Способ получения антибиотиков Советский патент 1977 года по МПК A61K38/15 C07K14/365 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКОВ

Микроорганизм, используемый для получения антибиотика согласно данному изобретению, выделен из образца ночвы в Егинте. Для выращивания ирименяли картофельноморковный агар-агар и установили, что он принадлежит к классу актиномицетов, дающих спорангий, подобный спорангию вида Actinoplanes. Поэтому для роста его применяли различные среды, иснользующиеся при выращивании этих видов. Суспензии культуры готовили путем дробления кусков культуры, снятой с пластинок с агар-агаром, и вели выращивание в небольщих пробирках с добавлением стерильной дистиллированной воды и доведением объема культуры до 5 мл.

Затем эти суснензии выращивали в пробирках, .на пластинках или в чащках Петри на различных средах. Температура инкубации составляла 28°С. Результаты оценивались через 14-22 дней. Эта новая культура (Пфизер F.D. 24090) была доставлена в Американскую Коллекцию типов культур в Роквилле, Мэриленд, И марта 1974 г. и получила название Actinoplanes auranticolor АТСС 31011.

Использовали следующие среды для идентификации культуры:

1)2%-ный агар-агар иа водопроводной воде;

2)«артофельно-морковный агар-агар по

М. П. Лещевалье (1968 г.);

3)сахарозный агар-агар Чапека по Уоксмен (1961 г.);

4)глюкозно-аспарагиновый агар-агар по Уоксмен (1961 г.);

5)агар-агар с экстрактом и солодом;

6)агар-агар Хики и Треснера;

7)картофельно-глюкозный агар-агар;

8)крахмальный агар-агар;

9)л елатина;

10)тирозиновый агар-агар;

11)л елезо-пептоновый агар-агар Дифко;

12)снятое молоко Дифко;

13)декстрозно-нитратный бульон;

14)бульон на основе органического соединения и нитрата;

15)среда АТСС 172, американский Каталог типов культур;

16)с применением углерода.

Признаки, характеризующие данную культуру.

Рост на среде, содержащей агар-агар на водопроводной воде, слабый, колонии тонкие, плоские, примерно 9D2 (очень слабо-розовые) ; воздущный мицелий отсутствует, субстрат мицелия от бесцветного до 9D2, растворимый пигмент отсутствует.

Сахарозный агар-агар Чапека. Рост от умеренного до хорощего, колонии плоские, примерно 9G6 (светло-оранжевые); воздушный мицелий отсутствует; субстрат мицелия около 9G6; растворимый пигмент отсутствует.

Глюкозно-аспарагиновый агар-агар. Рост умеренный, колонии возвыщающиеся, шероховатые, примерно 9G9 (светло-оранжевые);

воздушный мицелий отсутствует, растворимый пигмент отсутствует.

Агар-агар с экстрактом и солодом. Рост не наблюдается.

Агар-агар Хики и Треснера. Рост от умеренного до хорошего, колонии слегка возвыщающиеся и шероховатые, примерно 9F9 (мутно-оранжевые), слабый беловатый налет на поверхности, субстрат мицелия примерно 918, бледно-коричневый растворимый пигмент.

Картофельно-глюкозный агар-агар. Рост умеренный, колонии возвышающиеся, щероховатые, примерно 9L9 (светло-оранжевые), воздушный .мицелий отсутствует, субстрат мицелия примерно 9L9, -растворимый пигмент отсутствует.

Тирозиновый агар-агар. Рост от слабого до умеренного, колонии плоские, примерно 13А10 (мутный красновато-оранжевый цвет) воздушный мицелий отсутствует, субстрат мицелия примерно 10D11, коричневый растворимый пигмент.

Желатина. Рост умеренный, колонии плоские, примерно 9К12 (красновато-оранжевые); следы беловатого налета, субстрат мицелия примерно 9К12, растворимый пигмент отсутствует.

