Способ получения баумицина а и в Советский патент 1981 года по МПК C12P1/06 A61K31/7048 A61P31/04 C12P1/06 C12R1/465 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАУМИЦИНА АЙВ

Шталаи обладает следующими культурально-морфологическими признаками. Под микроскопом наблюдаются откры тые спир&ли и крючкообразные формы, которые значительно развиты из разве вленного субстрата мицелия. Кольца о сутствуют, цепь споры имеет умеренну длину с числом .спор больше 10. Размер спор 0,6-0,8 мкм X 1,0 1,2 мкм, поверхность спор покрыта шипами. .. Глицериново-аспарагиновЫй агар. Нити от бледно-красновато-желтого до темно-красного. Воздушный мицелий во дянисто-серого цвета. Растворимый пи мент - светло-красновато-желтый. Сахарозо-нитратный агар.Сус ратный мицелий - нити бледно-красновато-жел тые, бледно-красные до темно-красных Воздушный мицелий слегка белый. Растворимый пигмент - слегка тёмнокрасный . -Глюкозо-аспарагиновый агар. Нити бесцветные, бледно-желтые до бледнооранжевых. Воздушный мицелий от- слег ка белых до светло-серых, становящих ся обил-ьными -через 14 дн инкубирования. Растворимый пигмент отсутствует. Тирозиновый агар. Нити сероватокрасно-коричневые. Воздушный мицелий от сине-белого до светло-синего. Тем но-коричневый растворимый пигмент. Питательныйагар. Нити желтоватокоричневые. Воздушный мицелий белый. Растворимый пигмент коричневый. Агар с дрожжевым экстрактом и- солодовый агар - нити тускло-оранжевые Воздушный мицелий светло-серый. Растворимый пигмент слабо-коричневый. Агар с овсяной мукой. Нити от бес цветных до бледно-оранжевых. Воздушный мицелий светло-серый.. Растворимый пигмент отсутствует. . . Глицерино-нитратный агар. Нити от бесцветных до бледно-оранжевых. Воздушный мицелий от белого до светлосерого. Растворимый пигмент отсутст. вует. Снятое молоко -нити бледно-желто ваТо-коричневые, желтовато-коричневые до бледно-красных, воздушньгй мицелий слегка белый. Растворимый пигмент коричневый. Физиологические свойства штамма. Оптимальная температура роста от 30 до . Желатину разжижает. Крах мал гидролизует. Молоко пептонизирует и коагулирует при 37°С. Меланин образует. Хорошо растет -с глюкозой, eL-арабинозой, D-ксилозой, сахарозой, раттинозой, D-фруктозой ,1,-рамнозой, маннитом. Разжижает яблочнокислый кальций. Получают баумицин путем культивирования штамма в стандартной водной питательной среде, содержащей источники углерода, азота и неорганически солей, в качестве источников углерода используют глицерин, глюкозу, крахмал/ декстрин, сахарозу, мальтоЗУ, масла, жиры. В качестве источников азота используют соевые бобы, дрожжевой экстракт, пептон, порошок семян хлопка, сухие дрожжи, жидкость для замачивания зерна или неорганические соли, такие как сульфат аммония, нитрат натрия или хлористый аммоний, из неорганических солей используют хлористый натрий, хлористый калий или фосфаты, при необходимости добавляют следы металлов и пеногасящие вещества, такие как адеканЬл или силикон. Предпочтительной температурой культивирования является 25-30°С. Максимальный выход баумицина в бульоне культуры достигается через 3-7 дн. Для извлечения баумицинового комплекса бульон подв-еЬгают фильтрованию и фильтрат затем подвергают экстрагированию несмешивакяцимся с водой органическим растворителем, таким как этилацетат, бутилацетат, хлороформ или н-бутиловый спирт. Баумицин, находящийся в мицелии, извлекают хлороформом, ацетоном, н-бутанолом, метанолом, этанолом, этилацетатом или водным раствором органической или неорганической кислоты, такой как соляная кислота, серная кислота или уксусная кислота.После концентрирования и вакууме баумициновые экстракты повторно экстрагируют органическим растворителем, несмешивающимся с водой при рН 7-9, И затем баумицин растворяют в кислой водной среде при рН 4. Затем баумицин в кислом водном растворе подвергают повторной экстракции органическим растворителем после регулировки рН до слабо щелочного значения. Баумидин может быть извлечен из культуральной жидкости хроматографией на колонке с применением таких адсорбентов как активированный уголь, алюмогель, кремневая кислота или модифицированный декстран марки Сефадекс ЛН-20, противоточным распределением или жидкостной хроматографией с применением органических растворителей. Полученные таким способом активные экстракты концентрируют при пониженном давлении и в результате получают сырой красный порошок баумицинового комплекса. Для получения баумицйновых компонентов А,АО,В,и В осуществляют дополнительную очистку и разделение на колонке с использованием таких адсорбентов как кремниевая кислота, модифицированные декстраны, слабо кислыеионообменные смолы или активированный уголь, а также жидкостной хроматографии с противоточным .распределением и

