Способ получения даунорубицин-гидрохлорида Советский патент 1990 года по МПК C12P19/56 

1

(21). 4203039/30-13

(22) 31.07.87

(46) 28.02.90. Бюл. № 8

(71)Биогал Дьёдьсердьяр (HU)

(72)Янош Балинт, Жужанна Эмри, Йожеф Фазекаш, Аттила Якаб и Дьёрдь Тот (HU)

(53)615.779.93(088.8)

(56)Felia Microbiology, 22, 1977,

p. 275-285. i

(54)СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДАУНОРУБИЦИН- ГИДРОХЛОРИДА

(57)Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к производству антибиотиков.

Цель изобретения - повышение выхода, целевого продукта и упрощение способа. Ферментационный бульон, полученный при выращивании культуры-проду-; цента Stroptomyces spp., экстрагируют несмешивающимся с водой растворителем. Полученный экстракт выпаривают и осаждают целевой продукт. Очистку проводят путем хроматографии на си- , ликагеле и элюируют смесью хлороформа и метанола, взятых в соотношении 80:20 - 90:10 с добавлением 0,2- 2 об.% муравьиной кислоты. Выход целевого продукта 59,7-62% от содержания антибиотика в ферментационном бульоне.

а $

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к производству антибиотиков. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта и упрощение способа. Ферментационный бульон, полученный при выращивании культуры-продуцента STREPTOMYCES SPP., экстрагируют несмешивающимся с водой растворителем. Полученный экстракт выпаривают и осаждают целевой продукт. Очистку проводят путем хроматографии на силикагеле и элюируют смесью хлороформа и метанола, взятых в соотношении 80:20 - 90:10, с добавлением 0,2-2 об.% муравьиной кислоты. Выход целевого продукта 59,7-62% от содержания антибиотика в ферментационном бульоне.

Изобретение относится к микробио- логической промышленности, в частности к производству антибиотиков.

Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта и упрощение способа.

Пример 1. К 500 л ферментативного бульона (содержание активного вещества 40 у/мл ) при комнатной температуре добавляют 10 л 2%-ной щавелевой кислоты. Ферментативный бульон перемешивают в течение 45 мин, затем смешивают с 1% фильтрующего перлита и вновь перемешивают в течение 30 мин. Затем мицелий отфильтровывают. Для получения антибиотика из мицелия его выщелачивают 100 л 2%-ной щавелевой кислоты в течение 30 мин при перемешивании, а затем фильтруют.

Очищенные фильтраты (530 л) с помощью 40%-ного натрового щелока

доводят до величины рН 8,0-8,4, а затем дважды экстрагируют по 200 л n-бутанола. Фазу n-бутанола промывают 100 л безионной воды, с помощью соляной кислоты величину рН доводят до 5,1-5,5 и выпаривают в вакууме при 45°С. К концентрату от выпаривания (4,5 л) добавляют 90 мл воды, свободной от ионов. ,3атем с помощью 6 н этанольной соляной кислоты величину рН устанавливают на 1,2-1,4, Смесь выпаривают при 45°С на 3/4 ее объема, а затем кристаллизуют при 5°С в течение 24 ч. Сырой дауноруби- цин-гидрохлорид (21 г, действующее вещество 60%) отфильтровывают, промывают n-бутанолом и сушат в вакууме при 25°С. Маточный раствор вновь выпаривают на 3/4 его объема и вновь кристаллизуют при 5 С до образования кристаллов. Через 24 ч остальные 7 г

СП 4ь

-si

Ы

продукта (действующее вещество 58%) отделяют, промывают вышеописанным образом и сушат.

Очищенные фракции сырого продукта (28 г) очищают методом колоночной хроматографии. Для этого 5 л силика- геля с величиной частиц 0,06-0,2 мм суспендируют в хлороформе и помещают в колонну (ддймеД-JVJ высота 1 :20). Продукт-сырец растворяют в 125 мл метанола и помещают в -колонну. Затем в качеству элю/ента в колонну подают приготовленную в соотношении 81:18:1 смесь из хлороформа, метанола и му- равьиной кислоты (скорость 800 мл/ч). Фракции улавливают по 800 мл и исследуют методом тонкослойной хроматографии. Содержащие даунорубицин фракции, показывающие только пятно, очищают (12л) и испаряют в вакууме при 35°С на 1/100 из объема. Концентрат выделяют при 5°С в течение 24 ч. Затем кристаллы даунорубицин-гидрохло- рида отфильтровывают, промывают хлоро формом и сушат в вакууме при 25°С. Получают 12,5 г продукта, что в пересчете на общее содержание действующего вещества ферментного бульона составляет 62% выхода.

П р и м е р 2. 500 л ферментного бульона экстрагируют при величине рН 8-8,4 (устанавливается 50%-ной натровой щелочью), 400 л n-бутанола без предварительного отфильтровывания мицелия. Фазы отделяют друг от друга, и органическую фазу промывают половинным объемом воды без ионов. Промытую органическую фазу обрабатывают по примеру 1. Выход и параметры ана- логичны примеру 1.

П р и м е р 3. 500 л ферментационного бульона, который получен при применении штамма Streptomyces sp. 69 (содержание биологически активного вещества 43 мкг/мл), обрабатывают согласно примеру 1. Попучают 22,5 г дауномицин-гидрохлорида красного цвета с содержанием биологически активного вещества 59%. Из маточного

раствора можно получить дополнительные 7,5 г 59%-ного сырого продукта.

Q 5 0 5 0

,. Q

$

0

Объединенный сырой продукт (30 г) описанным в примере 1 образом очищают на силикагеле с помощью колоночной хроматографии. В качестве элю- ирующего средства используют смесь из хлороформа, метанола и муравьиной кислоты (2%) в объемном соотношении 80:20:2. Выход 13,0 г (60,5% антибиотика от содержания в ферментационном бульоне).

П р и м е р 4. 500 л ферментационного бульона, как в примере 3, обрабатывают описанным в примере 1 образом. Получают 20,0 г сырого дауномицин-гидрохлорида (содержание биологически активного вещества 60%) и из маточного раствора получают дополнительно 8 г (содержание биологически активного вещества 58%). Объеди-, ненный в количестве 28 г сырой про- ° дукт очищают описанным в примере 1 образом с помощью колоночной хроматографии. Элюирующее средство - смесь хлороформа, метанола и муравьиной кислоты (0,2%) в соотношении 90:10: 0,2. Выход 12,8 г (59,7% от содержат ния в ферментационном бульоне).

Использование способа позволяет упростить технологию и повысить выход целевого продукта (по прототипу выход 0,5 г, что составляет 33% от содержания в ферментационном бульоне).

Формула изобретения

Способ получения даунорубицин- гидрохлорида путем экстракции ферментационного бульона культуры-продуцента Streptomyces sp. не смешивающимся с водой растворителем, выпаривания экстракта с последующим осаждением целевого продукта и его очисткой путем хроматографии на силикагеле и элюции органическими растворителями, отличающийс я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и упрощения способа, элю- цию проводят смесью хлороформа и метанола, взятых в соотношении 80- 90:10-20, в присутствии 0,2-2 об,% муравьиной кислоты.