Крахмальный агар-агар. Рост от умеренного до хорошего, колонии возвышающиеся, примерно 9К10 (оранжевые), слабый беловатый налет, субстрат мицелия примерно 9К10, светло-желтый растворимый пигмент.

Крахмал подвергается слабому гидролизу, степень ожижения желатины высокая, нитраты не восстанавливаются до нитритов в любой среде, содержащей нитраты, даже за 22 дня (рост очень слабый в декстрозно-нитратном бульоне, но хороший в бульоне, содержащем органические вещества и нитрат).

Образование сероводорода незначительное. В железо-пептоновом агар-агаре образование растворимого пигмента не наблюдается. В молоке не наблюдается каогуляции или гидролиза даже по истечении 22 дней. Тирозин не дегидрируется.

Рост в среде АТСС 172 наблюдается при температуре от 21 до 37°С, наилучший рост при температуре от 28 до 37°С, при температуре 45°С роста не наблюдается.

Арабиноза, фруктоза, маннит, раффиноза, рамноза, сахароза и ксилоза потребляются, инозит не потребляется. Ни на какой из сред не наблюдаетсязапаха.

Спорангий образовывается лишь на картофельно-морковиом агар-агаре. При этом образовывается палисадный слой, 5,5;-11X4,5- 8 мкм по ширине и 9-12 мкм по высоте. Колонии многочисленны, неправильные по форме и выбрасывают споры при постепенном размягчении. Спорангий на картофельно-морковном агар-агаре по прошествии трех недель инкубации выделяет споры за несколько часов при температуре около 2ГС, если куски колоний погружают в небольшое количество раствора: 1 г глюкозы и 1 мл «Твина 80 в 1 л воды. Споры образовывают цепочки неправильной формы в снорангии, но будучи освобожденными от спорангия, становятся -субглобозными и имеют ширину от 1,6 мкм доэллиптической формы 1,6-2,2X1,1 - 1,6 мкм. Почти все они подвижны. Культивирование А. auranticolor АТСС 31011 предпочтительно происходит -в водной питательной среде при 26-36°С в погруженном аэробном состоянии при перемешивании. К числу питательных сред, пригодных для его выращивания относятся те, которые включают источник усвояемого углерода, такие как сахара, крахмал и мела-сса; И€точники органически связанного азота, такие, как казеин, продукт энзиматического расщенления казеина, соевая мука, мука из семян хлопчатника, мука из арахиса и глютен пшеницы. Источниками роста могут также являться отходы винокуренных заводов, рыбная мука и экстракт дрожжей, а также соли, такие, как хлористый натрий и карбонат кальция, и микроэлементы, например, железо, магний, цинк, кобальт и марганец. При чрезмерном пенообразовании во время культивирования можно вводить в питательную среду антивспениватель, например растительные масла или силиконы. Аэрация среды в резервуарах при выращивании культуры глубинным способом проводится предпочтительно со скоростью около 1,2-2,0 объема свободного воздуха на 1 объем бульона в минуту. Скорость перемешивания поддерживается при помощи мещалок, обычно употребляемых в бродильной промышленности. Агент ннокулирования для приготовления антибиотиков может быть получен путем использования культуры с пластинки на среде, например, АТСС 172, упоминавшейся выше. Эта культура может быть использована для инокулирования либо содержимого колб, находящихся на встряхивателе, либо содержимого в резервуарах для инокулирования, или в резервуары могут быть внесены зародыши из колб, подвергавшихся встряхиванию. В колбах на встряхивателе рост культуры обычно достигает своего максимума нримерно через 4 дня, в то время как при инокулировании в резервуарах наиболее благоприятен период от 2 до 3 дней. Значительная антибиотическая активность достигается на конечной стадии ферментации примерно за 20-30 час. Снособ производства антибиотиков во время процесса ферментации обычно контролируется биологической проверкой бульона с применением чувствительного штамма Staphylococcus aureus. При этом используется стандартный метод испытаний на пластинке, при котором зона ингибирования, окружающая кружок фильтровальной бумаги, насыщенной