с Применением приемлемых органических растворителей.

Активные элюаты разделяют, концентрируют при пониженном давлении и баумициновые компоненты индивидуально, очищают хроматографированием на Сефа- Физико-химические свойства баумидексе d.H-20. После концентрирования 5 цина R.,Pi, В и В представлены в активных элюатов путем перекристалли- табл.1.

Баумицин .

Внешний видСлабсяцелочной аморфный красный порошок

Элементарный с Н N О С Н N О анализ.Найдено59,85 6,65 2,04 29,83 60,27 6,72 2,31 29,52

теоретическое 60,61 6,43 2,08 30,88 60,61 6,43 2,08 30,88

Эмпирическая- г и мп

формула3 « i3

Молекулярный/т т

Точка плавления,с182-185185-189

Удельное вращение Гс1.3 °+150+135 (СНС1з-с 0.1) Растворимость RJ значения С:М:В 7:ЗгЗ C:M:F 90:10:1 С:М:А 80:20:4 Реакция

зации из приемлемого органического растворителя получают баумициновые компоненты А,А-,

В и В в очищенной

кристаллической форме. Растворим в кислой воде, диметилсульфоксиде, метилцеллозолве, метиловом спирте, этиловом спирте, н-пропаноле, н- бутаноле, этилацетате, бутилацетате, ацетоне, метилэтилкетЬНе, хлористом метилене и хлороформе. Нерастворим в воде, н-гексане, циклогексане и петролейном эфире- .-.. Кислый водный и метанольный раствор является красным, и переходит в красновато-пурпурный в щелочном состоянии. Баумицйны А и Aj дают положительную нингкдриновую реакцию, и не восстанавливают раствор фехлинга.

Ваумицин

234,5(452); 252,5(327); 289(120) 478(127) 497(128); 532(76)

234,5(459); 252,5(326);

в О,IN НС1 - МеОН 289(121); 479(133); 497(133); 532(78)

250,5(416); 350(83);

В О,IN NaOH-MeOH 558(164); 597(152)

Баумицин Внешний вид Слабощелочной

Элементарный ан ализ

Эмпирическая формула

Молекулярный вес

Точка плавлр181-189ния,°С

Удельное вра+170щение AJ Растворимость

Продолжение табл.1

234,5(427); 252,5(311); 289(108); 478(125); 497(128); 532(84)

234,5(447); 252,5(311); 289(111); 478(131); 497(131); 532(70)

250,5(421); 350(80); 558(170); 596(164)

В

Ч «41 0-14

687,7

197-201

+170 ( МеОН 1:1 ;С 0,1) Растворим в кислой воде, метилцеллозолве, метаноле, этаноле, н-пропаноле, н-бутаноле. Нерастворим в воде, этилацетате, ацетоне, хлористом метилене, хлороформе, четыреххлористом углероде, бензоле, толуоле, этиловом простом эфире и н-гект сане, кроме того баумицин Ва. растворим в воде аморфный красный порошок

