Способ получения сорбента для аффинной хроматографии Советский патент 1989 года по МПК C08B15/06 C12N11/12 

Изобретение относится к полз чению модифицированной целлюлозы,.используемой в качестве сорбента для аффинной хроматографии. .

Цель изобретения - уменьшение не- специфической сорбции сорбента.

Приме р1. 4,1 г с вежеприготов- ленного Си (ОН) 2 растворяют в 50 мл 25%-ного , раствор добавляют к 5 г целлюлозного порошка из линта хлопчатника. Через 20 ч объем смеси доводят тем же раствором аммиака до 500 мл. Раствор осветляют центрифугированием в течение 5 мин при 4000 об/мин. 50 мл полз ченйого медно- аммиачного раствора помещают в сосуд емкостью 500 мл, куца, налито 200 мл смеси хлороформа и бензола при объемном соотношении 1:9, содержащей О ,26 мас.% (0,6 мл с ,08 г/см)

полиоксизтиленсорбитанмоноолеата. В сосуд опускают мешалку и эмульгируют в течение 4 мин при 400 об/мин Эмульгированную целлюлозу выпускают через нижний патрубок в регенерир то- щий раствор, содержащий 500 мл ацетона и 50 мл ледяной уксусной кислоты. Через 8 мин выпавшие шарики отделяют и промьшают десятью объемами воды. Пористые целлюлозные шарики фракцио- нир-уют на капроновых ситах и отделяют фракции, содержащие целлюлозные частицы размером 70-200 мкм, 1 г пористых целлюлозных шариков помещают в круглодонную колбу емкостью 500 мл, снабженную обратным холодильником, добавляют 100 мл пиридина, содержащего 1,6 мас.% боргнцрвда натрия и нагревают на водяной бане в течение 4 ч. После этого сорбент отделяют

31512974

фильтрованием на воронке Бюхнера, отмывают сначала ацетоном, а затем ди - стиллированной водой до исчезновения следов ацетона.

Полученные пористые целлюлозные шарики активируют окислением в 0,015 молярном растворе NalO в течение 18 ч в темноте с последующей промывкой водой,10

Активированные пористые целлюлозные шарики обрабатывают О,1 молярным карбонат-бикарбонатнь М буферным раствором с рН 9,2, затем добавляют предварительно отдиализованный против бу-15 фера белок (гамма-глобулин лошади), перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре и инкубируют сутки при 4°С, Полученный иммуносорбент от- мьтают поочередно 0,01 молярным раст-20 вором НС1 в 0,15 молярном растворе NaCl и в О,1 молярном борно-боратном буфере с рН 8,6, а затем определяют количество присоединившегося белка по окрашиванию бромфеноловым синим. 25

Результаты Щ)едставле1й)1 в таблице.

Примеры 2-15 вьтолнены аналогично примеру 1, но при дрз гих соотношениях

хлороформ:бензол, концентрациях поли- окгсиэтиленсорбитанмоноолеата и бор- гидрида натрия и продолжительностях обработки на водяной бане.

Условия получения и свойства сорбента представлены в таблице.

Формула изобретения

Способ полз чения сорбента Для аффинной хроматографии, включающий осаж дение целлюлозы из зм льсии 1%-ного медно-аммиачного раствора целлюлозы в смеси хлороформа и бензола, содержащей 0,13-0,26 мас.% полиоксиэтилен- сорбитанмоноолеата, с последунлцими активацией водным раствором периодата натрия и конъюгацией с белком, отличающийся тем, что, с целью уменьшения неспецифической сорбции сорбента, использ тот смесь хлороформа и бензола в объемном соотношении 1:9, осаждение целлюлозы проводят раствором уксусной кислоты в ацетоне и перед активацией вьделенную целлюлозу обрабатывают 1,6%-ным раствором боргидрвда натрия в пиридине в течение 4-8 ч.

Продолжение таблицы

Изобретение относится к получению модифицированной целлюлозы, используемой в качестве сорбента для аффинной хроматографии. Изобретение позволяет уменьшить неспецифическую сорбцию по фагу ФХ174 с 93 до 0,9-1,0%. Это достигается осаждением целлюлозы из эмульсии 1%-ного медно-аммиачного раствора целлюлозы в смеси хлороформа и бензола при объемном соотношении 1:9, содержащей 0,13-0,26 мас.% полиоксиэтиленсорбитанмоноолеата, раствором ледяной уксусной кислоты в ацетоне и обработкой полученных целлюлозных шариков 1,6-ным раствором боргидрида натрия в пиридине в течение 4-8 ч с последующей активацией водным раствором периодата натрия и конъюгацией с белком. 1 табл.

13

14 (срав нитель- ный) .15 ( нитель- ный)

-- , - соответствии с известным способом неспецифическая сорбция сорбент составляет 931,