бульоном, принимается за меру антибиотической активности. После того, как антибиотическая активность сбраживаемого бульона достигла желательного уровня, продукты выделяют либо из всего бульона, либо из профильтрованного бульона. В последнем случае мицелий удаляют фильтрованием или центрифугированием. Можно использовать также метод тонкослойной хроматографии на силикагеле. Этот метод служит для анализа смеси антибиотиков, полученных в ферментационной среде, и дает возможность установить состав сырых и очищенных материалов, выделенных экстракцией из сбраживавшихся бульонов. Разделение компонентов смеси антибиотиков зависит от содержания антибиотиков в системе. Слишком малая бактерицидная активность не дает возможности обнаружить те компоненты антибиотика, которые присзтствуют в малых количествах; слишком высокая бактерицидная активность приводит к эффекту сопротивления с вытекающим из этого неудовлетворительным разделением. Система проявителей при тонкослойной хроматографии представляет собой смесь хлороформа с этанолом (9:1). Тонкослойные хроматограммы после проявления могут просматриваться в ультрафиолетовом свете при длнпе волны 254 ммк и 366 ммк. Биоавтографическое обнаружение бактерицидных компонентов быть осуществлено путем наложения тонкослойной хроматограммы на агарагар с пнтательнымп веществами, в который внесены зародыши чувствительного штамма SZ. aureus или другого чувствительного организма. К числу главных компонентов смеси антнбиотиков, выделяемой А. auranticolor АТСС 31011, относится ряд макроциклических лактонов и депсипептидных антибиотических компонентов. Появление или непоявление или процентный состав смеси этих антибиотиков меняется от ферментации к ферментации и является функцией воемени, величины рН, состава среды и т. д. При соблюдении словий, приведенных в помещаемых ниже примерах, главными бактерицидными компонентами смеси антибиотиков являют я соединения № 37 277 (депсипептнд) и № 39 926 (макроциклический лактон), в то время как к числу антибиотических компонентов, присутствующих в незначительном количестве, относятся соединения № 37 932 (депсипептид) и № 35 763 (макроциклический лактон). Компоненты смеси антибиотиков могут быть разделены и выделены из ферментационного бульона при применении самых различных способов, включающих экстракцию растворителем, противоточное распределение по Крэгу, колоночную хроматографию или комбинацию этих способов. При экстракции антибиотиков из бульона молшо использовать различные органические растворители, такие как хлороформэтплацетат и метилизобутилкетон. Экстракцию растворителем предпочтительно проводят путем двукратной экстракции бульона при величине рН 7 при помощи объема растворителя равного 1/3-1/2 объема бульона, из которого желательно выделить смесь антибиотиков. Наиболее рекомендуемый метод выделения и рекуперации компонентов смеси антибиотиков заключается в следующем. В неосветленном или осветленном бульоне доводят рН до величины около 7 и экстрагируют его двумя порциями метилизобутилкетона, объем которых составляет примерно 1/3 до 1/2 объема экстрагируемого бульона. Экстракт в растворителе концентрируют в вакууме, и концентрат обезжиривают путем экстракции его гептаном или петролейным эфиром. После этого обезжиренный экстракт в растворителе вьпаоивают досуха в вакууме. Твердые вещества подвергают противоточному распределению по Крэгу (6 таоелок) с использованием толуола (5 частей), этанола (2 части) водного (Ьосфатного буферного раствора с рН 4,5 (3 части). Разделившиеся слои образуют верхнюю и .нижнюю фазы системы поотивоточного распределения. После распределения слои а-нализируют методом тонкослойной хроматографии. Разделенные фракции выпаривают досуха в вакууме. Твердые вещества, содержащие яепсипептиды, растворяют в хлороформе, обрабатывают активированным древе.