Staph.aureus

Fp A209P1,56

Staph.aureus Smith 0,78

Продолжение табл.1

100 50

50 50

3,12 1,56 БаумицинАА R значения С:М 10;10,070,01 С:М:В 7;3:30,390,14 С:МгР 90:10:10,180,10 C:Mift 80:20:40,640,30 Реакция Кислый водный и метанольный раствор является красным, а в щелочной среде становится красновато-пурпурным. Баумицин В и Bj. дает положительную нингидриновую реакцию, и не восстанавливает раствор Фехлинга. Баумицин. , - . --I УФ- и видимый спектр 234,5(552); 253(385);234(575); 252(414); поглощения И макси-290(132); 476(179);290(130); 478(176); мальный ()495(181); 530(101)495(183); 530(120) в МеОН в 0.1N НС1-МеОН234(580); 253(397); 234(616); 253(419); 290(140); 479(182); 290(145); 476(195); .495(184); 530(100)494(191); 529(105) В О,IN NaOH-MeOH 251(453); 350(65);251(499); 350(74); 556(206); 594(195)556(231); 594(218). Баумицины А и А., В. и В явля-45 Бау-мицины А,А,, Г и B,j обладаются стереоизомерами относительно ют противомикробной активностью проДРУг друга и могут легко различаться тив широкого спектра микроорганизпо физическим свойствам - различны мов. точки плавления, удельное вращение, коэффициент R для тонкослойной хро-50 Противомикробный спектр баумициматографии, ЯМРтпики. нов ,Aji,B и Bj указаны в табл,2. Минимальные подавляющие кониентрации, . Испытуемый организммкг/мл баумицин баумицин баумицин баумицин Таблица 2 А I Аа ..

11

86731812

Продолже ние табл.2 Острая токсичность. Величины ci D при внутрибрюшном введении антибиот ков следующие: «iD 50 (мг/кг) 1,5-2,5 баумицнн А баумицин баумицин В 75-100 баумицин В Соединения по .предлагаемому изобретению образуют нетоксичные соли адду11сты кислот с различными органическими и неорганическими солеобразующими реагентами, а также нетокси ные комплексы с деоксирибонуклеиновой кислотой. Так, соли-адцукты кис лот, полученные с такими фармацевти чески приемлемыми кислотами, как се ная, фосфорная, соляная, уксусная, ..пропионовая, и кислоты олеиновая, пальмитиновая, лимонная, янтарная, винная, глутаминовая, пантотеновая и т.д., нетоксичные комплексы с деоксирибонуклеиновой кислотой могут применяться так же, как и сами баумициновые соединения. Соли получают выделяют, очищают и формулируют спо собами, обычно применяемыми при при готовлении солей для антибиотиков. Формы для внутрибрюшного введения включают стерильные вЬдные или неводные растворы, суспензии или эмульсии. Они .также могут производи ся в виде стерильных твердых составов, которые могут растворяться в стерильной воде, физиологическом ра творе ИЛИ некоторых других стерильных пригодных для вспрыскивания сре дах непосредственно перед применением. Применяемые предпочтительные количества баумицинового антибиотика необходимо менять в зависимости от применяемого соединения , от типа ко позиции, схемы лечения и типа заболевания. Обычно баумициновые антиби тики впрыскивают животным внутрибрюш но, -внутривенно,подкожно или. местно а человеку внутрибрющно или местно. Следует учитывать многие факторы которые МОДИФИЦИРУЮТ действие лекар ства, нзпрИШр возраст, вес тела, пол, , введения, схему лечения, скорость введения, состояние пациента, комбинацию лекарств, чувствительность и тяжесть заболевания. Введение может осуществляться непрерывно периодически с применением толерантных доз. Оптимальные применяемые количества для данного перечн условий могут быть установле ны специалистами в данн.ой области с применением стандартных методов испытаний. При применении бауМициновых композиций в качестве противомикробного вещества композиции обычно вводят так, чтобы концентрация активного компонента была выье минимальной подавляющей концентрации для конкретного типа организма, который лечат. Пример 1. Готовят питательную среду следующего состава, вес-.%: Картофельный крахмал1 Глюкоза1 Порошок соевых бобов1,5 К,2.НР046,1 - MaSO . 7Н«00,1 MgS04 7Н,,0 NaCI 0,3 Минерал 0,125 (рН 7,4) - CuS04-SH d РеЗОд. 7Н.О мпсц- 4н;:о Zn50. . 0,8 г в 500 мл воды. 50 мл этой среды стерилизуют при 120С в течение 15 мин в 500 мл колбе, которую засевшот косой культурой агара St reptomyces coeru teorubldus ME 130-A4 с помощью платиновой петли. Инкубирование производят в течение 72 ч при 28С на вращающейся мешалке (230 об/мин) . Среду используют в качестве посевного материала. Готовят 7 л следующей среды, и 50 мл порции среды, введенные и стерилизованные в 500 мл колбе, асептически засевают 1 МП указанной культуры. Брожение проводят при в течение 7 дн на вращажяцейся мешалке (230 об./мин). Получают, вес.%: Сахароза4 Порошок соевых бобов 2,5 Nate0,25 Карбонат кальция 0,32 Минерал 0,125 (рН 7,4) Минергш CuS04-5H,,25 г MnS04.-4HrtO1,25 г ,5 г в 500 мл воды. Приготовленный бульон культуры фильтруют для отделения фиЛьтрата культуры и мицелия. Фильтрат трижды экстрагируют 1/5 объема хлороформа. Мицелий трижды экстрагируют 2 л ацетона на 1 кг фильтровой лепешки, и полученный ацетоновый экстракт конентрируют до половины объема при пониженном давлении. Концентра; трижды экстрагируют 2 л хлороформа, объединяют с ::лороормовыМ раствором, который получают з фильтрата к:/льтуры, и концентриуют досуха при пониженном давлении. 10 г маслянистого вещества растворят в 50 мл хлороформа, и образующийя при добавлении 300 мл н-гексана садок центрифугируют в течение мин при 3000 об./мин для удаления еочищенных веществ, растворимых в .

