г (,81 ммоль) соединения (la) в 12 мл пиридина при охлаждении до 1-5°С и перемешивании добавляют по каплям 1,3 мл (1, г, 11,23 ммоль) хлористого бензоила и перемешивают .смесь при 20°С 10ч.

Реакционную смесь при .перемешивании выливают в 50 г смеси лед - вода и экстрагируют хлороформом (3x100 мл) Органический слой отделяют, сушат безводным сульфатом натрия и упаривают. Остаток хроматографируют на сили- кагеле L 100/400(200 см). Колонку элюируют смесью гексан - этилацетат 5:1. Фракции, содержащие продукт, собирают, упаривают. Получают 1,7 г (glj,ft%) дибеизоата (1в) в виде сиропа

5

0

5

,

5

5

5

Спектр ПМР (CDCl), j , ч.на млн: 8,15-7, t (м. , 10 Н, ароматика) j 5,35, (д., 1Н, Н-1, J,,t 4,8 Гц) 5,30 (м., 1Н, H-3)s 5,12 (м., 1Н, Н-2); 4,69 (м., 1Н, H-i); 4,60 (д.д., 1Н, Н-5)-,,53 (д.Д., 1Н, Н-5); 3,50 (с., ЗН, ОМе).

Найдено,: Сб,3б; Н5,01; F5,02.

Н (

Вычислено,: С 64,16; Н 5,11; F 5,07.

Пример Ц. Метил-2,5 ди-0- -бензоил-3-фтор-3 дезокси-/1-В-рибо- фураноза (1г).

Из 1,0 г (3,7 ммоль) соединения (16) и 0,54 мл (0,65 г, 4,6 ммоль) хлористого бензоила аналогично описанному в примере 3 получают 1,12 г (81,1%) дибензоата (ir) в виде сиропа .

Спектр ПМР (СПС1з),сГ, ч. на млн: 8,12-7,39 (м., ЮН, ароматика),- 5,45 (м., 1Н, Н-2), 5,44 (м., 1Н, Н-3); 5,13 (д.д., 1Н, Н-1)-, 4,66 (м., 1Н, Н-4), 4,64 (д.д., 1Н, Н-5); 4,45 (д.д., 1Н, Н-5 ); 3,40 (с., ЗН, ОМе).

Найдено,%: С 64,40-, Н 5,21; F4,98.

Вычислено,%: С 64,16; Н 5,11; F 5,07.

Соединения (l а-г) используются в качестве полупродуктов в синтезе биологически активных 3 -фтор-З - -дезоксирибонуклеозидов II-IV.

Пример 5. 1-О-Ацетил-2,5 -ди-О-бензоил-З-фтор-З-дезокси-В - -рибофураноза (V).

А. К раствору 1,3 г (3,47 ммоль) метил-2, -0-бензоил-3-фтор-3 -дезокси-с -В-рибофуранозы (1в) в смеси 10 мл уксусной кислоты и 1,2 мл уксусного ангидрида добавляют О,7 мл концентрированной серной кислоты и перемешивают 20 ч при 20°С. Реакционную смесь выливают в насыщенный раствор бикарбоната натрия (100 мл), содержащего 50 г льда. Смесь экстрагируют хлороформом (2x100 мл), органический слой отделяют, сушат безводным сульфатом натрия и упаривают. Остаток хроматографируют на силикагеле L 100/400 (100 см). Колонку элюируют смесью растворителей гексан - эфир с постепенным увеличением содержания эфира от 1 до 50 об,%. Фракции, содержащие соединение (V), объединяют и упаривают. Получают 1,31 г (93,) 1-О-ацетил-2,5-ди-0-бензоил 3 фтор-З-дезокси-В-рибофуранозы е виде сиропа .

Найдено,: С 62,80; Н 4,81; F4,69 Вычислено,: С 62,68-, Н i,;

F 4,72.

В. Из 0,5 г (1,33 ммоль) метил- -2,5-ди-О-бензоил-З-фтор-З-дезокси- -р-В-рибофуранозы (ir) действием смеси 2,1 мл уксусного ангидрида, 3,0мл уксусной кислоты и 0,03 мл концентрированной серной кислоты получают аналогично описанному для методики А 0,48 г (89,3%) соединения (V).

Пример 6. 6-Н-Бензоил-9-

(2,5 ди-0-бензоил-3-фтор-3-дезокси- -/ 1-В-рибофуранозил)аденин (VI).