--гым Углем, фильтруют и выпаривают в вакууме. Остаток, полученный после выпаривания хлороформа, растворяют в ацетоне. Твердые вещества, осадившиеся при прибавлении гептана, растворяют в небольшом количестве хлороформа и вносят в колонку силикагеля, забуференного по рНб. изготовленную в присутствии хлороЛоРма и н.-пропанола в соотношении 99:1. Koлoнкv проявляют той же системой растворителей под давлением 5600 Н/м. Отдельные участки колонки контролируют методом тонкослойной хроматографии. Фракции, содержащие разделенные депсипептиды, объединяют, выпаривают в вакууме, и содержимое их кристаллизуют из апетона-гептана.. Фракции, полученные противоточным м тодом, содержащие макроциклические лактоны, объединяют, выпаривают в вакууме, и тв пдые вещества растворяют в этилапетате. Раствор перемешивают с силикагелем. ФИЛЬТРУЮТ, и растворитель удаляют в вакууме. Огтаток растворяют в этилацетате и производят осаждение гексаном. Тверлые вещества -пастворяют в небольшом количестве хлорогЬоРмя и хроматографируют под давлением 5600H/ i на колонке силикагеля, забуференной до рН 6,0 и изготовленной в присутствии этиланетата. Для проявления пользуются системой из этилацетата, тетрагидрофурана и гексана в соотношении 80:20:20. Участки колонки контролируют методом тонкослойной хроматографии. Фракции, содержащие разделенные макроциклические лактоны, объединяют и выпаривают в вакууме. Отдельные фракции обрабатывают дополнитгтьпым противоточным распределением по Крэгу и/или колоночной роматографией с использованием различных истем проявителей. Тщательное -контролиро.ание каждой стадии очистки дает возможость выделить индивидуальные макроциклические лакгонь в достаточно чистом состоянии, так что фракции в растворителе могут быть выпарены досуха с получением чистых компонентов. А. auranticolor АТСС 31011 образует по меньшей мере четы-ре депсипептида (из них главное соединение № 37277 и побочное - 37 932) и четыре макроциклических лактона. (соединение № 36 926 - главное, № 35763 - побочное). Однако первичными компонентами являются депсипептиды. Сырые смеси антибиотиков, получаемые непосредственно из бульона, и очищенные индивидуальные компоненты обладают широким спектром антибактериальных свойств. К числу организмов, не сиособных к размножению в присутствии антибиотиков, относятся: Salmonella typhasa, Shigella dysenteriae, Escherichia coli, Klebsiella рпецтоп ае, Staphylococcus ai.ireus. Streptococcus pyogenes. Streptococcus faecalis, Diplocoocus pneimoniae. Bacillus subtiiis, Corynebacterium diphtheriae, Clostridium septicum, Brucella abortus, Neisseria sioca, Lactobacillus acidophilus,. Pasteurella multocida. Антибиотики, охватываемые настоящим изобретением, как в форме сырой смеси, так и в форме очищенных индивидуальных компонентов или их смесей могут применяться при лечении различных инфекционных заболеваний у людей и у животных. Как правило, эти антибиотики вводят орально ежедневными дозами в 0,5-1,0 г или парэтерально дозами в 100--500 мг в зависимости от типа и серьезности инфекционного заболевания и особенностей больного. Они могут вводиться в отдельности или в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, и для лечения можно исиользовать как одинарные, так и многократные дозы. Для орального введения можно применять таблетки, содержащие различные добавки (цитрат натрия, карбонат кальция и дикальиийфосфат), а также различные агенты дезинтеграции, такие как крахмал, альгиновая кислота и некоторые комплексные силикаты, чуесте со связующими, такими как поливинилпирролидон, сахароза, желатина и аравийская камедь. Кроме того, можно вводить смазочные вещества, такие как стеарат магния, луарилсульфат натрия и тальк, которые часто создают преимущества при таблетировании. Твердые вещества сходного типа могут также применяться в качестве наполнителей в мягких и твердых желатиновых капсулах. К числу реком ендуе.мых материалов относятся лактозы, а такЖб полиэтиленгликоли высокого молекулярного веса. При применении суспензий и/или эликсиров важным ингредиентом могут