н-гексане. Полученный осадок (1,4 г) растворяют в 100 мл хлороформа и трижды экстрагируют 150 мл 0,01 М уксусной кислоты для получения веществ, растворимых в кислоте. К экстракту добавляют 2 М трис-оксиамино-метано-вый раствор, доводя рН до 8,5, и затем раствор трижды экстрагируют 100 мл хлороформа. В результате получают 230 мг красного сырого порошка (баумициновый комплекс) из хлороформового слоя путем концентрации досуха при пониженном давлении.

П р и М е р 2. Сырой порошок, полученный в примере 1 (230 мг), растворяют в 2 мл смеси хлороформа и метилового спирта (10:1), вводят в колонку длиной 65 см и диаметром 8 см, заполненную 80 г кремневой кислоты, и промывают смесью хлороформа и метилового спирта (10:1). Сначала элюируют баумициновую А -фракцию, а затем последовательно баумицины AJ , В и В,, применяя соответственно в качестве элюирующего раствора .смеси 8:1, 5:1 и 2:1 хлороформа с метиловым спиртом.

После того, как каждую активную фракцию собирают отдельно и концентрируют досуха при пониженном давлении, каждую такую фракцию вводят в колонку длиной 25 см и диаметром 1,8 см, заполненную Сефадекс eLH-20, ц промывают смесью 3:1 толуола и метилового спирта

После концентрирования каждой полученной фракции путем добавления к концентрату н-гексана получают в виде красных порошков 10 мг баумицина А, 18 мг баумицина А 2 3 мг баумицина В и 1 мг баумицина В.

Пример 3. Готовят питательную среду следующего состава, вес.%: Картофельный крахмал 2 Глюкоза2

Дрожжевой

экстракт0,5

Хлористый

натрий- 0,25

Карбонат

кальция0,32

Соевая мука2

Минерал 0,2

(рН 7,4)

- тот же, что и в примере 1. Готовят 8 литров указанной среды, которую распределяют по 50 мл порциями по 500 мл колбам, стерилизуют при в течение 15 мин и засевают 1 мл посевного материа а Streptomyce peuceticus subsp.carneus ATCC21354, приготовленного в соответствии с методикой примера1. Брожение осуществляют на вращающейся мешалке при 28С в течение 6 дн. Бульон культуры фильтруют для отделения мицелия от фильтрата культуры. Осуществляют экстрагирование хлороформом и ацетоном,как и в примере-1, и получают 10 г маслянистого продукта. Последний растворяют в 100 МП метилового спирта и растворимых в н-гексане веществ путем добавления 100 мл н-гексана и получают 1,2 г осадка после удаления. Красный осадок растворяют в 100 мл хлороформа и экстрагируют 600 мл буфера-ацетат натрия (рН 3,0) для получения растворимой в воде субстанции.

После, добавления к экстракту 0,5 М этилендиаминтетрауксусной кислоты в количестве, необходимом для получения раствора 0,01 М, регулируют рН до -величины, равной 8, для чего добавляют 4 М хлоргидрата натрия.