Смесь 1,7 г {,22 ммоль) соединения (V), 1,6 г (4,17 ммоль) бис-три- метилсилильного производного 6-N-

-бензоиладенина и 0,97 мл (2,1б г, 8,31 ммоль) четыреххлористого олова и 26 мл дихлорэтана перемешивают 18ч при 20°С. Реакционную смесь разбавляют хлороформом до 70 мл и выливают в 40 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия. Водный слой отделяют и промывают хлороформом (2x30 мл). Хлороформные растворы объединяют, сушат безводным сульфатом натрия и упа- ривают. Остаток хроматографируют на силикагеле L 100/400 (300 м). Колонку элюируют смесью растворителей хлороформ - метанол с постепенным увеличением содержания метанола от 2 до 12 об.%. Фракции, содержащие нукле- озидный продукт, собирают и упаривают. Получают 1,99 г (82) 6-Н-бензо- ил-9-(2,5-ДИ-0-бензоил-3-фтор-3-дез- окси-/3-В-рибофуранозил)аденина (VI) в виде сиропа.

УФ-спектр, Л,.,с чм (lg): 232 (4,56)., 280 (4,30).

Спектр ПМР (СВС1з), , м. на млн: 9,03 (с., 1Н, NHBr)j 8,56, 8,13, (с., по 1Н, Н-2, Н-8)8,11-8,03 (м., 15И, Ar)i 6,47, (д., 1Н, Н-1 , ,0 Гц); 6,37 (м., 1Н, H-2 )i 5,80 (м., 1Н, Н-ЗО,- 4,87 (д.д., IHj Н-5 )} 4,82 (м., 1Н, Н-4 )} 4,63 (д.д., 1Н, Н-5)

Найдено,: С 63,90-, Н 4,00 N11,9 F 3,21.

Сз,Н2фНАР

Вычислено,: С 64,02; Н 4,15; N 12,04j F 3,26.

Пример 7. 2-М-Ацетил-9-(2,5- -ди-0-бензоил-3-фтор-3 дезокси-/з-В- -рибофуранозил)гуанин (VII).

Смесь 1,74 г (4,32 ммоль) соединения (V) и триметилсилильного производного 2,,Ы-диацетилгуанина, полученного кипячением в течение 3 ч 1,2 г (5,10 ммоль) 2,9-N,N-диaцeтил- гуанина в 30 мп гексаметилдисилазана 0,91 мл (11,1 г, 5,0 ммоль триметил силилтрифторметансульфоната в 50 мл дихлорэтана кипятят 1,5 ч. Реакционную смесь упаривают, остаток растворяют в 150 мл хлороформа и промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия (2 X 50 мл), водой (2 х 50 мл). Хлороформный раствор сушат безводным сульфатом натрия, упаривают и хроматографируют на силикагеле L 40/100 (200 см). Колонку элюируют смесью хлороформ - метанол с постепенным увеличением содержания метанола от 2 до 6 об.. Фракции, содержащие нук леозидный продукт, собирают и упаривают. Получено 1,44 г (62,2%) 2-N- -ацетил-9(2,5 ди-0-бензоил-3 фтор- -3 дезокси- ь-В-рибофуранозил) гуанина (VII) в виде аморфного порошка (после высаждения в гексан), т.пл. 135 138°С.

. УФ-спектр, / , , нм (lg): 234

(4,53), 259 (4,32), 280 (4,22).

Спектр ПМР (в CDClj), , ч. на мл 12,19, (с., 1Н, NHAc); 10,69 (с., 1П NH); 8,00-7,37 (м., ЮН, Аг); 7,85, (с., 1Н, H-8)i 6,21-6,15 (м., 2Н, Н-Г, Н-2 ); 5,64 (м., 1Н, H-3 )i 4,75 (д.д., 1Н, Н-5 ); 4,62 (м., 1Н, Н-4 ); 4,54 (д.д., 1Н, Н-5); 2,30 (с., ЗН, NAc).

Найдено,%: С 58,40, Н 3,97, N 12,8 F 3,28.

C,,,F

Вычислено,%: С 58,31j Н 4,14; N 13,07, F 3,54.

Пример 8. 1-(2,5-Ди-0-бензо ил-3 фтор-3-дезокси-)г-В-рибофурано- зил)цитозин (VIII).

Смесь 1,1 г (2,73 ммоль) соединения (V) и триметилсилильного производного цитозина, полученного кипячением 0,3 г (2,70 ммоль) цитозина в смеси 1,0 мл триметилхлорсилана и 5,0 мл гексаметилдисилазана в течение 2 ч, 0,5 мл (0,61 г, 2,70ммоль триметилсилилтрифторметансульфоната в 25 мл дихлорэтана кипятят 1 ч. Раствор упаривают, остаток растворяют в 100 мл хлоро 3)орма и промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия (2x30 ил) и водой (2x20 мл). Хлороформный раствор сушат безводным сульфатом натрия, упаривают и хрома- тографируют на силикагеле L 40/100 (150 см), Колонку элюируют смесью хлороформ-метанол с постепенным уве- личением содержания метанола от 2 до 10 обД (объемных). Фракции, содержащие нуклеозидный продукт, собирают и упаривают. Остаток кристаллизуют из этанола. Получают 0,92 г (75,U) 1-(2,5-ДИ-0-бензоил-3-фтор- -3 дезокси-/б-В-рибофуранозил) цито- зина (VIII), Т.пя. 203-2054. УФ- спектр, Щl , нм (lg)-, 231 (А,69) 269(,13).