явиться агенты подслащивания или вкусовые веще-ства вместе -с такими разбавителями, как вода, этанол, пропиленгликоль, глицерин и различные комбинации этих веществ.

Растворы антибиотиков в сезамовом или в арахисовом масле или в водном пропиленгликоле могут применяться при парэнтеральном введении.

Индивидуальные антибиотики проявляют бактерицидную активность, которая в основном является бактериостатической. Однако сырые смеси антибиотиков или смеси очищенных депсипептидов и очищенных макроциклических лактонов проявляют синергическую активность, являющуюся по существу бактерицидной.

При индивидуальных испытаниях главного макроциклического лактона - соединение № 36 926 (А) - и главного депсипептида - соединение № 37 277 (В) - или их комбинаций (путем разбавления в пробирках) против различных организмов были выявлены минимальные ингибирующие концентрации. Результаты даны в табл. .

Таблица 1

Сходные результаты были получены при индивидуальных испытаниях побочного макроцик -ическоголактона - соединение

№ 35 763 (А ) и побочного депсипептида - соединения jNb 37 932 (В ), а также при испытании различных комбинаций: А-А, ВВ, (А+В), (А+В), (А+В), (А+В).

Максимальная синергическая активность у комбинаций очищенных макроциклических лактонов и депсппептидов была достигнута при соотношении около 1-2: 1. Примерно такие же соотношения иаблюдаются для ферментационных бульонов А. auranticolor АТСС 31011 и для выделенных из них сырых смесей антибиотиков.

Это явление противоположно наблюдаемому для других синергических смесей антибиотиков, для которых синергетические факторы наблюдаются у ферментационных бульонов и сырых смесей при бус-оптимальных соотношениях.

Данные, полученные in vivo, при оральном и субкутанном введении при проведении опытов на мышах, инифицированцых штаммом Staphylococcus aiireus 01А005, представлены в табл. 2.

Антибиотики, охватываемые настоящим изобретением, могут применяться в качестве агентов стимулирования роста домашней птицы и животных из-за глгрокого бактерицидного спектра и при лечении дизентерии у свиТаблица 2

ней благодаря значительной активности против анаэробной спирохеты, вызывающей это заболевание. Промотирующая рост активность сырой

смеси антибиотиков определяется на молодых поросятах в течение 40 дней. Средний привес в день, потребление корма и эффективность оказались значительно улучщенными у животных, получавших антибиотики, по сравпению с контрольными животными (,01). Результаты приведены в табл. 3. Сходные результаты получены и для других -смесей антибиотиков, применяемых в количестве 10-100 частей на 10 частей корма.