Активные компоненты водного раствора экстрагируют четыре раза 200 мл хлороформа, и затем дважды экстрагируют 500 мл н-бутилового спирта. Получаемые хлороформовый и н-бутанольный слои концентрируют порознь при пониженном давлении и по0лучают 200 мг красного порошка, который в основном представляет собой баумицин в. Этот сырой порошок растворяют в 5 мл хлороформа - метилового спирта, вводят в колонку длиной 23 см и диаметром 3,0 см, заполненную 80 г кремневой кислоты, и промывают смесью 20:1 хлороформа и глетилового спирта.Ваумицин В2 злюируют последовательно смесями 5:1 и 2:1 хлоро0форма и метилового спирта. Фракции баумицинов Bf и В/2 концентрируют порознь при пониженном давлении, в результ 1те чего получают 50 мг баумицина В и 8 мг баумицина В.Полученные баумицины в и в перекристаллизовывают из метилового спирта и получают 31 мг и 6,5 мг кристаллического материала соответственно. При указанном способе получают очень незначительные количества баумицина А и АЗ..

0

Пример 4. Готовят питательную среду следующего состава, вес.%:

Картофельный

1

крахмал

1

Глюкоза

5

1,5

«Соевый порошок

0,1

0,1

MgS04-ТНлО

NaCI

0,3

Минерал

0,125

0

(рН 7,4)

-CuS04-

2,8 г

FeS04-7H 0

0,4 г

МпС1,

3,2 г

2п50д.

0,8 г

в 500 мл воды.

5

50 мл этой среды стерилизуют при 120С в течение 15 мин в 500 мл колбе, которую инокулируют платиновой петлей культуры Streptomyces peuceticus subsp.caestus NRRL-B-5337, выращенной на скошенном агаре.