Найдено,%: С 60,80 Н k, N 9,30, F 4,10,

.F

Вычислено,: С 60,92-, Н , N .9,26; F 4,18,

. Пример 9. 9-(3 Фтор-3-дезокси- - -В-рибофуранозил)аденин (II).

Растворяют 1,1 г (1,89 ммоль) соединения (VI) в 20 мл 0,3 М раствора метилата натрия в метаноле, выдерживают при 20°С 10 ч. Реакционную смесь нейтрализуют добавлением 0, мл уксусной кислоты и упаривают досуха. Остаток хроматографируют на ионообменной смоле дауэкс 1x8 (СН-форма, 300 см)о Колонку элюируют сначала водой, затем смесью метанол - вода :1. Фракции, содержащие нуклеозидный продукт, собирают i упаривают. Остаток кристаллизуют из этанола. Получают 0,38 г (7,6) 9-(3 -фтор-З-дезокси-р-В-рибофуранозил) аденина (II),

Т.пл. 211-2124.

УФ-спектр, ,, , нм. (lg)i 260 (4,16).-

Спектр ПНР (DMCp-d) 5 rf, ч.на млн: 8,37 и 8,15 (с., по 1Н, Н-2 и H-8)i 7,0 (с., 2Н, NH;)i 5,96 (д., 1Н, Н-1 , Ji- .. 7,8 Гц) 5,92 (д., 1Н, 2 -ОН. J2 , он-1 6,0 ru)j (д,д., 1Н, 5 -ОН); 5,10 (д.д., 1Н, H-3 )j it,95 (м., 1Н, H-2 )i Л,31 (м., 1Н, Н-А ), 3,68 (м,, 2Н, Н-5 , Н-5).

Найдено,: С k,66 Н ,52; N 25,80{ F 7,08,

С .

Вычислено,: С 44,61-, Н 4,49,- N 26,01j F 7,05,

Пример 10, 9-(3-Фтор-3-дез- окси-(-В-рибофуранозил) гуанин (III) ,

Растворяют 1,2 г (2,2k ммоль) соединения (VII) в 50 мл насыщенного при О С раствора аммиака в метаноле,

выдерживают 3 сут при и упаривают. Остаток растирают с 50 мл этанола, осадок отфильтровывают и кристаллизуют из воды. Получает 0,45 г (70,4%) 9-(3-фтор-3-дезокси-/з-В- рибофуранозил)гуанина (ill), т.пл. 289- 291 С.

УФ-спектр, , нм (lg): 253 (4,14), 269 плечо (4,00).

Спектр ПНР (flMCO-dJ,f , ч.на млн:

7,91 (с., 1Н, Н-8)) 6,54 (с,, 2Н,

NH,), 5,88 (с,, 1Н, 5 -ОН); 5,75 (д., 1Н, Н-Г; J,; j. 8,4 Гц) 5,42 (с., 1Н, 2 -ОН); 5;о4 (д.д. 1Н, Н-з ); . 4,75 (м., 1Н, Н-2); 4,20 (м., 1Н,

H-4 )j 3,59 (д., 2Н, Н-5 , Н-5). Найдено,%: С 42,30-, Н 4,17,- N 24,25,i F 6,65.

C,o nN j04F

Вычислено,%: С 42,10; Н 4,24; N 24,55; F 6,66,

Пример 11. 1-(З-Фтор-3-дез- окси-/5-В-рибофуранозил2цитозин (IV).

Растворяют 0,41 г (0,9 ммоль) соединения (VIII) в 30 мл насыщенного при О С раствора аммиака в метаноле, выдерживают 2 сут и упаривают. Остаток растирают с 30 мл эфира, осадок отфильтровывают и кристаллизуют из этанола. Получают 0,18 г (81,2) 1- (З-фтор-3-дезокси- /i-D-рибофуранозил) цитозина (IV), Т.пл. 221-223 С.

УФ-спектр, , нм (lg): 270 (3,92).

