Способ получения пептидов Советский патент 1990 года по МПК C07K1/08 

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения пептидов, который может найти применение в пептидной химии.

Целью изобретения является упрощение процесса и повышение выхода.

Пример 1. Получение этилового эфира М-бензилоксикарбонилглицил- глицина.

К раствору 1,04 г (5,0 ммоль) N-бензилоксикарбонилглицина и 0,5 г (5,0 ммоль) пиридина в 20 мл этил- ацетата при перемешивании и С/С прибавляют по каплям раствор 0,31 г (1,66 ммоль) цианурилхлорида в 5 мл серного эфира. После пятиминутной выдержки при 0°С в реакционную смесь

вносят 0,5 г (5,0 ммоль) триэтилами- на и 0,69 г (5,0 ммоль) гидрохлорида этилового эфира глицина. Температуру реакционной смеси поднимают до 18-20°С и делают выдержку в течение 10 ч, затем разбавляют ацета- том,промывают водой. Органический слой сушат сульфатом натрия, растворитель удаляют. В остатке белое кристаллическое вещество - этиловый эфир N-бензилоксикарбонилглицилглицина. Вещество хроматографически гомогенно. Rf 0,75 (хлороформ: метано л 9:1, силуфол:нннгидрин: 100 , 10 мин).Выход 1,47 г (98%).

Вычислено, %: С 57,14; Н 6,16; N 9,51

СП

Јъ Ј

J

00

С 57,34; Н 6,01;

С14Н „N,05

Найдено, %; N 9,35

П р и м е р 2. Получение метилово- j го эфира N-бензилоксикарбонилаланил- глицина.

К раствору 1,0 г (4,48 ммоль) КБЗ-аланина и 0,35 г (4,48 ммоль) пиридина в 15 мл этилацетата прибав- ю ляют по каплям при перемешивании и +5°С раствор 0,29 г (1,49 ммоль) цианурилхлорида в 5 мл этилацетата. Через 5 мин в реакционную смесь вносят 0,62 г (4,93 ммоль) гидрохлори- 15 да метилового эфира глицина и 0,95 г (9,39 ммоль) триэтиламина. Температуру поднимают до комнатной (20°С). Через 8 ч реакционную смесь переносят в делительную воронку, разбавля- 20 ют 30 мл этилацетата, промывают 0 мл дистиллированной воды, 10 мл 5 -ного водного раствора бисульфата калия, насыщенным раствором бисульфата калия, насыщенным раствором хло- 25 ристого натрия, сушат безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют, в результате получая целевой продукт в виде белого кристаллического вещеС 56,75; Н 7,35;

вещества, т.пл. 141-143°С. Выход 83%, Ы J D -24,84° (, метанол); R,, 0,21 (хлороформ:метанол 9:1: силуфол: ничгирдин: 100°-, 10 мин).

Вычислено, %: С 56,67; Н 7,66; N 14,69

CrgH7,N,05

Найдено, % N 14,51

П р и м е р 5. Получение метилового эфира N-бензилоксикарбонилфенилаланил- глицина.

Реакцию проводят аналогично при- 2. Продукт получают с количественным-выходом в виде белого кристаллического вещества, т.пл. 118-119°С. Rf 0,70 (хлороформ:метанол 9:1: силу- фол :нингидрин: 100°: -71,43и(, метанол).

Вычислено, %: С 64,85; Н 5,98; N 7,56

ci HaiNi°s

Найдено, %: С 64,68; Н 5,91; N 7,74

П р и м е р 6. Получение метилового эфира N-трет.-бутилоксикарбониллейцил- глицина.

Реакцию проводят по методике приме10 мин); Ы1 ™

ства. Выход 1,19 г (85%), т.пл. , 30 Ра 2- Пептидный продукт получают с вы- (VJ -17,5° (, хлороформ); Rfходом 92%, т.пл. 133-134°С, Rf 0,50

0,50 (хлороформ:метанол 9:1, силуфол:

„f.У

(хлороформ:метанол 9:1, силуфол:ниннингидрин 100° , 10 мин).

Вычислено, %: С 57,13; Н 6,16; N 9,51

35

гидрин: 100°; 10 мин);Гй ;1 -34,6° (, метанол).

Вычислено, %: С 55,61; Н 8,67; N 9,26

Ci4H14N205

Найдено, %: С 57,45; Н 6,48; N 9,51

П р и м е р 3. Получение метилового эфира N-трет,-бутилоксикарбонил- пропилметионина.

Реакцию проводят по методике примера 2. Целевой пептидный продукт получают в виде белого кристаллического вещества, т.пл. 95-97°С, выход 93%: О D -18,0° (, ДМФ); Rf 0,66 (хлороформ:метанол 9:1, силу- фол:нингидрин: 100°}10 мин).