Инкубирование продолжают в,течение 72 ч при на роторном шейкере (230 об./мин). Готовят 7 л описанной среды и 50 мл среды, находящейся в стерилизованной 500 МП колбе, асептически инокулируют 1 мл указанной посевной культуры. В течение 7 дн на роторном шейкере (230 об./мин) проводят ферментацию при , вес.%: Сахароза Соевый белок Карбонат 0,32 кальция 0,25 Минерал 0,125 (рН 7,4) -CuS04 1,25 г MnClij 1,25 г ZnSO.)5 г 12,5 г в 500 мл воды. Полученный культуральный бульон отфильтровывают для того, чтобы разделить фильтрат культуры и мицелий, фильтрат трижды экстрагируют 1/5 объ ема хлороформа. Мицелий трижды экстр гируют 2 л.ацетона на 1 кг лепешки,и полученный ацетоновый экстракт концентрируют до половинного объема при пониженном давлении. Полученный концентрат трижды экстрагируют 2 л хлороформа, объединяют с хлороформовым раствором, который получгиот для фильтрата культуры, и концентрируют досуха при пониженном давлении, 10 г полученного маслянистого вещества растворяют в 50 мл хло роформа, а осадок, выпавший при добавлении 300 мл н-гексана, центрифугируют в течение 5 мин при 3000 об./мин для удаления примесных веществ, растворимых в н-гексане. Полученный оса док (1,8 г) растворяют в 100 мл хлор форма и экстрагируют трижды 200 мл 0,01 М уксусной кислоты до получения растворимого в кислоте вещества. К этому экстракту добавляют 2 М раствор трис окси-аминометана для установления рН 8,5; а затем этот раствор три ды экстрагируют 100 мл хлороформа. В результате получают 185 г красного н очищенного порошка (комплекс баумици на) из слоя хлороформа после койцентрирования его досуха при пониженном .давлении. 185 г полученного неочищенного по рошка растворяют в 2 МП смеси Зслороформ - метанол (10:1), вводят в колонку 65 см длины и 8 см в диаметре, заполненную 80 г кремневой кислоты, и промывают смесью хлороформ - метаНОЛ (10:1). Вначале элюируют фракцию баумицина А, затем последователь но баумицин А,2, В и (Причем, соответственно, в качестве элюента исполь зуют смесь хлороформ - метанол (8:1, 5:1 и 2:1). Каждую активную фракцию собирают отдельно и концентрируют досуха при пониженном давлении, каждую из этих фракций вносят в колонку 25 см длиной и 1,8 см в диаметр, заполненную Сефадексом J,H-20 и промывают смесью толуол - метанол (3:1). После концентрирования каждой ид фракций, полученного при добавлении н-гексана к концентрат«)м, получают красные порошки: 11 мг баумицина А, 10 мг баумицина А, 7 мг баумицина В и 3 мг баумицина 3. Пример 5. Получают питательную среду следующей композиции, вес.% Картофельный крахмал Глюкоза Соевый порошЪк К2НРО4 MgS04-TH/jO Минерал (рН 7,4) -CuS04. FeS04. Mncii- 4н:о ZnS04. МП воды МП этой среды стерилизуют при в течение 15 мин в 500 мл колбе , которую инокулчруют платиновой петлей культуры Streptotnyces peucetlcus NRRL-B-3826 на скошенном агаре. Инкубирование проводят в течение 72 ч при 28с на роторном шейкере (230 об./мин). Готовят 7 л описанной алее среды и 50 мп среды, распредеенной и стерилизованной в 500 мл колбе, асептически инокулируют 1 мл казанной культуры. Ферментгщию проводят при в течение 7 дн на роорном шейкере (230 об./мин). Полуают, вес.%: Сахароза Соевый белок Карбонат 0,32 кальция Минерал 0,125 (рН 7,4) -CuS04-5HiO 1,25 г 1,25 г МпС1,2.- 4Н„0 ZnS047 0 12,5 г 500 мл воды. Полученный таким образом кульГтуальный бульон отфильтровывают для азделения фильтрата культуры и миелия. Фильтрат трижды экстрагируют /5 объема хлороформа. Мицелий эксрагируют трижды 2 л ацетона на 1 кг епешки, и полученный ацетоновый эксракт концентрируют до половинного бъема при пониженном давлении.. Концентрат трижды экстрагируют л хлороформа/ объединяют с раствоом хлороформа, который получают иэ ильтрата культуры, и концентрируют осуха при пониженном.давлении.10 г олученного маслянистого вещества астворяют в 50мл хлороформа и осаок, образовавшийся при добавлении 300 мл н-гексана, центрифугируют в течение 5 мин со скоростью 300 об. /мин для удаления примесных веществ, растворимых в н-гексане. Полученный оса док (1,2г) растворяют в 100 мл хлоро форма и трижды экстрагируют 150 мл 0,01 М уксусной кислоты до получения растворимых в кислоте веществ. К это му экстракту добавляют 2 М раствор трис-оксиаминометана для установлени рН 8,5, а затем полученный раствор трижды экстрагируют 100 мл хлороформа. Таким образом, получают 97 мг не очищенного порошка красного цвета (комплекс баумицина) из слоя хлороформа путем концентрирования досуха при пониженном давлении. Полученный таким образом неочищенный продукт (97 мг) растворяют в 2мл смеси хлороформ.- метанол (10:1 вводят в колонку длиной 65 см и диаметром 8 см, заполненную 60 г кремневой кислоты, и промывают смесью хлоррформ - метанол (10:1).В начале /элюируют фракцию А, затем последовательно фракции баумицина А, В и Вп, при этом используют в качестве элюёнта смеси хлороформ - метанол (,..5:1 и 2:1) . После того, как каждую из активных фракций собирают отдельно и концентрируют досуха при пониженном давлении, их вводят в колонки 25 см длиной, 1,8 см диаметром, заполненные Сефадексом dH-20, и промывают смесью толуол - метанол 3:1. После концентрирования каждой из фракций, полученных ранее,после добавления к концентратам н-гексана получгиот крас ные порошки: 10 мг баумицина А, 5 м баумицина A/j, 1 мг баумицина В и 3мг баумицина В,2. Предлагаемый способ позволяет получить антрациклиновые гликозидные антибиотики баумицина А и В. Формула изобретения Способ получения баумицина А и В бщей формулы 5 О оИ о ОЯ (баумицин А) 0/S (баумицин в) отличающийся тем, что штамм Streptomyces coeruleorubidus ME 130-А4 (АТСС 31276),Streptomyces peucetlcus subsp.carneus ATCC 21354, Streptomyces peuceticus subsp.caestus NRRL-B-5337 или Streptomyces peucetjcus NRRL-B-3826 культивируют в аэробных условиях на питательной , де, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли с последующим выделением целевого npojD;yKTa,npd необходимости антибиотик хроматографически разделяют на компоненты А и В и переводят в соли.