Спектр ПМР (ДМСО-dJ, с/, ч.на млн: 7,73 (д., 1Н,.Н-6, J6,5 7,2 Гц);

7,24 (с., 1Н, NH)-, 7,18 (с,, 1Н, NH); 5,92 (д., 1Н, Н-Г , J,. 1 7,8 Гц); 5,78 (д., 1Н, Н-5 , J56 7,2 Гц); 4,92 (д.д., 1Н, Н-3 ),4,25 (м., 1Н, Н-2 ), 4,13 (м,, 1Н, Н-4 ), 3,55 (м., 2Н, Н-5 , Н-5).

Найдено,%: С 43,97j Н 4,88; N 17,01j F 7,57. .

CjHjiNjO F

Вычислено,%: С 44,08; Н 4,93; N 17,13; F .7,47.

Цитостатическую активность 9-(3- -фтор-3-дезокси ь-В-рибофура,нозил) аденина (II), 9-(3-фтор-3-дезокси- -р-В рибофуранозил)гуанина (III) и 1 - (3 -фтор -3-д езокси -/з-Р-рибофура но- зил)цитозина (IV) изучали в системе- in vitro при инкубировании суспендированной культуры асцитической лей

915

козной опухоли штамма nMNvtirvienKoaa L-1210. В каждом опыте использовали по 2 мл взвеси, содержащей 1-1,1-10 лейкозных клеток. применяли в концентрациях 5-10 и 5 Ю моль/л в пиде раствора в 0,9%-ном растворе хлорида натрия. В контрольных опытах вместо растворов препарата в пробирки добавляли раствор хлорида натрия. После инкубирования в течение 3 и 24 ч в каждом опыте подсчитывали общее количество клеток в 1 мл взвеси, содержание жизнеспособных клеток и отношение его к содержанию.жизнеспособных клеток в контрольном опыте. Цифровые данные обрабатывали методом вариационной статистики.

Производное аденозина (II) проявляло четко выраженный эффект уже через 3 ч инкубации; содержание жизнеспособных клеток по отношению к контролю (контроль принимали за 100%) составляло 6,7i6,8 и 81,31,2% при концентрации препарата 5 5 «10 М соответственно. Спустя 2k ч инкубации эффект подавления лейкоз.- ных клеток L-1210 наблюдали при действии всех фторсодержащих нукле- озидов (данные представлены в таблице) ..

При сравнении известный противо- лейкозный препарат - циклоцитидин

))

(V) начинал проявлять цитостатичес- кий эффект только после 2k ч инкубации, а содержание погибших лейкозных клеток составляло лишь 3,9 по отношению к контролю.

Таким образом, соединения (II)(IV)в сравнении с цикпоцитидином

(V)проявляют цитостатическое дейст- вие быстрее (через 3 и ч), а эффективность их действия превосходит эффективность циклоцитидина в 22,11

и 20 раз соответственно. Описываемые метил-2-0-бензоил-3 фтор-3-дезокси- -D-рибофуранозиды - полупродукты, обеспечивающие получение этих соединений .

20 Формула изобретения

Метил-2-0-бензоил-3 фтор-3-дез- окси-В-рибофуранозиды общей формулы

RO-1

25

О

ОСНз

F OCCeHs

О

где при -ОСНз Во( -или ft-положении

при R C H5-CP -ОСИ в а -или ,;. положении , в качестве промежуточных продуктов в синтезе биологически активных 3 -фтор-З -дезоксирибонуклеозидов,

Изобретение касается производных сахаров, в частности метил-(2- или 2,5-ди)-0-бензоил-3- фтор-3-дезокси-(α или β)-Д-рибофуранозы, являющихся полупродуктами в синтезе 3^Ъ - фтор-3^Ъ-дезоксирибонуклеозидов, проявляющих цитостатическую активность. Цель - создание новых полупродуктов для синтеза новых активных веществ. Синтез ведут взаимодействием метил 5-О-бензил-2-О-бензоил-3-фтор-3-дезокси-(α или β) -Д-рибофуранозы с H₂ в присутствии катализатора (5% палладия на угле) в среде спирта в течение 72 ч. Полученное соединение при необходимости обрабатывают хлористым бензоилом при 1-5°С и перемешивают смесь при 20°С 10 ч. Выход, %

@ т.пл., °С

брутто-формула: а)97,2

104-105

C₁₃H₁₅O₅F

б) 98

нет

C₁₃H₁₅O₅F

в) 94,4

нет

C₂₀H₁₉O₆F

г) 81,1

нет

C₂₀H₁₉O₆F. Новые полупродукты позволяют получать новые вещества с цитостатической активностью, превышающей активность циклоцитидина в 11-22 раз. 1 табл.

Влияние in vitro 3-фтор-3-дезокси-/1-В-рибофуранозидов аденина (II), гуанина (ill), цитозина (IV) и противолейкозного препарата - циклоцитидина (V) на клетки L - 1210