Вычислено, %: С 53,32; Н 7,83; N 7,77; S 8,88

Сц,

еще 5 мин и затем добавляют 5,0 ммол аминокомпонента. Протекание реакции аминолиэа контролируют методом тонкослойной хроматографии (по исчезноНайдено, %: С 53,45; Н 7,63; N 7,85; S 8,65

П р и м е р 4. Получение метилового эфира N-трет.-бутилоксикарбонил-55 вению на хроматограмме пятна амино- лейцилгистидина.компонента). Когда ТСХ-проба показыРеакцию проводят по методике приме- вает исчеРпание аминокомпонента (мера 2. Целевой продукт получают в виде рез Реакционную смесь перено- слегка желтоватого кристаллическогосят в Делительную воронку и промываС 56,75; Н 7,35;

вещества, т.пл. 141-143°С. Выход 83%, Ы J D -24,84° (, метанол); R,, 0,21 (хлороформ:метанол 9:1: силуфол: ничгирдин: 100°-, 10 мин).

Вычислено, %: С 56,67; Н 7,66; N 14,69

CrgH7,N,05

Найдено, % N 14,51

П р и м е р 5. Получение метилового эфира N-бензилоксикарбонилфенилаланил- глицина.

Реакцию проводят аналогично при- 2. Продукт получают с количественным-выходом в виде белого кристаллического вещества, т.пл. 118-119°С. Rf 0,70 (хлороформ:метанол 9:1: силу- фол :нингидрин: 100°: -71,43и(, метанол).

Вычислено, %: С 64,85; Н 5,98; N 7,56

ci HaiNi°s

Найдено, %: С 64,68; Н 5,91; N 7,74

П р и м е р 6. Получение метилового эфира N-трет.-бутилоксикарбониллейцил- глицина.

Реакцию проводят по методике приме10 мин); Ы1 ™

Ра 2- Пептидный продукт получают с вы- ходом 92%, т.пл. 133-134°С, Rf 0,50

„f.У

(хлороформ:метанол 9:1, силуфол:нин

5

0

5

0

гидрин: 100°; 10 мин);Гй ;1 -34,6° (, метанол).

Вычислено, %: С 55,61; Н 8,67; N 9,26

С14Н2 Ц,05

Найдено, %: С 55,53; Н 8,-75; N 9,13

Приме р 7. Синтез пептидных продуктов (указаны в таблице) проводят по следующей общей методике.

К раствору 5,0 ммоль соответствующей N-защищенной аминокислоты и 5,0 ммоль пиридина в 20 мл этилацетата прибавляют при перемешивании и охлаждении до 0°С раствор 1,67 ммоль цианурилхлорида в 10 мл этилацетата.

После завершения прибавления реаксционную смесь перемешивают при О С

еще 5 мин и затем добавляют 5,0 ммоль аминокомпонента. Протекание реакции аминолиэа контролируют методом тонкослойной хроматографии (по исчезно5 вению на хроматограмме пятна амино- компонента). Когда ТСХ-проба показыют водой для удаления гидрохлорида пиридина и циануровой кислоты, после чего промывают при необходимости 5%-ным водным раствором бикарбоната натрия и/или биосульфата калия. Далее э тилацетатный слой сушат и упаривают; последующее выделение и очистку продукта проводят обычными методами.

Осуществление предлагаемого способа за счет сокращения расхода реагентов, использования вместо триэтилами- на пиридина и в качестве растворителя - этилацетата позволяет увеличить вдвое выход целевого продукта, полностью избежать рацемизации аминокислоты, используемой в качестве карбоксильной компоненты, сократить время проведения процесса.

;

544778

Ф о

10

15

20

рмула изобретения. | Способ получения пептидов путем взаимодействия N-защищенного производного одной аминокислоты - карбоксильной компоненты с производным другой аминокислоты или пептида, содержащим реакционно-способную N-концевую аминогруппу аминокислотной компоненты, в присутствии цианурилхлорида как конденсирующего агента и органического основания в среде органического растворителя, отличающий- с я тем, что, с целью повыпения выхода и упрощения процесса, взаимодействие проводят при молярном соотношении карбоксильный компонент: цианурилхлорид:аминокомпонент:органическое основание 3:1:3:3, в качестве органического основания используют пиридин, а в качестве органического растворителя - этнлацетат.

Изобретение относится к химии пептидов, в частности к получению пептидов, и может найти применение в пептидной химии. Цель - повышение выхода и упрощение процесса. Получение пептидов ведут реакцией N - защищенного производного аминокислоты - карбоксильной компоненты с производным другой аминокислоты или пептида (содержащим реакционноспособную N-концевую аминогруппу - аминокислотной компоненты) в присутствии цианурилхлорида (конденсирующий агент) и пиридина в среде этилацетата. Процесс ведут при молярном соотношении карбоксильный компонент: цианурилхлорид: аминокомпонент: органическое основание 3:1:3:3. Способ позволяет полностью избежать рацемизацию аминокислоты и сократить время проведения процесса. Выход 85-91%. 1 табл.

BOC-Leu-OH H-Tyr-OMe

H-Ala-His-OMe BOC-Lys(Z)- 91 Ala-His-OMe

H-Pro-Ser

(OBzI)-Gly-OEt BOC-Ala-Pro- 90

-Ser(OBzI)-Gly-OEt

Z Val ОН

H-Gly OEt

85

91

-20,0° -20,Oc (, MeOH)

-20,9° -21,0 (, MeOH)

90

92

-24,1° -24,2° (, ДМФА)

-26,5° (, EtOH)