Аналогичные результаты получены также при использовании .индивидуальных чистых соединений №№ 36 926, 37 932 и 37 277 или смесей чистых соединений. Таблица 3 Эффективность применения антибиотиков для стимулирования роста была продемонстрирована при проведении опытов на цыплятах, в корм которым вводили антибиотики. У них отмечается значительное улучигение привеса но сравнению С контрольными цыплятами (,01). Результаты представлены в табл. 4. Таблица 4 Такие же результаты получены при применении других сырых смесей антибиотиков, составы которых приведены ниже, или использовании индивидуальных чистых соединений №№ 36 926, 37 932 и 37 277 или смесей чистых соединений. Профилактическую эффективность антибиотиков, охватываемых настоящим изобретением, определяют на свиньях, экспериментально инфицированных дизентерией. Корм, содержащий антибиотики, вводят в течение 28 дней. Полученные результаты представлены в табл. 5. Таблица 5 Аналогичные результаты получены при введении (10-100 частей на 10 корма) чистых индивидуальных соединений №№ 36 926, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 37 932 И 37 277 или смесей чистых соединеПример I. Готовят стерильную водную среду состава (г/л): Глюкоза10 Растворимый крахмал20 Экстракт дрожжей5 Продукт энзиматического дегидрирования казеина5 Карбонат кальция1 Величина рН7 Клетки с пластинки с А. auranticolor АТСС 31011, выращенные на среде АТСС 172, переносят в несколько 300-ми.ллилитровь1х конических колб Эрленмейера. в каждой из которых находится 50 мл этой среды и которые встряхивают на вращающемся сепараторе в течение 3-4 дней при 28-30°С. Аликвотные пориии по 5 мл выращенного инокулята переносят в 300-миллилитровые конические колбы Эоленмейера, каждая из которых содержит 100 мл описанной выше стерильной среды. После встряхивания в течение 3-4 дней при 28-30°С 5-10% выращенного инокУлята переносят в четырехлитровый бродильный чан, солеожащий 2 л стерильной среды состава (г/л): Экстракт дрожжей2,000 Глюкоза10,000 Жидкость после замачивания кукурузы1 (мл) Продукт энзиматического дегидрирования казеина5,000 Хлорид двухвалентного кобальта0,002 Величина рН7,0 Ферментацию проводят 20-30 час при 28- 30°С, пои перемещивании со скоростью 1700 об/мин и аэрации - 1 объем воздуха на 1 объем бульона в 1 мин. В случае необходимости величину рН всего бульона устанавливают на уровне 7 и дважды экстрагируют метилизобутилкетоном (1/3-1/2 от объема бульона). Экстракт в растворителе конпентрипуют в вакууме и обезжиривают экстракцией петролейным эфиром. Активность бульона, экстракт в растворителе и последующие фракции контролируют методом тонкослойной хроматографии на силикагеле с использованием системы проявителей, состоящей из хлороформа-этанола (9:1), и проводят наблюдения в ультрафиолетовой области спектра при длине волны 254 ммк и 336 ммк. Обезжиренный концентрат в растворителе высущивают досуха в вакууме. Твердые вещества подвергают противоточному распределению по Крэгу на шести тарелках с использованием толуола (5 частей), этанола (2 частей), водного фосфатного буферного раствора (рН 4,5; 3 части). После распределения слои контролируют методом тонкослойной хром.атографии. Депсипептид (соединение № 37 277) концентрируют в верхнем слое, в основном на нулевой тарелке. Второй депсипептид (соединение № 37 932) выделяют из верхних тарелок - 1-ой, 2-ой и 3-ей. Макроциклический лактон (соединение № 35 763) яаходигся в основном в нижних слоях тарелок 0-ой и 1-ой. Соединение № 36 926 концентрируют в нижних фазах тарелок 2-ой, 3-ей, 4-ой и 5-ой. Верхнюю фазу нулевой тарелки, содержащую соединение № 37 277, высушивают досуха в вакууме, растворяют в хлороформе и перемешивают мин с активированным углем. Раствор фильтруют и высушивают в вакууме. Остаток растворяют в ацетоне, твердые веш,ества осаждают, прибавляя гептан. Осадившиеся твердые вещества растворяют в небольшом количестве хлороформа и хроматографируют на колонке силикагеля, забуференного до рН 6,0, изготовленной в црисутствии смеси хлороформа с н.