Изобретение относится к микробиологическим методам и может быть ис- пользовано для быстрого выявления микроорганизмов, разрушающих неионоген- ные поверхностно-активные вещества.
Цель изобретения - упрощение способа.
Способ заключается в следующем.
Готевят питательную среду следующего состава, г/л воды:
5,80-6,00 3,00-3,20 0,50-0,55 1,00-1,20 15,0-20,00
Ыа НРО
KHj РОц
Na С1
Агар-агар
Неионогенное
поверхностноактивное вевещество0,20-0,50
последовательным растворением в воде всех компонентов, рН среды 7,2-7,4.
Среду стерилизуют автоклавирова- нием при 1 атм и температуре 105- в течение 20-30 мин.
Приготовленную среду разливают в чашки Петри по 10-15 нл и засевают пробами сточных вод, активного ила . или почвы таким образом, чтобы получить изолированные колонии или бляшками в случае чистой культуры. На одну чашку можно посеять 20-50 культур микроорганизмов.
Культивирование микроорганизмов проводят при 28-30 С в течение 1-5 сут. .
сл о ч ч
со
4
Чашки с выросшими колониями микроорганизмов заливают 5-10 мл 3-5%-ного раствора фенола и вьщерживают 5-10 мин, после чего избыток фенола удаля- г ют, чашки промывают дистиллированной водой и подсушивают.
Вокруг колоний бактерий, способных к деструкции неионогенных поверхностно-активных веществ, образуются про- ю ;зрачные зоны, в то время как остальная :поверхность среды имеет молочно-белое окрашивание.
Интервал концентраций раствора
роформный экстракт сливают в ту же воронку. Затем в нее добавляют 3 капли НС1, три капли 10%-ной фосфорно- молибденовой кислоты, 0,3 мл 10%-ного раствора роданистого аммония и 3 капли 10%-ного раствора хлористого олова. Смесь встряхивают в течение 1 мин отстаивают и окрашенный хлороформный слой сливают в градуированную пробирку через слой ваты, смоченной хлороформом. Затем вйту промывают хлороформом, доводят объем пробы до 6 мл, полученный раствор переносят в кювету
Изобретение относится к микробиологическим методам и может быть использовано для быстрого выявления микроорганизмов, разрушающих неионогенные поверхностно-активные вещества. Целью изобретения является упрощение способа. Способ заключается в приготовлении агаризованной питательной среды, содержащей минеральные соли и неионогенное поверхностно-активное вещество в качестве единственного источника углерода и энергии, разливании ее в чашки, засеве уколом культурами испытуемых микроорганизмов, выращивании их и последующей обработке культуральной среды 3-5%-ным водным раствором фенола. О наличии активных форм деструкторов судят по зоне просветления вокруг выросших колоний на общем фоне, имеющем молочно-белую окраску.
,фенола (3-5%), используемого в качест-15 и измеряют оптическую плотность на
ве индикаторного, выбран исходя из следующих предпосылок: концентрация ниже 3% удлиняет процесс и дает менее четкие зоны просветления, а при концентрации вьпие 5% фенбл в воде не 20 растворяется.
В качестве контроля берут микроорганизмы, не разрушающие неионогенные поверхностно-активные вещества, и
фотоэлектроколориметре при синем све тофильтре. Результат определения находят по заранее построенной калиб ровочной кривой.
Во всех экспериментах наблк)дают снижение количества неионогенного поверхностно-активного вещества. Таким образом, выявленные фенольным способом микроорганизмы действительн
высевают их на чашки бляшками рядом с 25 являются деструкторами неионогенных
NajjHPO
исследуемыми культурами. После обработки фенолом прозрачных зон деструкции контрольные штаммы не дают.
Для подтверждения деструктивной активности выявленных микроорганизмов может быть использован -количественный метод.
Для этого, культуру-деструктор, выявленную описанным способом, засевают в колбы с 100 мл стерильной синтетической жидкой среды следующего состава, г/л среды:
6,0 3,0
NaCl 0,5
NH4C11,0
РН среды 7,2-7,4.
Неионогенное поверхностно-активно вещество вносят в концентрации 0,2 г/л.
После инкубирования на качалке в течение 1-5 дней из колбы отбирают 1-2 мл пробы в делительную воронку емкостью 100 мл, доводят объем раствора дистиллированной водой до 50 мл подкисляют 1 мл соляной кислоты и экстрагируют неионогенное поверхностно-активное BettiecTBo 3 мл зйпороформа (встряхивают в течение 1 мин). Хлороформную фракгщю сливают в чистую делительную воронку емкостью 25 мл и проводят повторное экстрагирование 2 мл хлороформа в течение 1 мин. Хлофотоэлектроколориметре при синем светофильтре. Результат определения находят по заранее построенной калибровочной кривой.
Во всех экспериментах наблк)дают снижение количества неионогенного поверхностно-активного вещества. Таким образом, выявленные фенольным способом микроорганизмы действительно
поверхностно-активных веществ.
Пример 1, Готовят питательную среду следующего состава, г/л воды: NajHPG,,6,0
,0
NaCl0,5
,0
Агар-агар15
Алкилфенолэтоксилат (ОП-10) 0,2 последовательным растворением всех компонентов в воде.
Питательную среду стерилизуют авто клавированием при 1 атм и температуре в течение 30 мин и разливают в чашки Петри по 15 мл.
Питательную среду в чашках засевают пробами сточных вод.
Засеянные чашки инкубируют при 30°С в течение 3 сут. Затем их залива ют 10 мл 3%-ного водйого р аствора фенола.
Через 10 мин избыток фенола сливают, чашки промывают дистиллирован- ной водой.
В результате обработки прверхность агаризованной среды окрашивается в молочно-белый цвет со светлыми прозрачными зонами вокруг колоний микроорганизмов, разрушающих алкилфенол- этоксилат (ОП-10).
Пример 2. Готовят питательную среду следующего состава, г/л воды:
Na ,0
KH,,,0
NaCl0,5
,0
Агар-агар15
Стеарилэтоксилат (стеарокс-6)0,2
последовательным растворением BCiex компонентов в воде.
Далее.способ осуществляют по методике, описанной в примере 1, заливая чашки с выросшими колониями микроорганизмов 10 мл 5%-ного водного раст- Бора фенола.
В результате обработки поверхност агаризованной среды окрашивается в молочно-белый цвет со светлыми прозрачными зонами вокруг колоний микроорганизмов, разрушающих стеарокс-6.
Пример 3. Готовят питатель нзто среду следующего состава, г/л воды:
NajHP046,0
KHjPO NaCl0,5
,0
Агар-агар15
Алкогольэтоксилат (синтанол ДС-10) 0,2 последовательным растворением всех компонентов в воде.
Далее способ осуществляют по методике, описанной в примере 1, заливая чашки с вьфосшими колониями микрорганизмов 10 мл 4%-ного ВОДНОГО расвора фенола.
В.результате обработки поверхност агаризованной среды окрашивается в молочно-белый цвет со светлыми прозрачными зонами вокруг колоний микроорганизмов, разрушающих сийтанол ДС-10.
Пример 4. Готовят питательную среду следующего состава, г/ воды:
NajHPO -6,0
KH POv3,0
NaCl.0,5
,0
Кгар-агар15
Синтанол ДС-100,2
последовательным растворением всех компонентов в воде.
Далее способ осуществляют по методике, описанной в примере 1, зали0
5
0
вая чашки с выросшими колониями мик- poopraHii3MOB 10 мл 2%-ного водного раствора феноЛа.
Поверхность агаризованной среды окрашивается в молочно-белый цвет лишь через 30 мин и прозрачные светлые зоны вокруг колоний микроорганизмов, разрушающих поверхностно- активное вещество, не имеют четких очертаний, что затрудняет выявление деструкторов поверхностно-активных веществ.
Предлагаемый способ выявления микроорганизмов, разрушающ х неионоген- ные поверхностно-активные вещества, позволяет выделять штаммы бактерий, обладающих деструктивной активностью по отношению к этим соединениям, являющимся основой производства многих синтетических моющих средств и синтетических латексов, и вследствие этого срздать микробиологическую базу для охраны окружающей среды от их
5 сброса.
С помощью предлагаемого способа можно значительно сократить время, необходимое для выявления микроорганизмов-, разрушающих неионогенные поверхностно-активные вещества,
Жроме того, применение предлагаемого способа позволяет существенно расширить спектр его приложения, так как обнаружена способность 3-5%-ного водного раствора фенола давать молоч5 но-белое окрашивание неионогенных
поверхностно-активных веществ различных типов: стеарокс-6, ОЖК-моноалкано- этоксилаты; ОП-4, ОП-7, СП-10, тритон Х-100, тритон Х-305 - алкилфенол- этоксилаты; твины 40,60,80 - полиэти- ленгликолевые эфиры сложных эфиров жирных кислот и многоатомных спиртов; Brij 35, синтанол ДС-10, Brij 58 - алкогольэтоксилаты.
0
0
5
0
5
Формула изобретения
Способ выявления микроорганизмов- деструкторов неионогенных поверхностно-активных веществ, предусматривающий приготовление агаризованной питательной среды, содержащей калий фосфорнокислый однозамещенный, аммоний хлористый, другие дополнительные минеральные соли и неионогенное поверхностно-активное вещество, засев ее культурами испутыемых микроорганизмов, их выращивание, последующий анализ путем обработки культуральной среды
715077948
индикаторным раствором и установ- ношении солей в питательной среде,
лением активных форм штаммов-деструк- г/л среды:
TQipoB по зоне просветления вокруг вы- Натрий фосфорноросших колоний, отличающий- кисльв двузамес я тем, что, с целью упрощения щенный 5,8-6,0
способа, в качестве индикаторного Калий фосфорнораствора используют 3-5%-ный водный кислый однозамераствор фенола, а-в качестве допол- щенньй3 0-3 2
нйтельных минеральных солей используют1о
натрий форсфорнокислый дв5 замещенный и Натрий хлористый 0,50-0,55
натрий хлористый при следующем соот- Аммоний хлористый 1,,2
| Способ определения способности микроорганизмов использовать различные углеводные субстраты | 1978 |
|
SU707963A1 |
| Способ гальванического снятия позолоты с серебряных изделий без заметного изменения их формы | 1923 |
|
SU12A1 |
| Cook К.А | |||
| А rapid method for the detection of non-conic surfactant- idegroceling microorganisms | |||
| -Journ | |||
| .Appl.Bacteriol, 1978 | |||