-цропанолом (99 : 1). Колонку проявляют той же системой под давлением 5600 Н/м. Фракции из колонки контролируют методом тонкослойной хроматографии. Фракции, содержащие выделенное соединение № 37 277, объединяют, выпаривают В вакууме, и соединение кристаллизуют из ацетона-гептана. Соединение № 37 277 не имеет отчетливой точки плавления. Разложение начинается при 140-150°С. Соединение нерастворимо в диэтиловом эфире, гексане, гептане и воде. Оно слегка растворимо в ацетоне и бензоле и легко растворимо в метаноле, этаноле, хлороформе и хлористом метилене. Анализ соединения № 37 277 дает следующие примерные результаты (%): С 60,91; Н 5,98; N 10,45; О (по разности) 22,66. Соединение № 37 277 оптически активно и имеет угол вращения + 11° (,0 этанол). Максимумы поглощения в ультрафиолетовой области находятся при длинах волн (ммк): 225, 274, 282, 303 и 355; е},, 309,3; 36,67; 45,01 и 20. Хлороформный раствор показывает характерное поглощение в инфракрасной области при следующих длинах волн (мкм): 3,05; 3,40; 5,70; 5,77; 6,07; 6,62; 6,82 и 7,67. Фракции, полученные при противоточном распределении и содержащие соединения №№ 35 763 и 36 926, выпаривают в -вакууме, остатки растворяют в этилацетате, раствор перемешивают с силикагелем. Профильтрованный раствор выпаривают в вакууме, остаток растворяют в этилацетате, твердые вещества осаждают, прибавляя гексан. Осадившиеся твердые вещества растворяют в небольпюм количестве хлороформа и хроматографируют в колонке силикагеля, забуференного до рН 6,0, изготовленной в присутствии этилацетата. Колонку проявляют смесью этилацетата, тетрагидрофурана и гексана (80:20:20), насыщенной водным фосфатным буферным раствором с рН 6,0, под давлением 5600 Н/м2. Первые 17 из полученных фракций (каждая объемом 20 мл) содержат желтое масло, которое отбрасывают. Фракции 26-40 имеют высокое содержание соединения № 36 926. Фракции 41-50 представляют собой главным образом смеси соединений - 36 962 и 35 763. Фракции 26-40 объединяют, концентрируют в вакууме и вновь хроматограф фуют на силикагеле с отбором фракций по 20 мл. Первые 15 фракций содержат желтое масло, которое отбрасывают. Фракции 16-30 представляют собой, в основном, соединение № 36 926. Фракции 31-40 содержат смесь соединений № 36 962 и № 35 763. Фракции 16-30 выпаривают в вакууме, остаток растворяют в небольшом количестве хлороформа и вносят в колонку силикагеля, забуференного до рН 6,0, изготовленной в присутствии хлороформа. Колонку проявляют смесью хлороформа с этанолом (95,5-4,5 об. %) под давлением 9100 Н/м и собирают 160 фракций по 6 мл. Фракции 60-90 содержат только соединение № 36 926. Эти фракции объединяют и выпаривают в вакууме. Остаток растворяют в минимальном количестве этанола и осаждают диэтиловым эфиром для получения чистого аморфного соединения № 36 926. Соединение № 36 926 растворимо в метаноле, этаноле, хлороформе и хлористом метилене, нерастворимо в диэтиловом эфире, гексане и гептане. Оно не имеет отчетливой температуры плавления, разложение начинается при температуре 100°С. При анализе установлены следуюшие средние соотношения (%): С 57,89; Н 6,78; N 8,04; О (по разности) 27,29. Молекулярный вес, определенный по массовому спектру с высоким разрешением, равен 501, молекулярная формула С2бПз5ЙзО7. Соединение № 36 926 обладает оптической активностью с углом вращения а о - 130°С (,0, этанол). Максимум поглощения в ультрафиолетовой области спектра в растворе этанола находится при длине волны 214 ммк; 723,8. Таблетка с бромистым калием показывает характерные максимумы поглощения в инфракрасной области при следующих длинах волн (мкм): 2,95; 3,40; 5,75; 5,98; 6,23; 6,58; 6,87; 7,45; 8,25; 8,38; 8,80; 9,08; 10,15; 10,35; 11,10 и 13,30. Соединение № 35 763 выделяют и очищают таким же образом, как и соединение № 36926. Чистое соединение растворимо в метаноле, этаноле, хлороформе и хлористом метилене, не растворимо в диэтиловом эфире, гексане и гептане. Оно не имеет отчетливой температуры плавления, разложение начинается при температуре 100°С. Анализ дает следующие средние соотношения (%): С 61,29; Н 6,73; N 8,83; О (по разности) 23,15. Молекулярный вес, определенный по массовому спектру с высоким разрешением, состав